一组抗BCMA的纳米抗体及其应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一组抗bcma的纳米抗体及其应用。

背景技术：

1、多发性骨髓瘤(multiple myeloma，mm)是浆细胞异常增生的恶性肿瘤病，常伴有多发性溶骨性损害，包括高钙血症、贫血、肾脏损害，而且对细菌性感染的易感性增高，正常免疫球蛋白的生成受抑，发病率估计为2～3/10万。

2、目前多发性骨髓瘤采用免疫调节剂，蛋白酶抑制剂，激素类化疗药，从临床治疗上来看，虽表现出了很好的疗效，却依旧没有解决病患复发率高和药物有效清除率低等问题。针对pi和imids均无效的复发难治性多发性骨髓瘤(rrmm)患者存活期仅约为13个月，因此，开发治疗该疾病的新疗法至关重要。

3、bcma是tnf受体家族的一名成员(tnfγ-sf17)，全称为b细胞成熟抗原，也称cd269，仅表达在成熟b细胞表面，由185个氨基酸残基组成的非糖基化的iii型整合膜蛋白，mrna长为1.2kb。在管理b细胞的成熟与b细胞分化成浆细胞的过程中扮演着至关重要的角色。bcma具有受体特异性，结合肿瘤坏死因子(配体)超家族成员13b(tnfsf13b/tall-1/baff)，并导致nf-κb和mapk8/jnk活化。该受体还与各种traf家族成员结合，介导细胞存活和增殖的信号。在多发性骨髓瘤中bcma的表达增加，促增殖信号增强，最终癌化。因此在多发性骨髓瘤细胞上bcma的表达水平显著高于健康的浆细胞。

4、目前靶向bcma的疗法主要包括抗体药物偶联物(antibody-drug conjugate，adc)、双特异性抗体(bispecific antibody，bsab)和嵌合抗原受体t细胞免疫疗法(chimeric antigen receptor t-cells，car-t)三大阵营，以bcma为靶点的免疫疗法在临床前及临床研究中疗效显著，尤其是car-t技术，能够以非主要组织相容性复合体依赖性方式特异识别肿瘤抗原而发挥强大的抗肿瘤免疫效应。但治疗过程中出现的crs、脱靶效应等不良反应仍是亟待解决的问题，而利用抗体靶向治疗mm，分子量太大药物不能穿透血管，到达病灶，治疗效果也没有达到特别好的疗效，同时，相关技术的单克隆抗体上的fc片段于其他正常细胞有非特异性结合，致使药物不能特异性靶向目的细胞疗效减弱，副作用大。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种抗bcma的纳米抗体。

2、本发明还提出一种编码上述抗bcma的纳米抗体的核酸分子。

3、本发明还提出一种与上述核酸分子相关的生物材料。

4、本发明还提出上述纳米抗体、核酸分子、生物材料的应用。

5、本发明还提出了一种融合蛋白。

6、本发明还提出了上述融合蛋白的应用。

7、本发明还提出一种用于治疗与bcma相关疾病的药物。

8、本发明还提出一种bcma检测剂。

9、根据本发明的第一方面，提出了一种抗bcma的纳米抗体，包括含cdr1、cdr2和cdr3的重链可变区；所述cdr1、cdr2和cdr3的结构为a1)～a4)中的至少一种：

10、a1)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no:13、seq id no:15、seq idno:17所示；

11、a2)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no:20、seq id no:22、seq idno:24所示；

12、a3)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no:13、seq id no:26、seq idno:27所示；

13、a4)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no:28、seq id no:30、seq idno:32所示。

14、在本发明的一些实施方式中，所述纳米抗体还包括骨架区序列fr。

15、在本发明的一些实施方式中，所述骨架区序列选自seq id no:12、seq id no:14、seq id no:16、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:21、seq id no:23、seq id no:25、seq id no:19、seq id no:29和seq id no:31中的至少一种。

16、在本发明的一些实施方式中，所述纳米抗体的氨基酸序列包括b1)～b3)中的至少一种：

17、b1)如seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7或seq id no:8所示序列；

18、b2)如seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7或seq id no:8所示序列经过一个或几个氨基酸的取代和/或缺失和/或添加，且与seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7或seq id no:8所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列；

