专利名称：:玉米事件mir162的制作方法玉米事件MIR162
背景技术：
：oooi]本发明总体上涉及植物分子生物学、植物转化，以及植物育种的领域。更具体而言，本发明涉及包含新颖的转基因的基因型的抗昆虫的转基因玉米植物并涉及检测核酸的存在的方法，这些核酸对在样品中及其组合物中的转基因玉米植物是独特的。00021植物害虫是在全世界重要农作物损失中的一个主要因素。由于非哺乳动物害虫(包含昆虫)的侵染，仅在美国每年就损失大约80亿美元。除了农作物中的损失之外，虫害对于菜农和果农，对于观赏性花卉的生产商，以及对于家庭花匠也是一种负担。00031虫害主要是通过密集使用化学杀虫剂来控制，这些化学杀虫剂通过抑制昆虫成长，预防昆虫摄食或繁殖，或者导致死亡而有效。由此可以达到好的昆虫控制，但这些化学品有时也能影响其他益虫。由化学杀虫剂的广泛使用产生的另一个问题是出现了有抵抗力的昆虫品种。通过各种抵抗管理实践已部分地緩和了这一状况，但对可替代的虫害控制剂仍有不断增加的需求。生物性害虫控制剂，例如表达杀虫毒素(像5-内毒素)的^云会,應并,(Bt)林，也已经用于农作物而产生了令人满意的结'果，为化学杀虫剂提供了一种替代或补充(compliment)。对某些这种5—内毒素编码的基因已经被分离出，并且它们在异源宿主中的表达已被证明为控制经济上重要的虫害提供了另一种工具。尤其是，Bt5-内毒素的表达已针对选定的虫害提供了有效的保护，并且表达这些毒素的转基因植物已经商业化，这就允许农民减少化学昆虫控制剂的使用。ii00041也已鉴定出在生长的营养阶段由并,种产生的另一个杀虫的蛋白质家族(植物性的杀虫蛋白质(Vip))。美国专利5,877,012、6,107,279以及6，137，033(通过引用而纳入本文)描述了被称为Vip3的新类型的杀虫蛋白质。其他披露，包括WO98/18932、WO98/33991、WO98/00546，以及WO99/57282，现也已鉴定出该Vip3类蛋白质的同系物。Vip3编码序列编码大约88kDa的蛋白质，这些蛋白质具有针对广i普的鳞翅类害虫的杀虫活性，这些害虫包括但不限于，小地老虎(blackcutworm)(BCW，J^ro〃《//m7。/7)，秋夜蛾(fal1armyworm)(FAW，勤odo;^era/Vwg/per^s)，烟草夜蛾幼虫(tobaccobudworm)(TBW,#e//c^A/sF/resce/2S)，甘蔑螺虫(sugarcaneborer)(SCB，"/"raeasac由ra//^)，小玉米钻心虫(lessercornstalkborer)(LCB，S/as迈，//^//g加se//[^)，以及棉铃虫(cornearworm)(CEW，^//co^rpazea)，并且当在转基因植物(例如玉米(；萄漆))中表达时，对植物给予保护使其免受昆虫摄食损伤。ooosi当前植物转化方法通常导致像vip3的转基因随机整合进入宿主植物基因组中。如果该外来DNA碰巧插入一个非常重要的自然基因，并且因此突变，则被引入的DM的这种随机的插入植物基因组中可以是致命的。另外，即使随机插入事件(event)不损害宿主细胞基因的功能，插入的外源基因的表达可以受到由周围基因组DM引起的"位置效应"的影响。在一些情况下，该基因被插入至一些位点中，在这些位点的位置效应足够强以致阻止从该引入基因合成有效量的产物。例如，在植物中已观察到，在单个挑选的事件中，被引入至植物的染色体中的异源基因的表达水平可能存在广泛的变化。在表达的空间模式或时间模式上也可能存在不同，例如，在不同植物组织中的转基因的相对表达的不同，这可能与预期来自在该引入基因构建体中存在的转录调节元件的模式不对应。