一种道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法与流程

本发明涉及真菌的培育以及分离，尤其涉及一种道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法。

背景技术：

1、伴生菌又称为伴生真菌(companion fungus)，是指一些与植物共生的非致病性微生物，它们能够与植物合作，从而实现相互促进。伴生菌根据其与植物的互动形态，伴生菌对植物生长的影响：

2、促进植物生长：伴生菌与植物共生的一个主要作用是提供养分。植物需要从土壤中吸收营养，而土壤中的养分主要以难以吸收的无机盐形式存在，先进的内生菌可以将空气中的氮气转化为植物可直接吸收的氨气。

3、提高植物耐性：伴生菌能够提高植物的耐逆性，有助于缓解植物在不良环境中的生长压力。例如，磷酸菌能够抵御土壤酸化，液体身心菌菌根有助于防止土壤干旱，而枝孢菌和拟丝酵母干本身就能够抗击大气污染和紫外线辐射等不良因素。

4、抵御病害和污染：伴生菌对植物的养分转化能力，促进植物的生长，从而可以缩短植物的生长周期，提高植物的产量和品质。同时，伴生菌还能被用于防治植物的病害和污染。

5、促进植物免疫：伴生菌能够刺激植物的免疫系统，提高植物抵御病虫害的能力。例如，内生菌可以向植物注入小分子物质和激素，引发植物的光合作用和抗病反应，从而保护植物的生长。伴生菌是植物生长过程中不可或缺的微生物，其与植物共生的关系十分重要。

6、毛慈菇为兰科植物，每一颗果夹中都含有成千上万颗种子，虽然种子多，但是种子天生缺乏胚乳等组织，且种皮还很厚实，在自然状态下萌发率很低。所以在人工培植毛慈菇过程中，在毛慈菇育苗阶段需要加入伴生菌，这样才能提高毛慈菇出芽率。

7、中国专利cn202310132651曾公开过一种毛慈菇专用伴生菌培养方法，该专利所揭示的技术方案存在培养周期长、成本高、抗病抗逆性差等弊端。同时该专利主要还是停留在实验室阶段，技术难度高，不利于向广大的农户推广。所以，现在还没有一种有效的毛慈菇伴生菌培育方法，使得培育出来的毛慈菇伴生菌能提高毛慈菇的出芽率。因此，一种毛慈菇伴生菌培育方法应运而生。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对背景技术中存在的问题，提供一种毛慈菇伴生菌培育方法，该方法能培育出有效的毛慈菇伴生菌，使得在毛慈菇育苗过程中能提高毛慈菇的出芽率，能促进毛慈菇的生长以及使得毛慈菇具有抵御病害的能力。

2、为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

3、一种道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，包括以下步骤：

4、步骤一，培育一级菌种，所述一级菌种是从野生的毛慈菇生长地采取生长地的从腐烂木材中分离而得，分离具有显著的特征：拉丝明显中取有用的菌种作为一级菌种；

5、步骤二，培育二级菌种，将二级菌种培养基置于培养皿中，然后植入一级菌种得到二级菌种；

6、步骤二，培育三级菌种，将三级菌种培养基置于培养皿中，然后植入二级菌种得到三级菌种，所述三级菌种即为可用的毛慈菇伴生菌；

7、其中，所述二级菌种培养基包括：玉米、木屑、腐蚀土、麦麸、白砂糖、食品级石膏粉、硫酸镁、磷酸二氢钾；

8、所述三级菌种培养基包括：木料、腐蚀土、麦麸、白砂糖、食品级石膏粉、硫酸镁、磷酸二氢钾。

9、优选地，所述二级菌种培养基按照重量组分的配方如下：玉米30-40份；木屑40份；腐蚀土15份；麦麸3份；白砂糖1份；食品级石膏粉1份；硫酸镁0.1份；磷酸二氢钾0.1份。

10、优选地，所述三级菌种培养基按照重量组分的配方如下：木料75份；腐蚀土15份；麦麸8份；白砂糖1份；食品级石膏粉1份；硫酸镁0.1份；磷酸二氢钾0.1份。

11、优选地，将二级菌种培养基置于培养皿中以及将三级菌种培养基置于培养皿中后需要在高温环境下进行灭菌处理后才能接种，高温灭菌温度为100摄氏度，其中，二级菌种培养基置于培养皿中灭菌时间为36小时，三级菌种培养基置于培养皿中灭菌时间为24小时。