19、b3)与seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7或seq id no:8所示序列具有80％、85％或90％以上的同源性，且与seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7或seq idno:8所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列。

20、根据本发明的第二方面，提出了一种核酸分子，所述核酸分子编码上述抗bcma的纳米抗体。

21、在本发明的一些实施方式中，所述核酸分子的序列包含：

22、c1)如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4所示的核苷酸序列；或

23、c2)将如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加，且与seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4所示的核苷酸序列所示的编码相同蛋白的核苷酸序列；或

24、c3)与seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4具有80％、85％或90％以上的同源性，且与seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4所示的核酸分子编码相同蛋白的核苷酸序列。

25、根据本发明的第三方面，提出了与所述的核酸分子相关的生物材料，所述生物材料为(1)-(3)中任一种；

26、(1)表达盒，含有上述的核酸分子；

27、(2)重组载体，含有上述的核酸分子或(1)中表达盒；

28、(3)重组细胞，含有上述的核酸分子、(1)中表达盒或(2)中重组载体。

29、根据本发明的第四方面，提出了上述纳米抗体、核酸分子、生物材料的应用，所述应用为在制备治疗与bcma相关疾病的药物中的应用。

30、在本发明的一些实施方式中，所述疾病包括血液恶性肿瘤。

31、在本发明的一些实施方式中，所述疾病血液恶性肿瘤包括多发性骨髓瘤。

32、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备bcma的检测试剂中的应用。

33、根据本发明的第五方面，提出了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括上述纳米抗体和假单孢杆菌外毒素蛋白。

34、在本发明的一些实施方式中，所述假单孢杆菌外毒素序列为pe38序列。

35、在本发明的一些实施方式中，所述编码假单孢杆菌外毒素蛋白的序列选自seq idno:9、seq id no:10和seq id no:11中的至少一种。

36、在本发明的一些实施方式中，所述融合蛋白通过将上述纳米抗体和假单孢杆菌外毒素蛋白通过连接序列连接得到。

37、在本发明的一些实施方式中，所述连接序列包括(gggs)2。

38、根据本发明的第六方面，提出了上述融合蛋白在制备治疗与bcma相关疾病的药物中的应用。

39、在本发明的一些实施方式中，所述与bcma相关疾病包括血液恶性肿瘤。

40、在本发明的一些实施方式中，所述血液恶性肿瘤包括多发性骨髓瘤。

41、根据本发明的第七方面，提出了一种用于治疗与bcma相关疾病的药物，所述药物包括上述纳米抗体、核酸分子、生物材料或上述融合蛋白。

42、在本发明的一些实施方式中，所述药物还包括假单孢杆菌外毒素(pe38)。

43、在本发明的一些实施方式中，所述假单孢杆菌外毒素(pe38)序列选自seq id no:9、seq id no:10和seq id no:11中的至少一种。

44、在本发明的一些实施方式中，所述药物还包括药用载体和/或药用辅料。

45、在本发明的一些实施方式中，所述药用载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、甜味剂和香味剂中的至少一种。

46、在本发明的一些实施方式中，所述与bcma相关疾病包括血液恶性肿瘤。

47、在本发明的一些实施方式中，所述血液恶性肿瘤包括多发性骨髓瘤。

48、根据本发明的第八方面，提出了一种bcma检测剂，所述bcma检测剂包括上述纳米抗体、核酸分子、生物材料。

49、根据本发明的一些实施方式，至少具有以下有益效果：本发明方案提供的抗bcma的纳米抗体能显著与人多发性骨髓瘤细胞结合，亲和力高，为后续治疗人多发性骨髓瘤提供了可供选择的抗体；同时本发明制备的纳米抗体可特异性识别并结合bcma，具有潜在的治疗与bcma相关的疾病的效用；本发明方案还将制备得到的抗bcma的纳米抗体与假单孢杆菌外毒素(pe38)序列制备得到融合蛋白，可以有效的降低人多发性骨髓瘤细胞的存活，用于治疗人多发性骨髓瘤，为开发治疗人多发性骨髓瘤的药物提供了新的方向。