琅琊病毒、墨江病毒、尼帕病毒和雪松病毒的四重qRT-PCR方法与流程

文档序号:37428592发布日期:2024-03-25 19:18阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种多重qrt-pcr检测病毒的引物和探针组,其特征在于,用于检测亨尼帕病毒属;所述亨尼帕病毒属包括琅琊病毒layv、墨江病毒mojv、尼帕病毒niv和雪松病毒cedv;

2.根据权利要求1所述的引物和探针组,其特征在于,所述探针的5’端修饰有报告基团;四种探针采用不同的报告基团修饰;可选的,所述报告基团包括fam、hex、vic、rox或cy5。

3.根据权利要求1或2所述的引物和探针组,其特征在于,所述探针的3’端修饰有淬灭基团;可选的,所述淬灭基团为bhq1和bhq2。

4.根据权利要求1~3任一所述的引物和探针组,其特征在于,seq id no.3所示核苷酸序列与seq id no.9所示核苷酸序列采用淬灭基团bhq1修饰,seq id no.6所示核苷酸序列与seq id no.12所示核苷酸序列采用淬灭基团bhq2修饰。

5.一种检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中含有权利要求1~4任一所述多重qrt-pcr检测病毒的引物和探针组。

6.根据权利要求5所述的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还含有四种亨尼帕病毒的阳性对照和阴性对照。

7.一种检测四种亨尼帕病毒的方法,所述方法不以疾病的诊断为目的,其特征在于,所述方法为利用权利要求1~4任一所述多重qrt-pcr检测病毒的引物和探针组,或权利要求5或6所述试剂盒进行四种亨尼帕病毒的检测,所述四种亨尼帕病毒为layv、mojv、niv、cedv。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,s2中所述实时荧光定量pcr的扩增体系为taq酶0.5μl、逆转录酶0.5μl、四种探针各0.25μl和四对上下游引物各0.5μl、pcrbuffer12.5μl和核酸模板4μl。

10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,s2中所述实时荧光定量pcr的反应程序为45℃反转录5min,95℃预变性10s;95℃5s和60℃30s;40个扩增循环,60℃退火延伸。


技术总结
本发明公开了琅琊病毒、墨江病毒、尼帕病毒和雪松病毒的四重qRT‑PCR方法,属于生物检测领域。本发明基于琅琊病毒(LayV)、墨江病毒(MojV)、尼帕病毒(NiV)和雪松病毒(CedV)的全基因组序列,设计了相对保守区域的特异性引物和探针,建立了四重实时荧光qRT‑PCR检测方法。本方法与其他病毒核酸无交叉反应,最佳线性检测范围为10<supgt;1</supgt;~10<supgt;8</supgt;copies/μL,下限为10copies/μL,并且具有良好的重复性。因此,可用于检测亨尼帕病毒及其他相关临床标本。

技术研发人员:武桂珍,雷雯雯,何文君,宋娟,刘军,韩卫芳
受保护的技术使用者:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
技术研发日:
技术公布日:2024/3/24
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