在其他情况中，该基因产物的过度生产对细胞具有有害作用。由于这些潜在的问题，通常的做法是生产几百种不同、的事件并且筛选这些事件得出一个单独事件，该单独事件具有对于商业目的所希望的转基因表达模式和水平。然而，一旦在该植物的基因组中确认了具有商业上可行的位点，有利的是将相关基因靶向至那个非有害的位点。本发明涉及转化的玉米(事件，被称为MIR162，它包含新颖的转基因的基因型，该基因型包含W;Wa^薦码序列，它对事件MIR162是独特的。该W/7^aM编码序列编码Vip3Aa20杀虫蛋白质，该蛋白质给予MIR162玉米植物以昆虫抵抗性。该MIR162事件还包含/7迈/薦码序列，该序列编码了PMI蛋白质，该蛋白质给予玉米细胞利用甘露糖作为碳源的能力。除该W;7X^0编码序列之外，本发明还提供对MIR162独特的其他核酸。本发明还提供了包含对MIR162独特的核酸的转基因的玉米植物，来自这些转基因的玉米植物的种子，以及生产包含本发明的独特的核酸的转基因的玉米植物的方法，该方法是通过将包含对MIR162独特的核酸的玉米近交系自身杂交或将其与不同基因型的另一种玉米系杂交。种子的一个实例，以及因此从该种子长成的玉米植物(包含对MIR162独特的核酸)，以登记号PTA-8166保藏于美国典型微生物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)。除了通过本发明的新型基因型给予这些玉米植物的特征之外，本发明的转基因的玉米植物可基本上具有对应的等基因的非转基因的玉米植物的所有形态学及生理学的特征。本发明还提供了来自MIR162玉米植物、组织和种子的生物样品以及提取物。本发明还提供了用于检测在生物样品中对MIR162独特的核酸的存在的组合物以及方法，这是基于插入至该玉米基因组的产生该MIR162事件的重组表达盒的DNA序列，以及位于插入点侧翼的基因组序列的DNA序列。本发明还提供了在玉蜀黍染色体上的非有害的插入靶位点，它有助于将相关基因插入至在该染色体的特定位置，以及在所披露的插入位点或所披露的插入位点附近通过插入异源核酸改变玉蜀黍基因组的方法。该MIR162事件的进一步地通过如下进行表征分析该Vip3Aa20和PMI蛋白质的表达水平以及测试MIR162对抗鳞翅类虫害的效力。本发明还提供了通过堆积该Vip3Aa20抗昆虫的特性与不同于Vip3Aa20的抗昆虫的特性而生产抵抗广镨害虫的转基因的玉米植物的方法。本发明上述以及其他方面将从以下详细说明中变得更清楚。序列表中序列的说明SEQIDNO:1是MIR162中的Vip3Aa20编码序列。SEQIDNO:2是Vip3Aa20氨基酸序列。SEQIDNO:3是质粒pN0V1300的序列。SEQIDNos:4至12是在TAQMAN测定中有用的引物和探针。SEQIDNO:13是vip3Aa20探针的序列。SEQIDNO:14pmi探针的序列。SEQIDNos:15至37是在本发明中有用的引物。SEQIDNo:38是vip3Aa20扩增子的序列。SEQIDNos:39至40是在本发明中有用的引物。SEQIDNo:41是该CJ134/1795'扩增子的序列。SEQIDNos:42至43是在本发明中有用的引物。SEQIDNO:44是vip3Aa203'扩增子。SEQIDNO:45是5'基因组插入接头。SEQIDNO:46是在插入的5'侧翼的玉米基因组序列。SEQIDNO:47是3'插入基因组接头。SEQIDNO:48是在插入的3'侧翼的玉米基因组序列。