一种金属响应调控元件的制作方法

本公开属于生物医学领域，尤其涉及到一种金属响应调控元件以及包含该调控元件的核酸构建体、载体、病毒颗粒和组合物，以及在制备用于治疗疾病的基因疗法中的用途。

背景技术：

1、肝豆状核变性（wilson disease，wd）是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病，主要影响肝脏、神经系统和其他组织。该疾病的根本原因是位于第13号染色体上的 atp7b基因突变，导致atp7b蛋白功能异常。 atp7b基因编码一种p型铜转运atp酶，主要在肝细胞中表达，用于铜离子的跨膜转运。atp7b蛋白功能异常导致肝细胞减少铜离子排泄到胆汁中，导致肝脏和其他组织中的铜离子积累。在异常铜离子代谢下，铜蓝蛋白无法结合足够的铜离子，导致额外的溶血性贫血等症状。atp7b具有基本的p型atp酶结构，包括一个复杂的细胞质n-末端尾部，具有六个独立折叠的约70 个氨基酸长的铜离子响应元件（cres），以及一个具有八个跨膜结构域形成的铜离子跨膜通道。

2、然而，目前用于调控 atp7b基因的外源性调控元件通常具有恒定的转录活性，无法模拟体内随铜离子代谢周期而产生的转录调控。已经有报道在 mt-iia等金属螯合相关基因的上游鉴定出金属响应元件，并被证实能够随金属离子浓度调控转录活性。本公开在 atp7b基因上游鉴定出了6个全新的金属响应元件序列（mlss），并通过实验证实其中的mls5能够随金属离子浓度调控转录活性。基于mls5的铜离子依赖启动子序列可用于金属浓度敏感的基因表达。这一发明提供了一种潜在的解决方案，提供了一种金属离子依赖的基因安全表达策略，可应用于金属离子相关疾病的基因治疗药物。

技术实现思路

1、本公开提供了一种多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含选自seq id no：1、seq idno：2、seq id no：3、seq id no：4、seq id no：5、seq id no：6所示的序列。

2、在一些实施方式中，所述多核苷酸如seq id no：5所示。

3、另一方面，本公开提供了一种核酸构建体，其包含：

4、1）感兴趣的多核苷酸序列；

5、2）与感兴趣的多核苷酸序列可操作连接的转录调控元件，其中所述转录调控元件包含如前所述的多核苷酸和启动子，所述多核苷酸位于所述启动子的上游。

6、在一些实施方式中，其中所述的启动子选自e1b。

7、在一些实施方式中，其中所述感兴趣的多核苷酸序列是编码atp7b或其变体的核酸序列。

8、另一方面，本公开提供了一种载体，其包含如前所述的多核苷酸或如前所述的核酸构建体。

9、在一些实施方式中，其中所述载体是病毒载体。

10、在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒（aav）载体、腺病毒载体、或慢病毒载体。

11、另一方面，本公开提供了一种aav颗粒，包含如前所述的载体和衣壳蛋白。

12、在一些实施方式中，其中所述aav选自由血清型1、2、3、3b、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、rh10或hu37以及从人类和非人类哺乳动物或其变体中分离的任何一种aav血清型组成的组。

13、另一方面，本公开提供了一种药物组合物，包括如前所述的载体、或如前所述的aav颗粒，以及药学上可接受的赋形剂。

14、另一方面，本公开提供了如前所述的核酸构建体、如前所述的载体、如前所述的aav颗粒或如前所述的药物组合物在制备在受试者中用于治疗或预防疾病的药物中的用途。

15、在一些实施方式中，其中向受试者施用有效量的如前所述的核酸构建体、如前所述的载体、如前所述的aav颗粒或如前所述的药物组合物。

16、在一些实施方式中，其中所述疾病是金属离子相关疾病，优选地，所述疾病是肝豆状核变性。

17、在一些实施方式中，其中所述受试者是哺乳动物，优选地，所述受试者是人。

技术特征：

1.一种多核苷酸，其中所述多核苷酸如seq id no：5所示。

2.一种核酸构建体，其包含：

3.一种载体，其包含如权利要求1所述的多核苷酸或如权利要求2所述的核酸构建体。

4.如权利要求3所述的载体，其中所述载体是病毒载体。

5.如权利要求4所述的载体，其中所述病毒载体是腺相关病毒（aav）载体、腺病毒载体、或慢病毒载体。

6.一种aav颗粒，包含权利要求3至5中任一项所述的载体和衣壳蛋白。

7.如权利要求6所述的aav颗粒，其中所述aav选自由血清型1、2、3、3b、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、rh10或hu37以及从人类和非人类哺乳动物或其变体中分离的任何一种aav血清型组成的组。

8.一种药物组合物，包括如权利要求3至5中任一项所述的载体、或如权利要求6或7所述的aav颗粒，以及药学上可接受的赋形剂。

9.如权利要求1所述的多核苷酸、如权利要求2所述的核酸构建体、如权利要求3至5中任一项所述的载体、如权利要求6或7所述的aav颗粒或如权利要求8所述的药物组合物在制备在受试者中用于治疗或预防疾病的药物中的用途。

10.如权利要求9所述的用途，其中所述疾病是金属离子相关疾病。

技术总结
本公开涉及一种金属响应调控元件以及包含该调控元件的核酸构建体、载体、病毒或药物组合物。此外，本公开还涉及该调控元件以及包含该调控元件的核酸构建体、载体、病毒或药物组合物在制备用于治疗相关疾病的药物中的用途。

技术研发人员：林卿,陈意雄,彭毓哲
受保护的技术使用者：上海凌医生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29