一种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物及其制备方法和应用

本发明属于中药提取、分离领域，具体而言，涉及一种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、蟾皮为我国传统中药，药用价值最早见于粱代陶弘景所著的《名医别录》。据《中药大辞典》记载，蟾皮为中华大蟾蜍bufo bufo gargarizans cantor或黑眶蟾蜍bufomelanosticus schneider除去内脏的干燥皮，具有清热解毒、利水消肿的功效。

2、现代药理学研究表明，蟾皮具有抗肿瘤、抗乙肝病毒等药理作用，临床上主要用于治疗乙型肝炎、慢性支气管炎、喉咙肿痛、痈肿疔毒等病症。化学成分研究显示，蟾皮的化学成分主要包括蟾蜍甾烯、吲哚烷胺类生物碱、核苷及氨基酸等。

3、目前，蟾皮中发现的化学成分种类少，药用价值没有得到更大的发挥。因此，对蟾皮新化合物的开发有待进一步开展。特别是本申请的二种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物及其制备方法和应用还未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物及其制备方法和应用。

2、本方案中一种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物，分子式为：c24h33no5，化学结构式如以下bufogarlides d所示，或分子式为c24h37no3，化学结构式如以下bufogarlides e所示：

3、

4、本申请还提供了所述具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物的制备方法，包括以下步骤：

5、s1、取中华大蟾蜍皮，粉碎后加入90％～95％的乙醇，加热回流提取，多次提取后合并提取液，浓缩得浸膏，浸膏经水悬浮依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，浓缩后得到相应萃取部位；

6、s2、取s1中得到的乙酸乙酯部位经硅胶柱层析初步分离，采用体积比为1:0～0:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，薄层色谱检识后合并相似组分，得到fr.1～fr.16；

7、s3、取s2中得到的fr.12经ods柱色谱进一部分离，采用体积比为1:1～1:0的甲醇-水梯度洗脱得到fr.12.1～fr.12.6；

8、fr.12.3经制备hplc xb-c8柱细分得到fr.12.3.1～fr.12.3.6；

9、其中，fr.12.3.2经半制备hplc waters sunfire c18柱纯化，得到所述bufogarlides d；

10、取s2中得到的fr.10经sephadex lh-20柱色谱分离，经甲醇洗脱得到fr.10.1～fr.10.10；fr.10.4经硅胶柱色谱分离，采用体积比为100:1～1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到fr.10.4.1～fr.10.4.6；

11、其中，fr.10.4.4经ods柱色谱分离，采用体积比为4:6～1:0的甲醇-水梯度洗脱得到所述bufogarlides e。

12、优选的所述hplc xb-c8柱的规格为30×150mm，5μm，64％甲醇/水，8ml/min。

13、优选的所述hplc waters sunfire c18柱的规格为10×250mm，5μm，23％乙腈/水+0.5％醋酸，2.5ml/min。

14、进一步，所述s1中乙醇的浓度优选为95％。且回流提取3次，每次2h，蟾蜍皮于乙醇的质量体积比优选为1:1。

15、本发明的有益效果在于：结合多种色谱学技术对蟾皮乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行反复分离纯化。运用1d和2d核磁及高分辨质谱hresims等对2个新化合物进行结构鉴定，推导出其分子式及结构式。体外药效学研究表明，2个具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物对结肠癌细胞(hct-116)具有较好的抑制作用，ic50分别为0.92μm和10.91μm。

16、所以，含有本发明所述具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物的提取物，或含有如权利要求1所述的具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，都具备在抗肿瘤方面的潜在效果，基于本发明可以获得一种具有药理活性的新的药用化合物；制备方法简单快速，易于控制。

技术特征：

1.一种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物，其特征在于，分子式为：c24h33no5，化学结构式如以下bufogarlides d所示，或分子式为c24h37no3，化学结构式如以下bufogarlidese所示：

2.权利要求1所述的一种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述hplc xb-c8柱的规格为30×150mm，5μm，64％甲醇/水，8ml/min。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述hplc waters sunfire c18柱的规格为10×250mm，5μm，23％乙腈/水+0.5％醋酸，2.5ml/min。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述s1中乙醇的浓度优选为95％。

6.一种提取物，其特征在于：所述提取物中含有权利要求1所述的具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物。

7.一种药物组合物，其特征在于：所述药物组合物含有如权利要求1所述的具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物或其药学上可接受的盐。

8.如权利要求1所述的具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。

9.如权利要求1所述的具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗结肠癌药物中的应用。

技术总结
本方案公开了中药提取、分离领域的一种具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物及其制备方法和应用。本发明结合多种色谱学技术对蟾皮乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行反复分离纯化；运用1D和2D核磁及高分辨质谱等对2个新化合物进行结构鉴定，推导出其分子式及结构式。体外药效学研究表明，2个具有14,21氧桥结构的生物碱类化合物对结肠癌细胞(HCT‑116)具有较好的抑制作用，IC<subgt;50</subgt;分别为0.92μM和10.91μM。本发明有助于蟾蜍来源天然化合物的开发利用。

技术研发人员：孟令杰,刘云,喻昌燕,李三华,姜念,肖毅,孔庆宏
受保护的技术使用者：遵义医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7