背景技术：
1、载脂蛋白c3(apoc3)是由apoc3基因编码的蛋白质。apoc3可以由肝脏以及小肠分泌，并且可以在抑制肝脏对富含甘油三酯的颗粒的摄取中起重要作用。因此，高血浆apoc3与高甘油三酯和发展心血管疾病的风险增加有关。因此，需要开发一种有效的、无细胞毒性的apoc3抑制剂。本文所述的多核酸分子、其缀合物和方法满足了这一需求并提供相关优势。
2、援引并入
3、本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均以引用的方式并入本文，如同每一份单独的出版物、专利或专利申请均被明确且单独地指明以引用的方式并入本文。如果通过引用并入的出版物、专利或专利申请与说明书中含有的公开内容相矛盾，则说明书旨在取代和/或优先于任何此类矛盾材料。
技术实现思路
1、为满足对于更有效的apoc3抑制剂的需求，本发明一方面提供了一种用于调节载脂蛋白c3(apoc3)基因的表达的多核酸分子，其包含有义链和反义链，其中反义链包含与选自seq id no:1-108、433-456、529-534和553-563的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情况下，反义链包含核酸序列，该核酸序列包含至少14、15、16、17、18、19、20、21或22个选自seq id no:1-108、433-456、529-534和553-563的核酸序列的连续序列，具有不超过1、2、3或4个错配。在一些情况下，有义链包含与选自seqid no:217-324、481-504、541-546和575-585的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情况下，有义链包含核酸序列，该核酸序列包含至少14、15、16、17、18、19或20个选自seq id no:217-324、481-504、541-546和575-585的核酸序列的连续序列，具有不超过1、2、3或4个错配。
2、在一些情况下，有义链包含seq id no:217-324、481-504、541-546和575-585的核酸序列，并且反义链包含选自seq id no:1-108、433-456、529-534和553-563的核酸序列。
3、在一些情况下，多核酸分子包含(1)2’-氟修饰的核苷酸；(2)2’-o-甲基修饰的核苷酸；(3)2’-脱氧修饰的核苷酸，或(4)经修饰的核苷酸间键联。在一些情况下，多核酸分子在5’端处或3’端处包含至少两个连续的经修饰的核苷酸间键联。
4、在一些情况下，反义链包含5’-nnfnnnnfnnfnfnnnnnfnnfnnnnnnn-3’、5’-nnfnnnnfnnnnnnnnfnnfnnnnnnn-3’ 、 5’-nnfnnnnnfnnnnnfnnfnnnnnnnnn-3’ 、 5’-nnfnnnnnfnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’ 或 5’-nnfnnnnnnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’，其中“nf”代表2’-氟修饰的核苷酸，并且其中“n”代表2’-o-甲基修饰的核苷酸。在一些情况下，有义链包含5’-nnnnnnnfnnfnnfnnnnnnnnnn-3’、5’-nnnnnnnfnnfnfnfnnnnnnnnnn-3’或5’-nnnnnnnnnfnfnfnnnnnnnnnn-3’，其中“nf”代表2’-氟修饰的核苷酸，并且其中“n”代表2’-o-甲基修饰的核苷酸。在一些情况下，多核酸分子的有义链包含5’-nfnnfnnfnnfnnfnfnfnnfnnfnnfnnfnnf-3’，多核酸分子的反义链包含5’-nnfnnfnnfnnfnnfnnnnfnnfnnfnnfnnn-3’；多核酸分子的有义链包含5’-nnnnnnnfnnfnfnfnnnnnnnnnn-3’，多核酸分子的反义链包含5’-nnfnnnnfnnfnfnnnnnfnnfnnnnnnn-3’；多核酸分子的有义链包含5’-nnnnnnnnnfnnfnnnnnnnnnn-3’，其中多核酸分子的反义链包含5’-nnfnnnnnnnnnnfnnfnnnnnnnnn-3’；多核酸分子的有义链包含5’-nnnnnnnfnnfnnfnnnnnnnnnn-3’，多核酸分子的反义链包含5’-nnfnnnnnnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’；或者，多核酸分子的有义链包含5’-nnnnnnnfnnfnnfnnnnnnnnnn-3’，多核酸分子的反义链包含5’-nnfnnnnnfnnnnnfnnfnnfnnnnnnn-3’，其中“nf”代表2’-氟修饰的核苷酸，并且其中“n”代表2’-o-甲基修饰的核苷酸。
5、在一些情况下，经修饰的核苷酸间键联是硫代磷酸酯核苷酸间键联。在一些情况下，经修饰的核苷酸间键联包含立体化学上富集的硫代磷酸酯核苷酸间键联。
