一种类风湿关节炎的生物标志物及诊断试剂盒及应用的制作方法

本发明涉及生物检测，尤其涉及一种类风湿关节炎的生物标志物及诊断试剂盒及应用。

背景技术：

1、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,ra)是一种全身性自身免疫病，目前发病机制不明。主要以慢性、进行性、侵袭性、致残性关节病变为临床表现。伴随着病情的发展，可导致关节邻近骨、软骨的损伤，最终造成关节畸形，甚至关节功能的丧失，严重影响患者的生活质量，具有极高的致残率。类风湿性关节炎的早期诊断对于积极治疗关节或器官的不可逆损伤以及通过广泛使用常规药物和抗风湿性关节炎药物控制慢性炎症至关重要。然而，部分类风湿因子和环瓜氨酸抗体均为阴性的ra患者可能会被误诊，延误可能导致临床预后恶化。因此，探讨ra的病因病机对ra的早期预防、早期诊断和有效干预具有重要价值。

2、小分子核糖核酸(microrna，mirna)是一种18～25nt长的内源性非编码rna，广泛分布在多个真核生物，通过调节mrna的降解或翻译抑制来调节一个或多个基因的表达。mirna的合成和功能的分子机制已被广泛研究。随着分子生物学的发展，对mirna的研究越发广泛，mirna参与了多种生理和病理过程，其表达水平与疾病，尤其是癌症的发生和发展密切相关。mirna的检测方法也日臻成熟。但其在ra中的作用机制尚未明确。

3、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种类风湿关节炎的生物标志物及诊断试剂盒及应用。

2、本发明提出一种检测生物标志物的物质的应用，该生物标志物为mir-103a-3p，应用包括以下应用中的一种：

3、a.在制备用于风湿关节炎与骨关节炎鉴别诊断的产品中的应用；

4、b.在制备用于风湿关节炎筛查的产品中的应用；

5、c.在制备用于风湿关节炎发病预测的产品中的应用。

6、可选的，检测生物标志物的物质为用于检测mir-103a-3p表达水平的试剂；优选为用于检测mir-103a-3p与管家基因的相对表达水平试剂；优选的，用于检测mir-103a-3p表达水平的试剂、或用于检测mir-103a-3p与管家基因的相对表达水平试剂包括通过northern印迹法、荧光定量pcr法、微阵列技术检测表达水平的试剂。

7、可选的，用于检测mir-103a-3p表达水平的试剂包括检测mir-103a-3p表达水平的引物；引物的序列优选为seq id no:1～seq id no:2；用于检测mir-103a-3p与管家基因的相对表达水平试剂包括检测mir-103a-3p和管家基因rnu6b表达水平的引物；引物的序列优选为seq id no:1～seq id no:4；用于检测mir-103a-3p表达水平的试剂还包括反转录试剂。

8、可选的，根据外周血中mir-103a-3p与管家基因rnu6b相对表达水平的检测结果进行诊断或筛查。

9、本发明提出一种用于诊断类风湿关节炎的试剂盒，试剂盒中包括荧光定量检测试剂，荧光定量检测试剂中含有用于检测mir-103a-3p和管家基因rnu6b表达水平的引物；优选的，引物的核苷酸序列如seq id no:1～seq id no:4所示。

10、可选的，荧光定量检测试剂中还含有2×sybr qpcr mix；引物的浓度为5～20μm，优选为10μm。

11、可选的，试剂盒中还含有反转录试剂，优选的，反转录试剂中含有5×rt mastermix、无酶水、stem-loop引物；stem-loop引物的核苷酸序列如seq id no:5所示；stem-loop引物的浓度为5～20μm，优选为10μm。

12、本发明提出mir-103a-3p作为分子标志物在制备类风湿关节炎的诊断试剂或试剂盒中的应用。

13、本发明提出mir-103a-3p抑制剂在制备用于抑制dkk1和/或tak1表达量升高的试剂中的应用，优选为mir-103a-3p抑制剂在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用。

14、本发明提出mir-103a-3p抑制剂在用于筛选用于治疗类风湿关节炎的药物中的应用。

15、本发明实施例提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：

16、本发明的实验结果表明mir-103a-3p通过靶向dkk1参与ra的发生、发展过程，可以被认为是一个新的类风湿关节炎的检测或治疗靶点，为ra的诊断和治疗提供新应用方向。

17、并且，基于mirna在人体血液中具有很高的稳定性，本发明提出的利用检测mir-103a-3p与管家基因rnu6b的相对水平对ra的提前诊断和发病预测具有良好的特异性和敏感性，具有从研究到临床应用转化的巨大潜力。

18、本发明的标本为受试者外周血，样品标本易于获得，临床操作性强且对受试者属于无创伤性。

技术特征：

1.检测生物标志物的物质的应用，其特征在于，所述生物标志物为mir-103a-3p；

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测生物标志物的物质为用于检测mir-103a-3p表达水平的试剂；优选为用于检测mir-103a-3p与管家基因的相对表达水平试剂；

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用于检测mir-103a-3p表达水平的试剂包括检测mir-103a-3p表达水平的引物；所述引物的序列优选为seq id no:1～seq idno:2；

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，根据外周血中mir-103a-3p与管家基因rnu6b相对表达水平的检测结果进行诊断或筛查。

5.一种用于诊断类风湿关节炎的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括荧光定量检测试剂，所述荧光定量检测试剂中含有用于检测mir-103a-3p和管家基因rnu6b表达水平的引物；

6.根据权利要求5所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述荧光定量检测试剂中还含有2×sybr qpcr mix；所述引物的浓度为5～20μm，优选为10μm。

7.根据权利要求5所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有反转录试剂，优选的，所述反转录试剂中含有5×rt master mix、无酶水、stem-loop引物；所述stem-loop引物的核苷酸序列如seq id no:5所示，浓度为5～20μm，优选为10μm。

8.mir-103a-3p作为分子标志物在制备类风湿关节炎的诊断试剂或试剂盒中的应用。

9.mir-103a-3p抑制剂在制备用于抑制dkk1和/或tak1表达量升高的试剂中的应用，优选为所述mir-103a-3p抑制剂在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用。

10.mir-103a-3p抑制剂在用于筛选用于治疗类风湿关节炎的药物中的应用。

技术总结
本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种类风湿关节炎的生物标志物及诊断试剂盒及应用。生物标志物为miR‑103a‑3p；应用包括：在制备用于风湿关节炎与骨关节炎鉴别诊断的产品中的应用；在制备用于风湿关节炎筛查的产品中的应用；在制备用于风湿关节炎发病预测的产品中的应用。本发明的实验结果表明miR‑103a‑3p通过靶向DKK1参与RA的发生、发展过程，可以被认为是一个新的类风湿关节炎的检测或治疗靶点，为RA的诊断和治疗提供新应用方向。

技术研发人员：陈焱,薛晓畅,康杰芳,袁跃,王磊,郑朝晖
受保护的技术使用者：薛晓畅
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17