一株贝莱斯芽孢杆菌、抑菌脂肽及其生物防治菌剂与应用

本发明属于微生物防治，具体涉及一株贝莱斯芽孢杆菌、抑菌脂肽及其生物防治菌剂与应用。

背景技术：

1、采后真菌侵染是导致鲜果腐烂和商品价值下降的主要原因，因此需要有效的采后管理策略。利用拮抗微生物进行生物防治为传统的采后管理提供了一种替代方法。芽孢杆菌（bacillus spp.）是最常见的拮抗微生物之一，是一种需氧或部分厌氧的革兰氏阳性菌，能产生抗性芽胞，生长稳定，分布广泛。芽孢杆菌具有表型、基因型异质性和广泛存在于环境中的特性，特定的生境赋予芽孢杆菌独特的生理生化特性。海洋是一个资源丰富的生态系统，对海洋微生物的研究还处于起步阶段。由于海洋和陆地生境的显著差异，海洋微生物可能具有独特的生理特性和拮抗特性。研究具有生防活性的海洋芽孢杆菌，不仅有利于开发微生物资源，而且有利于发现新的生防菌剂。虽然芽孢杆菌及其次生代谢产物在果实病害防治中的作用已被广泛报道，例如专利cn112553129b中报道了一株用于防治由粉红聚端孢引起的苹果霉心病或苹果黑点病的贝莱斯芽孢杆菌，该菌株对粉红聚端孢有较强的抑菌能力；专利cn115181693b中报道了一株防治番茄等茄科类作物上的病害，尤其是番茄/烟草灰霉病的贝莱斯芽孢杆菌，但芽孢杆菌对果实保鲜效果的研究尚不多见。。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一株贝莱斯芽孢杆菌。

2、本发明还要解决的技术问题是提供由上述贝莱斯芽孢杆菌制备得到的抑菌脂肽。

3、本发明还要解决的技术问题是提供一种生物防治菌剂。

4、本发明最后要解决的技术问题是提供上述贝莱斯芽孢杆菌或抑菌脂肽的应用。

5、为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

6、一株贝莱斯芽孢杆菌，其分类命名为贝莱斯芽孢杆菌 bacillus velezensis，菌株号为12y，已于2023年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no. 28636，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

7、其中，所述的贝莱斯芽孢杆菌，其形态特征为：乳白色圆形菌落，表面光滑，无褶皱，边缘不整齐；其指数生长期为2h~12h，能够在15-45 ℃下生长，在ph 5-9下生长，耐受0%-4 %的盐度，是一株高效广谱的果实采后病害生防菌。

8、其中，所述的贝莱斯芽孢杆菌，其16s rdna序列如seq id no.1所示，其全基因组在ncbi上的序列号为cp120711.1。

9、一种抑菌脂肽，由所述的贝莱斯芽孢杆菌发酵制备得到的。

10、具体的，是将贝莱斯芽孢杆菌12y接种到lb培养基中，经发酵培养获得发酵液。

11、具体的，所述的发酵液用6 m盐酸调节ph到2-3，放置于4℃环境中酸沉过夜，待其充分沉淀后，10000 rpm，离心10 min收集沉淀物，加入适量色谱级甲醇溶解沉淀，用naoh调节ph至中性，常温磁力搅拌4-6 h抽提，10000 rpm离心10 min获得含有抑菌物质的滤液，于40℃条件下进行减压旋蒸浓缩至3-5 ml，冷冻干燥，最终获得菌株12y脂肽粗提物。

12、其中，所述的发酵培养，其发酵条件为：30~40℃、160~200 rpm培养24~78 h。

13、其中，所述的菌株12y脂肽粗提物经hplc-ms分析，质谱结果发现共收集到6个脂肽类物质，分别为c13-bacillomycin d、c15-bacillomycin d、c13-iturin、c14-iturin、c15-iturin、c16-fengycina。