6、在一些情况下，有义链包含与选自no:325-432、505-528、547-552和586-596的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情况下，反义链包含与选自seq id no:109-216、457-480、535-540和564-574的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％相同的核酸序列。在一些情况下，有义链包含选自seq id no:325-432、505-528、547-552和586-596的核酸序列，并且反义链包含选自seq id no:109-216、457-480、535-540和564-574的核酸序列。
7、在另一方面，本文提供了用于调节载脂蛋白c3(apoc3)基因的表达的多核酸分子，其中多核酸分子包含：(a)包含uuucagggaacugaagccaucgg(seq id no:529)的核苷酸序列的反义链和包含gauggcuucaguucccugaaa(seq id no:541)的核苷酸序列的有义链；(b)包含ugaauacugucccuuuuaagcaa(seq id no:530)的核苷酸序列的反义链和包含gcuuaaaagggacaguauuca(seq id no:542)的核苷酸序列的有义链；(c)包含uagaauacugucccuuuuaagca(seq id no:531)的核苷酸序列的反义链和包含cuuaaaagggacaguauucua(seq id no:543)的核苷酸序列的有义链；(d)包含uugagaauacugucccuuuuaag(seq id no:532)的核苷酸序列的反义链和包含uaaaagggacaguauucucaa(seq id no:544)的核苷酸序列的有义链；(e)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq id no:533)的核苷酸序列的反义链和包含aaaagggacaguauucucaga(seq id no:545)的核苷酸序列的有义链；(f)包含ucacugagaauacugucccuuuu(seq id no:534)的核苷酸序列的反义链和包含aagggacaguauucucaguga(seq id no:546)的核苷酸序列的有义链；(g)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq id no:554)的核苷酸序列的反义链和包含aaaagggacaguauucucaga(seq id no:576)的核苷酸序列的有义链；(h)包含ucugagaauacugucccuuucaa(seq id no:555)的核苷酸序列的反义链和包含gaaagggacaguauucucaga(seq id no:577)的核苷酸序列的有义链；(i)包含ucugagaauacugucccuuugaa(seq id no:556)的核苷酸序列的反义链和包含caaagggacaguauucucaga(seq id no:578)的核苷酸序列的有义链；(j)包含ucugagaauacugucccuugcaa(seq id no:557)的核苷酸序列的反义链和包含gcaagggacaguauucucaga(seq id no:579)的核苷酸序列的有义链；(k)包含ucugagaauacugucccuucgaa(seq id no:558)的核苷酸序列的反义链和包含cgaagggacaguauucucaga(seq id no:580)的核苷酸序列的有义链；(l)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq id no:559)的核苷酸序列的反义链和包含aaaagggacaguauucucaga(seq id no:581)的核苷酸序列的有义链；(m)包含ucugagaauacugucccuuugaa(seq id no:560)的核苷酸序列的反义链和包含caaagggacaguauucucaga(seq id no:582)的核苷酸序列的有义链；(n)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq id no:561)的核苷酸序列的反义链和包含aaaagggacaguauucucaga(seq id no:583)的核苷酸序列的有义链；(o)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq id no:562)的核苷酸序列的反义链和包含aaaagggacaguauucucaga(seq id no:584)的核苷酸序列的有义链；或(p)包含ucugagaauacugucccuuuuaa(seq id no:563)的核苷酸序列的反义链和包含aaaagggacaguauucucaga(seq id no:585)的核苷酸序列的有义链。
