一种用于防治缀叶丛螟幼虫的真菌玫烟色虫草

本发明涉及林业害虫防治，具体涉及一种玫烟色虫草及其在防治缀叶丛螟幼虫中的应用。

背景技术：

1、缀叶丛螟locastra muscosalis属鳞翅目lepidoptera、螟蛾科pyralidae、丛螟亚科epipaschiinae，又称漆树虫、漆绵虫、木橑粘虫、黑毛虫，是林业上重点防治的食叶害虫。缀叶丛螟广泛分布于河南、辽宁、山东、四川等地，分布范围极广，可取食核桃楸、漆树、盐肤木等树种，寄主植物杂，且爆发迅速、防治难度大，严重影响了核桃楸、漆树等树木的正常生长，造成了一定程度上的经济损失。目前，缀叶丛螟的综合防治措施尚不完善，生物防治方面研究较少，主要以化学防治为主，常使用的药剂有吡虫啉、溴氰菊酯等，可在短时间内降低虫口密度，但长时间及大剂量使用农药，会使缀叶丛螟产生抗药性并对环境造成污染。

2、玫烟色虫草cordyceps fumosorosea作为一种常见的昆虫寄生真菌，也是非常有潜力的生物防治真菌。昆虫病原菌是作为生物防治的重要手段之一，在无公害且持续性控制虫害方面具有不可替代的作用，筛选对缀叶丛螟高致病率的生防病原菌是重中之重。

技术实现思路

1、为了克服现有技术中存在的问题，本发明目的在于提供一种玫烟色虫草及其在缀叶丛螟幼虫防治中的应用，本发明从缀叶丛螟越冬虫茧中分离出一种对缀叶丛螟有较高的致死率的真菌，可以实现无公害的生物防治。

2、为实现上述发明目的，本发明所采用以下技术方案：

3、本发明提供了一种缀叶丛螟虫茧中的玫烟色虫草真菌m01，该菌株是从黑龙江省哈尔滨市东北林业大学林场采集的缀叶丛螟越冬染病虫茧中分离获得的，标记为m01，经鉴定为玫烟色虫草(cordyceps fumosorosea)真菌。该菌株已保藏，菌株保藏编号为cgmccno.40897，保藏日期为2023年10月16日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编为100101。

4、所述的玫烟色虫草菌株的分离纯化及鉴定，包括以下步骤：

5、(1)菌株的分离纯化：将体表长满菌层的虫体使用孢子稀释法进行分离纯化，直至出现无污染的真菌菌落。

6、(2)菌株形态学鉴定：观察记录菌落形态特征(附图1)，待其产孢后挑取菌丝体制片，在显微镜下观察菌丝、产孢结构及分生孢子形态特征。

7、(3)菌株的分子鉴定：

8、a：用常规方法或试剂盒(商业购买)方法提取菌丝dna；

9、b：以a中获得的dna为模板进行pcr扩增，反应体系为：ddh2o 8μl，2×easy taqpcr supermix 12.5μl，10umol/l上、下游引物its1f和its1r各1μl，dna模板2.5μl，总体积25μl，反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸10min；4℃5mim；

10、c：将b中pcr产物由生物公司进行双向测序，测序结果与cordyceps fumosoroseaisolate ifgz4304(mh483791)的相似性为99％(附图2)。

11、(4)菌株致病力的鉴定：

12、a：将培养后得到的m01孢子粉用无菌水将其稀释配制成5个梯度浓度孢子悬浮液，分别为：1×105个孢子/ml、1×106个孢子/ml、1×107个孢子/ml、1×108个孢子/ml、1×109个孢子/ml，每个处理10头幼虫，3个重复，以无菌水为对照。

13、b：挑选个体健康，生长进度一致的4龄幼虫进行实验，采用浸虫法处理缀叶丛螟幼虫：将幼虫分别在配制好的5种浓度的孢子悬浮液中浸2s后立即取出，转移至无菌滤纸上晾干多余液体，之后放置于新鲜核桃楸叶片上饲养。

14、c：将接虫后新鲜核桃楸枝条置于室温下饲养，连续每天定时观察，记录发病情况和死亡虫数(附图3)。

15、相比现有技术，本发明的有益效果在于：

16、经过室内实验表明，将玫烟色虫草m01孢子粉用无菌水稀释1×109个孢子/ml，浸泡缀叶丛螟4龄幼虫2s后再正常饲养6d，幼虫致死率为86.67％，效果显著。相比于化学防治，生物防治具有对环境友好，害虫不易产生抗性、可持续控制等优点，因而具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种用于防治缀叶丛螟幼虫的真菌玫烟色虫草，其特征在于所述用于防治缀叶丛螟幼虫的真菌玫烟色虫草为cordyceps fumosorosea，菌株标记为m01，于2023年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为：cgmcc no.40897。

2.根据权利要求1所述的一种用于防治缀叶丛螟幼虫的真菌玫烟色虫草，其特征在于，所述的玫烟色虫草菌株m01来自于缀叶丛螟染病虫茧。

3.根据权利要求1所述的一种用于防治缀叶丛螟幼虫的真菌玫烟色虫草，其特征在于，所述的玫烟色虫草菌株m01的its序列如序列cofum-its所示。

技术总结
本发明涉及一种用于防治缀叶丛螟幼虫的真菌玫烟色虫草，属于林业害虫防治技术领域。通过对缀叶丛螟越冬染病虫茧进行菌种分离、培养、鉴定和致病性测定，得到一株玫烟色虫草(Cordyceps fumosorosea)真菌，标记为M01，于2023年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种保藏编号为：CGMCC No.40897。室内实验表明M01菌种孢子液对缀叶丛螟4龄的致死率达86.67％。本发明在对缀叶丛螟幼虫生物防治方面有广阔的应用前景。

技术研发人员：景天忠,韩勍,李曼毓,姜云宵,石艳丽,高鑫博
受保护的技术使用者：东北林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17