温敏阳离子聚合物材料在制备核酸检测产品中的用途的制作方法

本发明属于核酸检测，具体涉及一种温敏阳离子聚合物材料在制备核酸检测产品中的用途。

背景技术：

1、核酸检测是众多疾病确诊的金标准，现有的核酸检测大多由专业医疗机构在专业场地由经过培训的专门人员采用专业设备来实现，这增加了核酸检测所需要的时间、空间和人员成本。在很多应用场合，需要开展及时快速现场的核酸检测，传统的pcr-荧光的金标准方法无法满足需求，因此亟需开发更为廉价和便捷的核酸检测新方法。考虑到通常在现场难以配备昂贵的设备和专业人员操作，这进一步要求所采用的检测方法能够易于实施，并且其检测结果易于判断。能够用于现场的对目标核酸的识别、扩增和信号转化已经有众多合适的方法，但是能够用于现场的核酸检测结果判断方法却比较局限。通常基于荧光的信号判断方法虽然具有较高的灵敏度，但是仍然需要配备专门的设备，如荧光分析系统才能实施，无法用肉眼辨识。相比而言，可视化的方法在不需要设备，或者仅需借助手机的场合应用，更加适合普通用户核酸自检的需求。可视化的方法主要包括颜色判断法(colorimetry)和浊度法(turbidimetry)两种，现有的大部分方法主要是基于颜色判断，如基于金纳米颗粒的聚集变色从酒红色变为紫色甚至蓝色，基于ph值变化，从红色变为黄色。但是这类方法对环境光的依赖性较强，对色盲或者色弱患者不友好，在一定环境下辨析困难，对核酸检测的灵敏度有限；同时金纳米颗粒相关试剂价格昂贵，储运要求特殊，对检测体系成分有特殊要求，纳米颗粒容易聚集变质。相反，浊度法受色彩辨析和光强的影响较小，因此更为可靠，但是现有的基于焦磷酸盐沉淀产生浑浊从而进行浊度判断的方法灵敏度相对于颜色判断法更低，焦磷酸盐产生量和核酸聚合反应当量比是1∶1，信号转化效率低，导致该检测方法灵敏度差，检测限不理想，其发展受到局限。如何开发一种全新的核酸浊度试剂能够与核酸扩增相配合从而高灵敏地探知目标核酸序列具有重要的应用价值。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种温敏阳离子聚合物材料在制备核酸检测产品中的用途，以克服现有技术的不足。

2、为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

3、本发明实施例提供了一种温敏阳离子聚合物材料在制备核酸检测产品中的用途，所述温敏阳离子聚合物材料包括温敏阳离子聚合物和/或温敏阳离子聚合物的复合物，所述温敏阳离子聚合物至少包括阳离子基团及温敏单元，所述温敏阳离子聚合物至少能够与核酸结合产生浊度信号的变化；所述温敏单元源自n-异丙基丙烯酰胺、n-乙烯基异丁酰胺、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯中任意一种或多种的组合。

4、在一些较为具体的实施方案中，所述温敏阳离子聚合物包括具有如式(i)～(vi)中任一者所示结构的化合物：

5、

6、其中，m∶n为20∶1～5∶1。

7、本发明实施例还提供了一种用于核酸的浊度可视化检测的产品，其包括温敏阳离子聚合物材料，所述温敏阳离子聚合物材料包括温敏阳离子聚合物和/或温敏阳离子聚合物的复合物，所述温敏阳离子聚合物至少包括阳离子基团及温敏单元，所述温敏阳离子聚合物至少能够与核酸结合产生浊度信号的变化；所述温敏单元源自n-异丙基丙烯酰胺、n-乙烯基异丁酰胺、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯中任意一种或多种的组合。

8、本发明实施例还提供了一种核酸的可视化检测方法，其包括：

9、将待检测核酸样品与前述用于核酸的浊度可视化检测的产品混合获得水相混合物，之后对水相混合物进行加热处理，并根据水相混合的浊度变化实现对核酸的可视化检测。

10、本发明实施例还提供了一种鉴别核酸分子和dntp的方法，其包括：

11、将待检测核酸样品与前述用于核酸的浊度可视化检测的产品混合获得水相混合物，之后对水相混合物进行加热处理，并根据水相混合的浊度变化实现对核酸分子和dntp的鉴别。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

