一种OXCT1蛋白酮体分解酶活性检测和筛选系统的制作方法

本技术涉及生物领域。具体地，本技术涉及一种oxct1蛋白酮体分解酶活性检测和筛选系统。

背景技术：

1、酮体代谢是人体内维持稳态的重要方式。酮体代谢为生物提供了替代的代谢能源，维持了人体细胞的稳态。oxct1蛋白是酮体分解代谢中重要的代谢酶，其催化琥珀酰辅酶a上的辅酶a转移至乙酰乙酸从而生成乙酰乙酰辅酶a。oxct1蛋白的酮体分解酶活对酮体代谢具有关键影响，且酮体代谢又是维持细胞增殖和生长的重要代谢方式。有研究报道，oxct1蛋白在乳腺癌中发挥酮体分解功能促进乳腺癌的增殖和转移。发明人先前研究发现，oxct1蛋白在肝癌细胞中呈现高表达的状态，并通过其酮体分解功能促进肝癌细胞增殖，同时oxct1蛋白的高表达与肝癌患者不良预后显著相关，因此抑制oxct1蛋白酮体分解酶功能对肝癌、乳腺癌、前列腺癌等oxct1高表达癌症的治疗具有临床意义。

2、目前，急需开发稳定可控的oxct1蛋白酮体分解酶活检测系统，满足药物研发需求。

技术实现思路

1、本实用新型旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题。为此，本实用新型提出了oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统和筛选oxct1蛋白酮体分解酶活抑制剂的系统，利用该检测系统可以极大地提高oxct1酮体分解酶活的检测效率及通量，实现精准控制，保证检测结果的准确性和稳定性，进一步地推进oxct1蛋白酮体分解小分子抑制剂的高通量筛选，为开发肝癌、胰腺癌、乳腺癌等oxct1高表达癌种的治疗药物提供支持。

2、在本实用新型的一个方面，本实用新型提出了一种oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，所述系统包括：反应发生单元，所述反应发生单元用于发生酮体分解反应，所述酮体分解反应的起始物料包括起始液和mgcl2溶液，所述起始液包括：oxct1蛋白液、缓冲液、碘乙酰胺溶液、琥珀酰辅酶a溶液和乙酰乙酸锂溶液；检测单元，所述检测单元用于检测所述反应发生单元中反应液的光信号；mgcl2溶液加样部件，所述mgcl2溶液加样部件用于将mgcl2溶液加至所述反应发生单元中；控制单元，所述控制单元分别与所述mgcl2溶液加样部件和检测单元相连，用于至少控制所述mgcl2溶液的加样时机以及检测单元的检测时机。

3、本实用新型的检测系统的反应发生单元中，在oxct1蛋白作用下，琥珀酰辅酶a溶液和乙酰乙酸锂发生酮体分解反应生成乙酰乙酰辅酶a，在此过程中溶液的光信号会发生变化，基于检测单元对光信号实施检测，可以确定乙酰乙酰辅酶a的生成情况，进而获知oxct1蛋白酮体分解酶活。碘乙酰胺的作用主要是保证蛋白质样品完全变性并保持还原状态，维持反应稳定；缓冲液主要作用时维持体系的ph值；mg2+在体系中起到了“分子开关”作用，不存在mg2+时酮体分解反应不会发生，存在mg2+时酮体分解反应发生，而加入mg2+的时间先后不影响反应最终产量。

4、进一步地，若直接将mg2+溶液与起始液一同混合，则反应瞬间发生，不利于光信号的检测，可控性差，检测结果稳定性低，不利于药物的高通量筛选。进而，通过控制单元控制mg2+溶液加至反应发生单元的时机以及检测单元的检测时机，可以实现精准控制，保证检测结果的准确性和稳定性，进一步地推进oxct1蛋白酮体分解小分子抑制剂的高通量筛选，为开发肝癌、胰腺癌、乳腺癌等oxct1高表达癌种的治疗药物提供支持。

5、具体地，所述系统进一步包括：oxct1蛋白获取单元，所述oxct1蛋白获取单元用于获取oxct1蛋白；所述oxct1蛋白获取单元包括下列至少之一：细胞培养设备、离心设备、细胞破碎设备和混合设备。

6、具体地，所述反应发生单元中设置有用于获知反应液体积的标记或者部件。

7、具体地，所述系统进一步包括：计算单元，所述计算单元用于基于所述起始液的组成、用量和/或mg2+溶液浓度，计算确定需要加至所述反应发生单元的mg2+溶液体积；所述控制单元与所述计算单元相连，用于基于所述计算单元确定的mg2+溶液体积，控制所述mg2+溶液加样部件的加样量。

8、具体地，所述检测单元包括：收集样液容器，所述收集样液容器用于收集所述反应发生单元中的反应液；预处理部件，所述预处理部件用于对所述收集样液容器中收集到的反应液进行预处理；光信号检测设备，所述光信号检测设备用于对所述预处理后的反应液进行光信号检测。

9、具体地，所述预处理部件选自可用于稀释处理的部件。

10、具体地，所述反应发生单元中设置有搅拌部件。

11、在本实用新型的又一方面，本实用新型提出了一种筛选oxct1蛋白酮体分解酶活抑制剂的系统，所述系统包括：预处理单元，所述预处理单元用于使候选抑制剂与oxct1蛋白接触；前面所述oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，所述系统用于对预先与候选抑制剂共孵育前后的oxct1蛋白的酮体分解酶活性进行检测，得到检测结果，得到检测结果；基于所述检测结果，确定所述候选抑制剂是否为目标抑制剂。由此，利用该系统可以准确且高效地筛选出目标oxct1蛋白酮体分解酶活抑制剂，为开发肝癌、胰腺癌、乳腺癌等oxct1高表达癌种的治疗药物提供支持。

12、本实用新型的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本实用新型的实践了解到。

技术特征：

1.一种oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，其特征在于，所述系统进一步包括：

3.根据权利要求1所述的oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，其特征在于，所述反应发生单元中设置有用于获知反应液体积的标记或者部件；

4.根据权利要求1所述的oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，其特征在于，所述检测单元包括：

5.根据权利要求4所述的oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，其特征在于，所述预处理部件选自可用于稀释处理的部件。

6.根据权利要求1所述的oxct1蛋白酮体分解酶活性检测系统，其特征在于，所述反应发生单元中设置有搅拌部件。

7.一种筛选系统，其特征在于，包括：

技术总结
本技术提出一种OXCT1蛋白酮体分解酶活性检测和筛选系统，检测系统包括：反应发生单元，用于发生酮体分解反应；检测单元；Mg<supgt;2+</supgt;溶液加样部件，用于将Mg<supgt;2+</supgt;溶液加至所述反应发生单元中；控制单元，分别与Mg<supgt;2+</supgt;溶液加样部件和检测单元相连。利用该检测系统可以极大地提高OXCT1酮体分解酶活的检测效率及通量，实现精准控制，保证检测结果的准确性和稳定性，进一步地推进OXCT1蛋白酮体分解小分子抑制剂的高通量筛选，为开发肝癌、胰腺癌、乳腺癌等OXCT1高表达癌种的治疗药物提供支持。

技术研发人员：张华凤,孙愉宸,马文豪,熊楠池,李婷婷
受保护的技术使用者：合肥综合性国家科学中心大健康研究院
技术研发日：20230413
技术公布日：2024/2/1