一种重组人源化XVII型胶原蛋白、制备方法及应用与流程

本发明涉及胶原蛋白，更具体地，涉及一种重组人源化xvii型胶原蛋白、制备方法及应用。

背景技术：

1、胶原蛋白是动物机体中的一种结构蛋白，在动物的皮肤、骨骼、软骨、牙齿、肌腱初带和血管中广泛存在，对于支撑器官、保护肌体起到重要的支撑作用。它是初带和肌腱的主要成份，具有很强的伸张能力；在细胞质基质中胶原蛋白起到支撑作用它使皮肤保持弹性，皮肤衰老与胶原蛋白的老化有关。xvii型胶原蛋白（col17）是一种位于真表皮交界处的ii型跨膜蛋白col17作为表皮与真皮之间的连接体，其在基底细胞中表达，且大部分在表皮中定型为祖细胞，有数据表明col17缺失可诱导表皮增厚及新生儿表皮粘连的松动。同时还有研究表明col17通过激活wnt（信号通路）调控ife（滤泡间表皮）。ife 过度增殖是由机体老化引起的，可以通过col17补充来逆转。

2、两栖动物在长期自然选择过程中进化出一套强大的皮肤防御系统，其皮肤会分泌生物胺，蟾毒配基类化合物，生物碱，甾醇，蛋白质，多肽等活性物质，尤其是两栖动物皮肤多肽具有丰富的多样性和功能，其在伤口愈合、皮肤修复方便具备良好的应用前景。因此，如何有效利用胶原蛋白与皮肤修复多肽，协同发挥二者优势是当下应当解决的技术问题。

技术实现思路

1、针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种重组人源化xvii型胶原蛋白、制备方法及应用。本发明是从非洲爪蟾皮肤分泌液中提取得到具备高活性的皮肤修复多肽，并利用融合蛋白技术，将人源化xvii型胶原蛋白与皮肤修复多肽通过柔性氨基酸连接肽连接形成一个多功能蛋白。经验证分析，本发明的重组人源化xvii型胶原蛋白在皮肤抗皱、紧致、保湿和/或美白方面具备较大的应用前景。

2、具体而言，本发明提供了首先一种重组人源化xvii型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化xvii型胶原蛋白包括人源化xvii型胶原蛋白和皮肤修复肽重组得到的融合蛋白。