SEQIDNO:49是MIR162插入序列和侧翼序列。SEQIDNos:50至54是本发明中有用的引物。SEQIDNO:55是5'PCR扩增子。SEQIDNos:56至58是本发明中有用的引物。SEQIDNO:59是3'PCR扩增子。SEQIDNos:60至105是本发明中有用的引物。SEQIDNO:106是包含所披露的染色体靶位点的玉蜀黍染色体5的区域的序列。SEQIDNO:107是通过在MIR162中插入异源DM而替换的玉蜀黍基因组序列。详细说明如此处所用，术语转基因的"事件(event)"是指通过用异源DNA(例如，包括相关基因的表达盒)转化和再生植物细胞或组织而产生的重组植物，。术语"事件"是指包含异源DNA的原始转化体和/或该转化体的子代。术语"事件，，也指在转化体与另一玉米系之间通过有性异型杂交而产生的子代。即使在重复与回归亲本回交后，来自该转化的亲本的插入DNA和侧翼DNA存在于在该杂交子代的同样的染色体位置。术语"事件"也指来自原始转化体的DNA，包含该插入DNA以及直接邻近该插入DNA的侧翼基因组序列，其预期将被转移至子代中，该子代作为包含该插入DNA(例如，该原始转化体及由自交产生的子代)的亲本品系与不含该插入DNA的亲本品系的有性杂交的结果而接收了包含相关转基因的插入DNA。通常，植物组织的转化产生多个事件，每个事件代表DNA构建体插入至植物细胞的基因组的不同位置上。基于该转基因的表达或其他希望的特征，选择特殊的事件。因此，"事件MIR162"、"MIR162"或者"MIR162事件，，可以互换地使用。0017j抗昆虫的MIR162玉米植物可以通过第一亲本玉米植物与缺乏昆虫抵抗性的第二亲本玉米植物的第一次有性杂交而进行培育，该第一亲本玉米植物包括从转基因的MIR162玉米植物生长出的玉米植物，例如从保藏于ATCC以登记号为PTA-6188的种子长成的MIR162玉米植物，及其用本发明的实施方式的表达盒转化而得的子代，该转化给予了昆虫抵抗力，由此产生多个第一子代植物；并且然后选择抵抗昆虫的第一子代植物；并将该第一子代植物自交，由此产生多个第二子代植物；并且然后从这些第二子代植物选择抗昆虫的植物。这些步骤可以进一步包括该第一抗昆虫的子代植物或该第二抗昆虫的子代植物与该第二亲本玉米植物或第三亲本玉米植物回交，由此产生抵抗昆虫的玉米植物。在这个实施方式的另一方面中，该第一多核苷酸引物(在SEQIDNO:53中给出)，以及该第二多核苷酸引物(在SEQIDNO:54中给出)，在样品中在玉米事件MIR162DNA模板存在时共同起作用，以产生如实施例5所描述的对该玉米事件MIR162诊断性的扩增子。在一个实施方式中，该扩增子包含在SEQIDNO:55中给出的核苷酸序列。在还有另一个实施方式中，本发明包含检测在包含玉米核酸的样品中对于事件MIR162独特的核酸分子存在的方法，其中该方法包括(a)用多核苷酸引物对接触该样品，当用来自事件MIR162的基因组DNA用于核酸扩增反应时，该引物对产生对事件MIR162诊断性的扩增子；(b)进行核酸扩增反应，由此产生该扩增子；并且(c)检测该扩增子。在这个实施方式的一个方面中，该扩增子包含选自下组的核苷酸序列，该组的构成为SEQIDN0:1、SEQIDN0:38、SEQIDN0:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55、SEQIDNO:59，以及其互补物。在另一个实施方式中，本发明包含衍生自MIR162玉米植物、组织或者种子的生物样品的提取物，它包含核苷酸序列，该核苷酸序列是对MIR162独特的序列或与对MIR162独特的序列互补。