8、在另一方面，本文提供了用于调节载脂蛋白c3(apoc3)基因的表达的多核酸分子，其中多核酸分子包含：(a)包含usufsucaggfgaacufgafagfccaucsgsg(seq id no:535)的核苷酸序列的反义链和包含gsasuggcufucfagfuucccugaaa(seq id no:547)的核苷酸序列的有义链；(b)包含usgfsaauacfuguccfcufuufuaagcsasa(seq id no:536)的核苷酸序列的反义链和包含gscsuuaaafagfggfacaguauuca(seq id no:548)的核苷酸序列的有义链；(c)包含usafsgaauafcugucfccfuufuuaagscsa(seq id no:537)的核苷酸序列的反义链和包含csusuaaaafggfgafcaguauucua(seq id no:549)的核苷酸序列的有义链；(d)包含usufsgagaafuacugfucfccfuuuuasasg(seq id no:538)的核苷酸序列的反义链和包含usasaaaggfgafcafguauucucaa(seq id no:550)的核苷酸序列的有义链；(e)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuuusasa(seq id no:539)的核苷酸序列的反义链和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:551)的核苷酸序列的有义链；(f)包含uscfsacugafgaauafcufgufcccuususu(seq id no:540)的核苷酸序列的反义链和包含asasgggacfagfuafuucucaguga(seq id no:552)的核苷酸序列的有义链；(g)包含vpuscfsugagafauacufgufccfcuuuusasa(seq id no:565)的核苷酸序列的反义链和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:587)的核苷酸序列的有义链；(h)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuucsasa(seq id no:566)的核苷酸序列的反义链和包含gsasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:588)的核苷酸序列的有义链；(i)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuugsasa(seq id no:567)的核苷酸序列的反义链和包含csasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:589)的核苷酸序列的有义链；(j)包含uscfsugagafauacufgufccfcuugcsasa(seq id no:568)的核苷酸序列的反义链和包含gscsaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:590)的核苷酸序列的有义链；(k)包含uscfsugagafauacufgufccfcuucgsasa(seq id no:569)的核苷酸序列的反义链和包含csgsaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:591)的核苷酸序列的有义链；(l)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuuusasa(seq id no:570)的核苷酸序列的反义链和包含(invab)asasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:592)的核苷酸序列的有义链；(m)包含uscfsugagafauacufgufccfcuuugsasa(seq id no:571)的核苷酸序列的反义链和包含(invab)csasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:593)的核苷酸序列的有义链；(n)包含uscfsugdagdaauacufgufccfcuuuusasa(seq id no:572)的核苷酸序列的反义链和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:594)的核苷酸序列的有义链；(o)包含uscfsugagafauacufgufsccfcuuuusasa(seq id no:573)的核苷酸序列的反义链和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:595)的核苷酸序列的有义链；或(p)包含uscfsugagafauacufgufccfcsuuuusasa(seq