12、优选地，培育二级菌种需要在28-32摄氏度、相对湿度为75％的环境下培育，培育时间为15-20天。

13、优选地，二级菌种培育结束后，需要将二级菌种连同培养皿一起放入冰柜内保存，冰柜内温度为负2-负6摄氏度。

14、优选地，培育三级菌种需要在常温、相对湿度为70％的环境下培育，培育时间为45-50天。

15、优选地，三级菌种培育结束后，需要将二级菌种连同培养皿一起放入冰柜内保存，冰柜内温度为负2-负6摄氏度。

16、优选地，培育二级菌种、培育三级菌种均要在无菌无尘环境下进行。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

18、本发明的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法采用从野生的毛慈菇生长地的泥土中分离而得的菌株作为一级菌种，一级菌种又经过二级菌种培养：玉米、木屑、腐蚀土、麦麸、白砂糖、食品级石膏粉、硫酸镁、磷酸二氢钾的培育得到二级菌种；二级菌种又经过三级菌种培养基：木料、腐蚀土、麦麸、白砂糖、食品级石膏粉、硫酸镁、磷酸二氢钾的培育得到三级菌种。通过这种多级培养的方式能大大提高毛慈菇伴生菌培育的成功率，并且所培育出来的毛慈菇伴生菌在毛慈菇育苗过程中能显著提高了毛慈菇种子的萌发率，提高了毛慈菇的栽种成活率。

19、同时，在毛慈菇栽种成活后，该方法所培育出来的毛慈菇伴生菌能促进毛慈菇的生长、提高毛慈菇耐性、以及能使得毛慈菇具有抵御病害和污染的能力，能促进毛慈菇免疫能力。

技术特征：

1.一种道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：所述二级菌种培养基按照重量组分的配方如下：玉米30-40份；木屑40份；腐蚀土15份；麦麸3份；白砂糖1份；食品级石膏粉1份；硫酸镁0.1份；磷酸二氢钾0.1份。

3.根据权利要求1所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：所述三级菌种培养基按照重量组分的配方如下：木料75份；腐蚀土15份；麦麸8份；白砂糖1份；食品级石膏粉1份；硫酸镁0.1份；磷酸二氢钾0.1份。

4.根据权利要求1所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：将二级菌种培养基置于培养皿中以及将三级菌种培养基置于培养皿中后需要在高温环境下进行灭菌处理后才能接种，高温灭菌温度为100摄氏度，其中，二级菌种培养基置于培养皿中灭菌时间为36小时，三级菌种培养基置于培养皿中灭菌时间为24小时。

5.根据权利要求1所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：培育二级菌种需要在28-32摄氏度、相对湿度为75-80％的环境下培育，培育时间为15-20天。

6.根据权利要求5所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：二级菌种培育结束后，需要将二级菌种连同培养皿一起放入冰柜内保存，冰柜内温度为负2-负6摄氏度。

7.根据权利要求1所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：培育三级菌种需要在常温、相对湿度为70％的环境下培育，培育时间为45-50天。

8.根据权利要求7所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：三级菌种培育结束后，需要将二级菌种连同培养皿一起放入冰柜内保存，冰柜内温度为负2-负6摄氏度。

9.根据权利要求1所述的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，其特征在于：培育二级菌种、培育三级菌种均要在无菌无尘环境下进行。

技术总结
本发明公开了一种道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法，属于真菌的培育以及分离技术领域。具体包括培育一级菌种、培育二级菌种、培育三级菌种。二级菌种培养基包括：玉米、木屑、腐蚀土、麦麸、白砂糖、食品级石膏粉、硫酸镁、磷酸二氢钾；三级菌种培养基包括：木料、腐蚀土、麦麸、白砂糖、食品级石膏粉、硫酸镁、磷酸二氢钾。本发明的道地中药材毛慈菇伴生菌培育方法能培育出有效的毛慈菇伴生菌，使得在毛慈菇育苗过程中能提高毛慈菇的出芽率，能促进毛慈菇的生长以及使得毛慈菇具有抵御病害的能力。

技术研发人员：于以祥,于以和,于轩俊
受保护的技术使用者：安顺市宝林科技中药饮片有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24