适应肾盂肾炎检测的针对UPEC毒力基因的引物和探针、试剂及试剂盒的制作方法

文档序号:37802482发布日期:2024-04-30 17:12阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种适应肾盂肾炎检测的针对upec毒力基因的引物和探针,至少包括如下任一:

2.如权利要求1所述的适应肾盂肾炎检测的针对upec毒力基因的引物和探针,其特征在于,还包括针对内参基因β-actin的引物和探针,其至少包括如下任一:引物序列如seqid no.16~17所示、探针序列如seq id no.18所示。

3.如权利要求1或2所述的适应肾盂肾炎检测的针对upec毒力基因的引物和探针,其特征在于,所述探针的5’端标记有荧光基团。

4.如权利要求1或2所述的适应肾盂肾炎检测的针对upec毒力基因的引物和探针,其特征在于,所述探针的3’端标记有淬灭基团。

5.多重荧光定量pcr检测试剂,至少包括如权利要求1-4任一所述的适应肾盂肾炎检测的针对upec毒力基因的引物和探针。

6.如权利要求5所述的多重荧光定量pcr检测试剂,其特征在于,所述试剂还包括扩增缓冲液、dntp、dutp、mgcl2、taq聚合酶、ung酶、适量的核酸dna和ddh2o。

7.如权利要求6所述的多重荧光定量pcr检测试剂,其特征在于,所述试剂包括,以体积为50μl计:1.0mmol/l-4.5mmol/l的mgcl2,0.1mmol/l-0.4mmol/l的dntp,如权利要求1-4任一所述的引物和探针中满足每条引物浓度为0.1-1μm和每条探针浓度为0.1-0.5μm,0.5u-2.5u的taq聚合酶,0.1u-0.5u的ung酶,0.1mmol/l-0.3mmol/l的dutp,25μl的2×扩增缓冲液,以及适量的模板dna,余量用ddh2o补齐。

8.如权利要求7所述的荧光定量pcr检测试剂,其特征在于,所述检测试剂的组成包括,以体积为50μl计:2.5mmol/l的mgcl2,0.2mmol/l的dntp,引物和探针组fimh、papg ii、cnf1、hlya、aer以及β-actin的加量分别是0.5μl、0.5μl、0.67μl、0.5μl、0.67μl和0.5μl,2.0u的taq聚合酶,0.2u的ung酶,0.2mmol/l的dutp,25μl的2×扩增缓冲液,以及10μl的模板dna,余量为ddh2o。

9.如权利要求8所述的多重荧光定量pcr检测试剂,其特征在于,所述试剂中:用于检测upec毒力基因fimh的引物和探针、用于检测upec毒力基因papg ii的引物和探针、用于检测upec毒力基因cnf1的引物和探针、用于检测upec毒力基因hlya的引物和探针、用于检测upec毒力基因aer的引物和探针以及用于检测β-actin基因的引物和探针,每一个基因的两对引物和一条探针的摩尔浓度比均满足:2:2:1。

10.如权利要求8所述的荧光定量pcr检测试剂,其特征在于,所述检测试剂的pcr反应的程序为:

11.试剂盒,包括如权利要求1-4任一所述的适应肾盂肾炎检测的针对upec毒力基因的引物和探针或如权利要求5-9任一所述的多重荧光定量pcr检测试剂。


技术总结
本发明公开了适应肾盂肾炎检测的针对UPEC毒力基因的引物和探针、试剂及试剂盒,引物和探针至少包括如下任一:检测fimH的引物和探针:引物序列如SEQ ID NO.1~2所示、探针序列如SEQ ID NO.3所示;检测PapG II的引物和探针:引物序列如SEQ ID NO.4~5所示、探针序列如SEQ ID NO.6所示;检测cnf1的引物和探针:引物序列如SEQ ID NO.7~8所示、探针序列如SEQ ID NO.9所示;检测hlyA的引物和探针:引物序列如SEQ ID NO.10~11所示、探针序列如SEQ ID NO.12所示;检测aer的引物和探针:引物序列如SEQ ID NO.13~14所示、探针序列如SEQ ID NO.15所示。本发明筛选的引物和探针之间无交叉污染或干扰。基于多色荧光通道,可实现“一管式PCR”技术同时对多个靶标进行定性检测,能够覆盖引起肾盂肾炎的UEPC毒力基因,可在疾病早期指导精准用药。

技术研发人员:姜婷,苏波,后来旺,王雪梅,孔君尧,郭兴中
受保护的技术使用者:江苏绿叶诊断技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/4/29
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1