13、(1)与现有的浊度法检测相比，本发明中的用于核酸的浊度可视化检测的产品的灵敏度可达到1拷贝/25微升，可以与pcr金标准相比，在同样的核酸扩增条件下形成的浊度升高程度远高于焦磷酸盐方法，能够满足普通人群可视化的需核酸检测应用的需求；

14、(2)与颜色法检测相比，发明中的温敏阳离子聚合物材料用于核酸检测时不受色盲色弱和偏色的影响，结果解读直观，浊度差异大，利于商业化；

15、(3)与荧光检测法相比，本发明中的用于核酸的浊度可视化检测的产品检测时不需要光源和光学检测器，不需要软件识读，不需要昂贵的荧光修饰试剂，成本低，不耗电；

16、(4)本发明中的用于核酸的浊度可视化检测的产品材料合成容易，成本较低，仅需室温保存，稳定性佳，使用方便，仅需一次加入，结果可二次判断，更可靠；

17、(4)本发明中的温敏阳离子聚合物材料受盐离子浓度影响较小，可与各种核酸扩增原理相结合。

技术特征：

1.温敏阳离子聚合物材料在制备核酸检测产品中的用途，其特征在于：所述温敏阳离子聚合物材料包括温敏阳离子聚合物和/或温敏阳离子聚合物的复合物，所述温敏阳离子聚合物至少包括阳离子基团及温敏单元，所述温敏阳离子聚合物至少能够与核酸结合产生浊度信号的变化；所述温敏单元源自n-异丙基丙烯酰胺、n-乙烯基异丁酰胺、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯中任意一种或多种的组合。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述阳离子基团包括氨基和/或胍基；

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的用途包括：将所述核酸检测产品与待检测核酸样品在水相体系中混合，并通过采用浊度法实现对核酸的检测；

4.一种用于核酸的浊度可视化检测的产品，其特征在于，包括温敏阳离子聚合物材料，所述温敏阳离子聚合物材料包括温敏阳离子聚合物和/或温敏阳离子聚合物的复合物，所述温敏阳离子聚合物至少包括阳离子基团及温敏单元，所述温敏阳离子聚合物至少能够与核酸结合产生浊度信号的变化；所述温敏单元源自n-异丙基丙烯酰胺、n-乙烯基异丁酰胺、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯中任意一种或多种的组合。

5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于：所述阳离子基团包括氨基和/或胍基；

6.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，还包括检测溶液；其中，所述检测溶液包括缓冲溶液。

7.一种核酸的可视化检测方法，其特征在于，包括：

8.根据权利要求7所述的可视化检测方法，其特征在于：所述待检测核酸样品包括lamp扩增的待检测核酸样品和/或目标序列待检测核酸样品。

9.根据权利要求7所述的可视化检测方法，其特征在于：所述混合物中温敏阳离子聚合物材料的浓度为0.1～2mg/ml；

10.一种鉴别核酸分子和dntp的方法，其特征在于，包括：

技术总结
本发明公开了一种温敏阳离子聚合物材料在制备核酸检测产品中的用途。所述温敏阳离子聚合物材料包括温敏阳离子聚合物和/或温敏阳离子聚合物的复合物，所述温敏阳离子聚合物至少包括阳离子基团及温敏单元，所述温敏阳离子聚合物至少能够与核酸结合产生浊度信号的变化；所述温敏单元源自N‑异丙基丙烯酰胺、N‑乙烯基异丁酰胺、2‑(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯中任意一种或多种的组合。本发明中的温敏阳离子聚合物材料用于核酸检测时不受色盲色弱和偏色的影响，结果解读直观，浊度差异大，利于商业化；同时本发明中的温敏阳离子聚合物材料受盐离子浓度影响较小，可与各种核酸扩增原理相结合。

技术研发人员：张惠丹,徐碧漪,仝瑞
受保护的技术使用者：苏州绘真生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27