id no:574)的核苷酸序列的反义链和包含asasaagggfacfagfuauucucaga(seq id no:596)的核苷酸序列的有义链，其中“a”是指腺苷-3’-磷酸；“a”是指2’-o-甲基腺苷-3’-磷酸；“af”是指2’-氟腺苷-3’-磷酸；“da”是指2’-脱氧腺苷-3-磷酸；“c”是指胞苷-3’-磷酸；“c”是指2’-o-甲基胞苷-3’-磷酸；“cf”是指2’-氟胞苷-3’-磷酸；“dc”是指2’-脱氧胞苷-3’-磷酸；“g”是指鸟苷-3’-磷酸；“g”是指2’-o-甲基鸟苷-3’-磷酸；“gf”是指2’-氟鸟苷-3’-磷酸；“dg”是指2’-脱氧鸟苷-3’-磷酸；“u”是指尿苷-3’-磷酸；“u”是指2’-o-甲基尿苷-3’-磷酸；“uf”是指2’-氟尿苷-3’-磷酸；“t”是指5-甲基尿苷-3’-磷酸；“t”是指2’-o-甲基-5-甲基尿苷-3’-磷酸；“tf”是指2’-氟-5-甲基尿苷-3’-磷酸；“dt”是指2’-脱氧胸苷-3’-磷酸；“s”是指3’-硫代磷酸酯，“(invab)”是指反向脱碱基脱氧核糖核苷酸，并且“vp”是指5’-乙烯基膦酸酯修饰的核苷酸。
9、在另一方面，本文提供了一种用于调节载脂蛋白c3(apoc3)基因的表达的多核酸分子缀合物，其中该多核酸分子缀合物包含本文所述的多核酸分子和脱唾液酸糖蛋白受体靶向部分。在一些情况下，脱唾液酸糖蛋白受体靶向部分包含n-乙酰半乳糖胺(galnac)或半乳糖。
10、在一些情况下，多核酸分子和脱唾液酸糖蛋白受体靶向部分经由接头偶联。在一些情况下，接头包含下式(iv)，其中y1和y2中的至少一个是多核酸分子中的核苷酸。在一些情况下，y1是多核酸分子的有义链的3’末端上的最后一个核苷酸，或者y1和y2是多核酸分子中的两个连续核苷酸。在一些情况下，接头和带有多核酸分子的有义链的3’末端上的最后一个核苷酸的脱唾液酸糖蛋白受体靶向部分示于式(v’)中：
11、
12、其中式(v’)中的z是-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基，并且式(v’)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脱碱基或其它。
13、在一些情况下，接头和带有多核酸分子的有义链的3’末端上的最后一个核苷酸的脱唾液酸糖蛋白受体靶向部分示于式(v””)中：
14、
15、其中式(v””)中的z是对应于本文所述的糖修饰之一的部分(例如，-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基)，并且式(v””)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脱碱基或其它。
16、在一些情况下，接头和带有多核酸分子的有义链的3’末端上的最后一个核苷酸的脱唾液酸糖蛋白受体靶向部分示于式(v””’)中：
17、
18、其中式(v””’)中的z是对应于本文所述的糖修饰之一的部分(例如，-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基)，并且式(v””’)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脱碱基或其它。
19、在一些情况下，接头和带有多核酸分子的有义链的3’末端上的最后一个核苷酸的脱唾液酸糖蛋白受体靶向部分示于式(v”””)中：
20、
21、其中式(v”””)中的z是对应于本文所述的糖修饰之一的部分(例如，-h、-oh、-o-甲基、-f或-o-甲氧基乙基)，并且式(v”””)中的r是腺嘌呤、尿嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、脱碱基或其它。
22、在另一方面，本文提供了一种药物组合物，其包含本文所述的多核酸分子或本文所述的多核酸分子缀合物，以及药学上可接受的赋形剂。
23、在一些情况下，药物组合物被配制为纳米颗粒制剂。在一些情况下，药物组合物被配制用于肠胃外、口服、鼻内、颊、直肠、透皮、静脉内、皮下或鞘内施用。
24、在另一方面，本文提供了一种调节对象的载脂蛋白c3(apoc3)基因的表达的方法，其包括：向对象施用本文所述的多核酸分子或本文所述的多核酸分子缀合物、或本文所述的药物组合物，从而调节对象中apoc3基因的表达。在一些情况下，有需要的对象被诊断为心血管疾病或高甘油三酯血症、患有心血管疾病或高甘油三酯血症或具有心血管疾病或高甘油三酯血症的症状。
25、在另一方面，本文提供了一种调节有需要的对象的甘油三酯水平的方法，其包括：向对象施用本文所述的多核酸分子或本文所述的多核酸分子缀合物、或本文所述的药物组合物，从而调节对象的甘油三酯水平。在一些情况下，有需要的对象被诊断为心血管疾病或高甘油三酯血症、患有心血管疾病或高甘油三酯血症或具有心血管疾病或高甘油三酯血症的症状。