本发明涉及一种体外诊断试剂用抗原分子及其用途，具体涉及一种链球菌溶血素“o”多聚体、制备方法及其用途。
背景技术：
1、链球菌溶血素“o”(slo)是一种硫醇活性胆醇结合细胞溶素，分子量约69kda，它们能够在宿主细胞表面聚合形成直径约为25nm－30nm的孔洞使毒蛋白进入细胞质，对细胞产生毒性作用。slo可由乙型溶血性链球菌当中的a族链球菌，c族链球菌和g族链球菌产生。slo具有很强的抗原性，当人体感染a族溶血性链球菌后，b淋巴细胞便会在slo的刺激下分泌相应的抗体，称之为抗链球菌溶血素“o”(aso)。aso可作为检测乙型溶血性链球菌感染的重要指标，临床上主要用于急性风湿热的诊断。
2、抗链球菌溶血素“o”测定，过去比较经常采用的是中和试验(溶血抑制试验)，后来采用较方便的酶联免疫法(elisa)、免疫比浊法(tia)、胶乳凝集法，其中，酶联免疫法凭借较高灵敏度一度被关注，但其操作步骤繁琐，从抗原包被到显色读数需多步孵育，不仅延长检测周期，手工操作环节也增加了人为误差风险。免疫比浊法虽实现了自动化检测，却对试剂特异性要求严苛。slo具有多个抗原决定簇，可刺激机体产生针对不同表位的aso多克隆抗体。发明人研究发现，当使用含slo单体标记微球的试剂盒检测部分样本时，检测结果较实际含量偏低。发明人进一步研究发现，这类样本可能含有多种不同种类的丰富抗体，而slo单体标记微球对机体产生的多种抗体未能全部有效检测出，检测结果的偏低程度与机体未被识别抗体种类及丰度相关。分析其原因，推测是由于空间位阻及微球表面的限制作用，微球表面的slo抗原所暴露的抗原表位相对有限，部分种类的抗原表位被折叠或因空间位阻效应无法有效参与免疫反应，导致机体产生的一些种类抗体与抗原的结合机会减少。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本发明通过将链球菌溶血素“o”预交联为抗原多聚体，使其抗原表位充分暴露并使整个抗原多聚体结构稳定。使用这种抗原多聚体制备检测试剂盒，具有反应性强、灵敏度好的优点，因此检测结果更为准确、可靠，同时能够减少抗原原料用量。
2、本发明的目的之一在于提供一种链球菌溶血素“o”多聚体。
3、一种链球菌溶血素“o”多聚体，由2-8个链球菌溶血素“o”蛋白单体通过交联剂交联形成。
4、作为优选，所述多聚体由3-8个链球菌溶血素“o”蛋白单体交联形成。
5、作为优选，所述多聚体由3-6个链球菌溶血素“o”蛋白单体交联形成。
6、优选地，所述交联剂为戊二醛。
7、本发明的目的之二在于提供一种链球菌溶血素“o”多聚体的制备方法。
8、将所述链球菌溶血素“o”蛋白单体与交联剂在缓冲液中进行交联反应，分离得到所述多聚体。
9、优选地，所述交联剂为戊二醛。
10、优选地，交联反应后用封闭剂封闭，再分离所述多聚体。
11、优选地，所述封闭剂为氰基硼氢化钠。
12、本发明的目的之三在于提供一种链球菌溶血素“o”多聚体偶联物。
13、一种链球菌溶血素“o”多聚体偶联物，由上述多聚体与标记物或/和固相载体连接形成；所述标记物选自酶标记、生物素标记、荧光染料标记、化学发光染料标记、纳米颗粒标记、放射性标记中的一种或多种；所述固相载体选自颗粒、微球、板或膜。
14、本发明的目的之四在于提供一种链球菌溶血素“o”多聚体或其偶联物的用途。
15、如上所述多聚体或所述多聚体偶联物在制备检测抗链球菌溶血素“o”抗体的试剂中的应用。
16、本发明的目的之五在于提供一种检测试剂。
17、一种检测抗链球菌溶血素“o”抗体的试剂，包括如上所述多聚体或多聚体偶联物。
18、可选地，所述试剂中多聚体或多聚体偶联物也可以是两种或几种多聚体或多聚体偶联物混合使用。
19、可选地，所述试剂中单种多聚体或单种多聚体偶联物占所有多聚体或多聚体偶联物的质量比为70％以上。
20、优选地，所述试剂中所述单种多聚体或单种多聚体偶联物占所有多聚体或多聚体偶联物的质量比为80％以上。
