一种AKK菌的选择培养基及其应用

本发明属于微生物，具体地涉及akk菌(akkermansia muciniphila，akk)的选择培养基及其在akk菌筛选中的应用。

背景技术：

1、akkermansia muciniphila(a.muciniphila，嗜粘蛋白阿克曼氏菌，本文简称为akk菌)属于疣微菌门，是一种革兰氏阴性菌，广泛存在于脊椎动物中，主要定植在盲肠与结肠的黏膜黏液层中，占肠道微生物总量的1％-3％。akk菌在肠道中生长能够利用宿主分泌的粘蛋白为“食”，从而通过竞争性排斥的方式在肠道内定居并保护肠道免受病原体的侵害。

2、近几年研究表明，akk菌对多种病理均显示出有益的作用，已发现的药效作用十分广泛。已经被广泛报道具有涉及抗癌、延缓衰老、降脂消炎、提升免疫力、调节神经系统功能等多种功效。有关akk菌产生药效作用的机制探究，发现通过不同的培养方式，不同的使用方法都有其独特又丰富的药理作用，并且多在动物实验中已证实其安全性，也已有研究表明人类志愿者口服1×1010剂量的不论是活菌还是死菌的akk菌都是非常安全，未出现不良反应。这使得akk菌成为最具潜力的下一代益生菌之一。

3、虽然akk菌具有多种潜在用途，但其作为严格厌氧菌分离纯化十分困难。自2004年akk菌首次被derrien等人从人类粪便中分离得到以来，用于其分离的培养基——粘蛋白基础培养基一直沿用至今。然而该培养基成分复杂，需要多种酸液、碱液、维生素以及微量元素溶液，这给akk菌的筛选带来了极大的不便。寻找简单合适的培养基，用于akk菌的筛选，对于促进新的akk菌的发现以及akk菌的应用开发具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种akk菌的选择培养基。

2、本发明的第二个目的是提供上述一种akk菌的选择培养基的应用。

3、本发明的技术方案概述如下：

4、一种akk菌的选择培养基，用下述原料制成：称取38.5g脑心浸液肉汤、2-4g黏蛋白、5-10g n-乙酰-葡萄糖胺、2.5-5g l-苏氨酸、0.5-1g的l-半胱氨酸盐酸盐、0.01 -0.05g氯化血红素、0.1 -0.5g的维生素k1、0.002-0.008g的万古霉素、0.001-0.005g的庆大霉素和0.002-0.006g的卡那霉素加水至1l。

5、上述一种akk菌的选择培养基的应用，包括如下步骤：

6、(1)使用装有akk菌的选择培养基的无菌离心管加入采取于健康受试人员或动物的新鲜粪便，厌氧培养3天，得到富集菌液，对富集菌液用水进行梯度稀释，得到稀释液；

7、(2)将步骤(1)获得的稀释液涂布于含有琼脂的akk菌的选择培养基中厌氧培养2天，进行初筛，得到单菌落；

8、(3)挑取步骤(2)得到的单菌落，于含有琼脂的akk菌的选择培养基上划线厌氧培养2天，得到分离的菌株；

9、(4)通过设定阳性对照，从形态学和分子鉴定上对分离的菌株进行akk菌株鉴定；

10、所述含有琼脂的akk菌的选择培养基是在一种akk菌的选择培养基中加入终质量含量为1.5％的琼脂。

11、所述厌氧培养的体系由体积含量85％氮气、10％氢气和5％二氧化碳组成。

12、本发明的优点：

13、本发明的一种akk菌的选择培养基，能够选择性筛选出akk菌，提高akk菌筛选效率。相比于常规的akk菌筛选培养基——粘蛋白基础培养基，本发明的培养基成分简单，能够极大简化培养基配制过程，提高akk菌筛选效率。

技术特征：

1.一种akk菌的选择培养基，其特征在于用下述原料制成：称取38.5g脑心浸液肉汤、2-4g黏蛋白、5-10g n-乙酰-葡萄糖胺、2.5-5g l-苏氨酸、0.5-1g的l-半胱氨酸盐酸盐、0.01-0.05g氯化血红素、0.1-0.5g的维生素k1、0.002-0.008g的万古霉素、0.001-0.005g的庆大霉素和0.002-0.006g的卡那霉素加水至1l。

2.权利要求1的一种akk菌的选择培养基的应用，其特征在于包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述厌氧培养的体系由体积含量85％氮气、10％氢气和5％二氧化碳组成。

技术总结
本发明公开了一种AKK菌的选择培养基及其应用，其培养基，用下述原料制成：称取38.5g脑心浸液肉汤、2‑4g黏蛋白、5‑10g N‑乙酰‑葡萄糖胺、2.5‑5g L‑苏氨酸、0.5‑1g的L‑半胱氨酸盐酸盐、0.01‑0.05g氯化血红素、0.1‑0.5g的维生素K1、0.002‑0.008g的万古霉素、0.001‑0.005g的庆大霉素和0.002‑0.006g的卡那霉素加水至1L。本发明的一种AKK菌的选择培养基，能够选择性筛选出AKK菌，提高AKK菌筛选效率。相比于常规的AKK菌筛选培养基，本发明的培养基成分简单，能够极大简化培养基配制过程。

技术研发人员：乔建军,吴昊,易德伟,寇佳祥,刘柯,钱永清,刘江波
受保护的技术使用者：天津大学浙江研究院（绍兴）
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17