3、优选地，所述人源化xvii型胶原蛋白的编码序列如seq id no.2所示，其对应的氨基酸序列如seq id no.6所示。

4、优选地，所述皮肤修复肽的编码序列如seq id no.3所示，其对应的氨基酸序列如seq id no.1所示。

5、优选地，所述重组人源化xvii型胶原蛋白的编码序列如seq id no.7所示，其对应的氨基酸序列如seq id no.8所示。

6、优选地，所述人源化xvii型胶原蛋白和皮肤修复肽是通过肽连接子相连接。

7、进一步优选地，所述肽连接子是选自（gggs）n、（gsgs）n和/或（ggggsgggg）n，其中n取值为1-9不等的整数。

8、进一步优选地，所述肽连接子是选自（gggs）n，其中n取值为2。

9、本发明的另一方面还提供了一种重组人源化xvii型胶原蛋白的构建方法，所述方法包括如下步骤：

10、1）根据人xvii型胶原蛋白序列，进行密码子优化，得到其基因编码序列；

11、2）根据皮肤修复肽序列，经密码子优化，得到其基因编码序列；

12、3）将人xvii型胶原蛋白与皮肤修复肽通过连接子相连获得重组人源化xvii型胶原蛋白的基因编码序列；

13、4）将步骤3）克隆至载体质粒中，并转化大肠杆菌受体，提取重组质粒；

14、5）将重组质粒经电转化导入毕赤酵母，并筛选重组阳性转化子；

15、6）将获得转化子接种于液体培养基诱导发酵，发酵液经离心进行固液分离，利用离子交换层析，收集重组人源化xvii型胶原蛋白。

16、优选地，步骤1）中的所述人源化xvii型胶原蛋白的编码序列如seq id no.2所示。

17、优选地，步骤2）中的所述皮肤修复肽的编码序列如seq id no.3所示。

18、优选地，步骤3）中所述肽连接子是选自（gggs）n、（gsgs）n和/或（ggggsgggg）n，其中n取值为1-9不等的整数。

19、优选地，步骤3）中所述肽连接子是选自（gggs）n，其中n取值为2。

20、优选地，步骤4）中的质粒可选自ppic9k、puc57和/或parg4。

21、进一步地，本发明还提供了皮肤修复肽在制备重组人源化xvii型胶原蛋白中的用途。

22、进一步地，本发明还提供了重组人源化xvii型胶原蛋白在制备用于皮肤抗皱、皮肤紧致、皮肤保湿和/或皮肤美白化妆品中的用途。

23、进一步优选地，所述重组人源化xvii型胶原蛋白的生物安全性剂量在0-2mg/ml范围内。

24、本发明的优点如下：本发明首次从非洲爪蟾皮肤分泌液中提取得到具备高活性的皮肤修复多肽，并利用融合蛋白技术，将人源化xvii型胶原蛋白与皮肤修复多肽通过柔性氨基酸连接肽连接形成一个多功能蛋白。经验证分析，本发明的重组人源化xvii型胶原蛋白在皮肤抗皱、紧致、保湿和/或美白方面具备较大的应用前景。

技术特征：

1.一种重组人源化xvii型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化xvii型胶原蛋白包括人源化xvii型胶原蛋白和皮肤修复肽重组得到的融合蛋白；所述重组人源化xvii型胶原蛋白的编码序列如seq id no.5所示，其对应的氨基酸序列如seq id no.7所示。

2.如权利要求1所述的重组人源化xvii型胶原蛋白，其特征在于，所述人源化xvii型胶原蛋白的编码序列如seq id no.2所示，其对应的氨基酸序列如seq id no.6所示。

3.如权利要求1所述的重组人源化xvii型胶原蛋白，其特征在于，所述皮肤修复肽的编码序列如seq id no.3所示，其对应的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4.如权利要求1所述的重组人源化xvii型胶原蛋白，其特征在于，所述人源化xvii型胶原蛋白和皮肤修复肽是通过肽连接子相连接。

5.如权利要求4所述的重组人源化xvii型胶原蛋白，其特征在于，所述肽连接子是选自（gggs）n、（gsgs）n和/或（ggggsgggg）n，其中n取值为1-9不等的整数。

6.如权利要求5所述的重组人源化xvii型胶原蛋白，其特征在于，所述肽连接子是选自（gggs）n，其中n取值为2。

7.权利要求1-6任一项所述的重组人源化xvii型胶原蛋白的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

8.如权利要7所述的方法，其特征在于，步骤4）中的质粒可选自ppic9k、puc57和/或parg4。

9.如权利要求1-6任一项所述的重组人源化xvii型胶原蛋白在制备用于皮肤抗皱、皮肤紧致、皮肤保湿或皮肤美白化妆品中的用途。

10.如权利要求7-8任一项所述的方法得到的重组人源化xvii型胶原蛋白在制备用于皮肤抗皱、皮肤紧致、皮肤保湿或皮肤美白化妆品中的用途。

技术总结
本发明属于胶原蛋白技术领域，具体是提供了一种重组人源化XVII型胶原蛋白、制备方法及应用。本发明中的重组人源化XVII型胶原蛋白是基于融合蛋白的技术构思，将人源化XVII型胶原蛋白与皮肤修复多肽通过柔性氨基酸连接肽连接形成一个多功能蛋白。经验证分析，本发明的重组人源化XVII型胶原蛋白在皮肤抗皱、紧致、保湿和/或美白方面具备较大的应用前景。

技术研发人员：谢坤,刘浩
受保护的技术使用者：百肽德医药生物科技（广东）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/9