14、上述贝莱斯芽孢杆菌或上述抑菌脂肽在抑制植物病原真菌和/或食源性致病细菌中的应用也在本发明所保护的范围之内。

15、其中，所述的植物病原真菌包括：灰霉菌（ botrytis cinerea) 、藤仓镰孢菌( fusarium fujikuroi)、暹罗炭疽菌( colletotrichum siamense)、胶孢炭疽菌( colletotrichum gloeosporioides)、咖啡刺盘孢( colletotrichum coffeanum）、葡萄座腔菌（ botryosphaeria dothidea）、水葫芦链格孢菌（ alternaria eichhorniae）和链格孢菌（ alternaria alternata）中的任意一种或几种的组合。

16、其中，所述的食源性致病细菌包括：大肠杆菌（ escherichia coli)、金黄色葡萄球菌( staphylococcus aureus)中的任意一种或两种的组合。

17、上述贝莱斯芽孢杆菌或上述抑菌脂肽在果实保鲜中的应用也在本发明所保护的范围之内。

18、其中，所述的果实为草莓、蓝莓、芒果或西红柿。

19、具体的，在贝莱斯芽孢杆菌12y脂肽粗提物提高草莓贮藏性试验中发现，菌株12y的脂肽粗提物处理能够抑制呼吸作用，延缓成熟衰老，保持抗病能力，较好地维持草莓的品质，减少草莓的腐烂发病，从而能够显著延长草莓贮藏寿命及其货架期。

20、具体的，在贝莱斯芽孢杆菌12y脂肽粗提物提高蓝莓贮藏性试验中发现，复合涂膜液处理的蓝莓商品率最高，失重率低，外观表现最好，既提供了保护屏障，又因为添加脂肽类物质（菌株12y脂肽粗提物）抑菌能力得到了提高；菌株12y脂肽不管是直接应用还是添加到涂膜液中均能够显著抑制微生物生长、更好地维持果实的硬度；菌株12y脂肽不仅在贮藏前期能刺激花色苷的合成，还能在贮藏后期维持花色苷的较高水平，同时复合膜液作为菌株12y脂肽载体，能更有效地刺激花色苷的合成；菌株12y脂肽处理可以有效诱导酚类物质的合成；菌株12y脂肽、复合涂膜处理均能有效提高总黄酮含量，提高蓝莓贮藏性，从而延长果实贮藏期，减少果实采后损失。

21、具体的，在田间使用贝莱斯芽孢杆菌12y提高草莓果实贮藏性的试验中发现，田间处理可显著延长草莓果实的贮藏寿命，提高草莓的商品性；田间菌悬液的灌根处理及菌株12y脂肽粗提物的叶片喷施处理能显著抑制草莓果实病情指数的增加，减少草莓病害的发生；田间处理能有效抑制水分蒸发，减少失重率，延长货架期，起到良好的保鲜作用。

22、一种生物防治菌剂也在本发明所保护的范围之内。

23、具体的，所述的生物防治菌剂含有如下任意一种或两种：（1）所述的贝莱斯芽孢杆菌；（2）所述的抑菌脂肽。

24、有益效果：

25、（1）本发明从南海海泥中筛选得到了一株贝莱斯芽孢杆菌12y，其指数生长期为2h~12h，能够在15-45 ℃、ph 5-9下生长，耐受0%-4%的盐度，对多种果实采后病原真菌都具有很好的抑制率，是一株高效广谱的果实采后病害生防菌，为病原菌的防治提供了很好的海洋生防资源。

26、（2）本发明利用筛选得到的贝莱斯芽孢杆菌12y制备得到了一种脂肽粗提物，其含有6类脂肽类物质（c13-bacillomycin d、c15-bacillomycin d、c13-iturin、c14-iturin、c15-iturin、c16-fengycina），对于植物病原真菌和/或食源性致病细菌都具有良好的抑菌作用，同时能够抑菌保鲜，提高草莓、蓝莓、芒果、西红柿等果实的贮藏能力和食用安全。

27、（3）本发明同时还提供了一种生物防治菌剂，其制备简单，防治效果好，能够显著减少果蔬病害的发生，提高果蔬的贮藏保鲜能力，具有广泛的应用前景。