拟穴青蟹致敏原Scyp9衍生物及其应用

本发明属于生物工程，具体涉及一种拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物及其应用。

背景技术：

1、常见的食物过敏是由针对食物成分的特异性免疫球蛋白e抗体介导的ⅰ型变态反应。由于摄入某种具有免疫原性的食物后，出现皮肤和肠道疾病，严重时会危及生命。

2、拟穴青蟹(scylla paramamosain)是我国渔业和水产养殖的商业重要螃蟹资源。由于其丰富的营养价值和鲜美口感，深受消费者喜爱，但由其引发的过敏性疾病仍缺少治疗方法。

3、目前，致敏原特异性免疫治疗法已成为治疗由免疫球蛋白e介导的过敏性疾病的常用方法。简单地说，就是将致敏原制品与患者进行反复接触，提高患者对于致敏原的免疫耐受，致使患者再次接触致敏原后，过敏症状会有所减轻或消失。利用低致敏性的致敏原制品，可以大大减少免疫治疗中的副作用，提高治疗的安全性。scy p 9是拟穴青蟹中具有较高的过敏反应性的致敏原，因此，对蟹中致敏原scy p 9的改造及其用于免疫治疗的效果仍有待研究。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术中的技术问题之一。

2、为此，在本发明的第一个方面中，提供了一种拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

3、根据本发明的实施例，所述衍生物是将野生型scy p 9氨基酸序列的n端(氨基酸1～10位)、c端(氨基酸839～848位)、2个重要线性表位区域(氨基酸187～205位和氨基酸363～377位)删除及1个重要构象表位关键氨基酸(第270位苏氨酸)突变为丙氨酸，如此使得scy p 9衍生物相比于野生型scy p 9，其在过敏机体内致敏性显著降低，可开发制备用于预防或治疗蟹类过敏疾病的药物、抗原特异性免疫治疗的制剂，可以大大减少免疫治疗中的副作用，提高治疗的安全性。

4、在本发明的第二方面中，提供了一种编码拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物的基因，所述基因的核苷酸序列如seq id no：2所示。

5、根据本发明的实施例，所述衍生物基因与野生型致敏原scy p 9相比，其碱基1～30，561～615，1089～1131，2517～2544处被删减，810处a被突变g。

6、在本发明的第三个方面中，提供了一种重组载体，其包含编码上述拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物的基因。

7、在本发明的第四方面中，根据本发明实施例，提供了一种制备拟穴青蟹致敏原scyp 9衍生物的方法，包括以下步骤：

8、(1)以拟穴青蟹cdna为模板，seq id no：3、seq id no：4为引物进行重叠延伸pcr第一轮扩增，获得第一产物；

9、(2)以所述第一产物为模板，分别以seq id no：7、seq id no：6和seq id no：5、seq id no：12为引物进行重叠延伸pcr第二轮扩增，获得第二产物；

10、(3)以所述第二产物为模板，seq id no：7、seq id no：12为引物进行重叠延伸pcr第三轮扩增，获得第三产物；

11、(4)以所述第三产物为模板，分别以seq id no：7、seq id no：8和seq id no：9、seq id no：10和seq id no：11、seq id no：12为引物进行重叠延伸pcr第四轮扩增，获得第四产物；

12、(5)以所述第四产物为模板，seq id no：7、seq id no：12为引物进行重叠延伸pcr第五轮扩增，经切胶回收，与peasy-t1载体连接，转入escherichia coli trans-t1中，获得衍生物基因；

13、(6)将所述衍生物基因与pet 22b载体连接，构建重组载体；

14、(7)将所述重组载体转入宿主菌，诱导其表达并纯化蛋白，以获得所述衍生物。

15、根据本发明的实施例，重叠延伸pcr的手段对野生型scy p 9基因进行表位删除和突变，获得衍生物基因与表达载体pet 22b重组后转入escherichia coli bl21(de3)中，成功构建scy p 9衍生物基因的重组菌株，诱导重组菌株表达纯化，获得低致敏性的scy p 9衍生物。

16、在本发明的第五方面中，本发明还提出了上述的拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物在制备缓解或治疗甲壳类过敏性疾病的药物中的应用。

17、在本发明的第六方面中，本发明还提出了上述的拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物在制备抗原特异性免疫治疗的制剂中的应用。

18、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.一种拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.一种编码如权利要求1所述的拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no：2所示。

3.一种重组载体，其特征在于，包含如权利要求2所述的基因。

4.一种制备拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.如权利要求1所述的拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物在制备缓解或治疗甲壳类过敏性疾病的药物中的应用。

6.如权利要求1所述的拟穴青蟹致敏原scy p 9衍生物在制备抗原特异性免疫治疗的制剂中的应用。

技术总结
本发明提供了一种拟穴青蟹致敏原Scy p 9衍生物及其应用，所述衍生物的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述衍生物是将野生型Scy p 9氨基酸序列的N端(氨基酸1～10位)、C端(氨基酸839～848位)、2个重要线性表位区域(氨基酸187～205位和氨基酸363～377位)删除及1个重要构象表位关键氨基酸(第270位苏氨酸)突变为丙氨酸，如此使得Scy p 9衍生物相比于野生型Scy p 9，其在过敏机体内致敏性显著降低，可开发制备用于缓解或治疗蟹类过敏疾病的药物、抗原特异性免疫治疗的制剂，可以大大减少免疫治疗中的副作用，提高治疗的安全性。

技术研发人员：刘光明,何欣蓉,李东晓,李发杰,杨阳,亢帅,陈业欣
受保护的技术使用者：集美大学
技术研发日：
技术公布日：2024/5/6