21、试剂中的多聚体或多聚体偶联物以单种为主，或者使用多种多聚体或多聚体偶联物，均可以进行检测。从方便试剂制备和质量控制的角度看，试剂中的多聚体或多聚体偶联物以单种多聚体或单种多聚体偶联物为主，较容易实施。
22、本发明的目的之六在于提供一种检测试剂盒。
23、一种试剂盒，包括如上所述多聚体或如上所述多聚体偶联物。
24、本发明的目的之七在于提供一种检测方法。
25、一种非诊断目的的检测抗链球菌溶血素“o”抗体的方法，包括如下步骤，采用如上所述的多聚体或如上所述多聚体偶联物与样本中的抗体形成免疫复合物。
26、本发明中，待测的生物样本可以以任何形式存在，例如体液(血液、血清、血浆、泪液、汗液、尿液、组织分泌液、脑脊液、唾液)、组织(如组织切片，组织提取液)或其他来自人体的样本。
27、本发明的检测方法可以是免疫层析法、酶联免疫吸附法、化学发光法、胶乳免疫比浊法中的至少一种。
28、专利文献cn102161716b公开先将胶乳与无关蛋白(bsa)连接，再使用戊二醛将抗原或抗体交联在无关蛋白上，采用温和的交联条件，减少抗原或抗体的活性损失。但其目的是为了提高抗原或抗体的结构稳定性，并不涉及胶乳微球表面偶联抗原的多个不同抗原表位暴露充分性，因此采用这种胶乳微球试剂进行检测仍然存在测值偏低的情况。本发明则是将slo蛋白单体交联为多聚体，交联后其整体的空间构象相较于单体存在一定变化，具体表现为：多聚体中slo单体的抗原表位得以相对充分展示，更多抗体结合域被暴露出来。同时，交联形成的多聚体结构为抗体提供了更广阔的结合位点和更佳的空间接触条件，这种结构的改变增加了抗原-抗体相互作用的机会，更有利于抗体与抗原的结合。
29、本发明的有益效果：
30、将slo单体交联制备为slo多聚体，增强了其与抗体反应性。将slo多聚体用于制备检测试剂，提升了aso检测试剂盒对不同种类aso抗体的检测力度，进而提高了试剂盒的检测灵敏度和特异性，使其在临床检测中能更全面、准确地识别不同种类的aso抗体，使得临床结果较slo单体包被胶乳微球试剂检测结果更为精准。特别是slo多聚体中单体数量为2-8个时，多聚体分子量不至于过大，既保持了与多克隆抗体结合的反应度，又不至于因hook效应而导致反应度过低，同时节约多聚体制备成本。
1.一种链球菌溶血素“o”多聚体，其特征在于，由2-8个链球菌溶血素“o”蛋白单体通过交联剂交联形成。
2.根据权利要求1所述多聚体，其特征在于，所述多聚体由3-6个链球菌溶血素“o”蛋白单体交联形成；优选地，所述交联剂为戊二醛。
3.如权利要求1或2所述多聚体的制备方法，其特征在于，将所述链球菌溶血素“o”蛋白单体与交联剂在缓冲液中进行交联反应，分离得到所述多聚体。
4.如权利要求3所述制备方法，其特征在于，所述交联剂为戊二醛。
5.如权利要求3所述制备方法，其特征在于，交联反应后用封闭剂封闭，再分离所述多聚体；优选地，所述封闭剂为氰基硼氢化钠。
6.一种链球菌溶血素“o”多聚体偶联物，其特征在于，所述多聚体偶联物由权利要求1或2所述多聚体与标记物或/和固相载体连接形成；所述标记物选自酶标记、生物素标记、荧光染料标记、化学发光染料标记、纳米颗粒标记、放射性标记中的一种或多种；所述固相载体选自颗粒、微球、板或膜。
7.如权利要求1或2所述多聚体或如权利要求6所述多聚体偶联物在制备检测抗链球菌溶血素“o”抗体的试剂中的应用。
8.一种检测抗链球菌溶血素“o”抗体的试剂，其特征在于，包括如权利要求1或2所述多聚体或如权利要求6所述多聚体偶联物；优选地，所述试剂中单种多聚体或单种多聚体偶联物占所有多聚体或多聚体偶联物的质量比为70％以上；更优选地，所述试剂中所述单种多聚体或单种多聚体偶联物占所有多聚体或多聚体偶联物的质量比为80％以上。
9.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求8所述试剂。
10.一种非诊断目的的检测抗链球菌溶血素“o”抗体的方法，其特征在于包括如下步骤：采用如权利要求1或2所述的多聚体或如权利要求6所述多聚体偶联物与样本中的抗体形成免疫复合物。