在这个实施方式的一个方面中，该序列用核酸扩增或核酸杂交的方法能够在该提取物中检测到。在这个实施方式的另一个方面中，该序列是SEQIDNO:1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55,或SEQIDNO:59，或者与上面的序列互补。在这个实施方式的还有另一个方面中，该样品选自下组，该组构成为玉米面、玉米粉、玉米糖浆、玉米油、玉米淀粉，以及包含玉米副产物的全部或部分制造的谷类餐品。在植物中控制雄性能育性的可靠方法为改善的植物育种提供了机会。这对依赖于某些雄性不育系统的玉米杂种的发展尤其是成立的。对培育者而言有几个可用的控制雄性能育性的选择，例如，手工或机械去雄(或去雄花穗)、细胞质的雄性不育性、遗传雄性不育性、杀配子药等等。00811杂种玉米种子通常通过结合手工或机械去雄花穂的雄性不育系统而典型地产生。两个玉米近交在交错的条中种植在一块地上，并且从一个近交(雌性)中去除带花粉的雄花穗。假如能足够隔离外来玉米花粉源，则该去雄花穂近交系的耳穗将只从另一个近交系(雄性)受精，并且因此得到的种子是杂种，并将形成杂交植物。0082j通过使用本领域中给予遗传的雄性不育的许多方法(每种方法都有其自身的优点和缺点)中的一种方法能够避免这种费力的且有时不可靠的去雄花穗的方法。这些方法采用多种方式，例如在植物中传递一种基因，该基因编码一种细胞毒物质，该细胞毒物质与雄性组织特异性启动子或反义系统相关，其中对生育力至关重要的基因被鉴定出来，并且该基因的反义物被插入至该植物中(参见Fabinjanski等EPO89/3010153.8公开文件号329,308和公开号为W090/08828的PCT公开文件PCT/CA90/00037)。0083使用雄性不育近交只是玉米杂种生产中的一个因素。本领域已知的且在玉米植物育种计划中使用的植物育种技术包括但不限于，回归选择、回交、系i普育种、限制长度多态性增强的选择、遗传标记物增强的选择和转化。在玉米植物育种计划中玉米杂种的发展总体上需要纯合近交系的发展、这些系的杂交、并且这些杂交的评估。系语育种和回归选择育种方法被用于开发来自繁殖群体的近交系。玉米植物育种计划结合了来自两个或多个近交系或各种其他种质源的遗传背景进入育种库中，从该库中通过自交和选择所希望的表型而发展新近交系。这些新近交与其他近交系杂交，并且评价来自这些杂交的杂种以确定它们当中哪些具有商业潜力。如在玉米植物育种计划中所实践的，植物育种和杂种开发是昂贵且耗时的过程。在玉米植物育种计划中的玉米杂种的发展涉及三个步骤(1)从不同种质库选择植物用于起始育种杂交；(2)从几代的育种杂交中选择的植物进行自交以产生一系列近交系，虽然这些近交系彼此不同，但是它们纯育传代且高度均一；并且(3)将被选择的近交系与不同的近交系杂交以产生杂种子代(FJ。在玉米的近系繁殖过程中，这些品系的活力下降。当两种不同近交系杂交以产生杂种子代(FJ时活力被恢复。这些近交系的纯合性和均一性的重要结果是在已限定的一对近交之间的杂种将总是一样的。一旦提供优良杂种的近交被鉴定出来，只要保持该近交亲本的均一性，就能无限地复制该杂种种子。00891当两个近交系进行杂交以生产该F！子代时就产生单杂交杂种。双杂交种是从成对杂交的四个近交系(AxB)X(CxD)中产生，并且接着该两个Fi杂种再次进行(AxB)X(CxD)杂交。三系杂交杂种是从三个近交系产生，其中这三个近交系中的两个(AxB)杂交，并且接着将所得到的F!杂种与该第三个近交进行杂交(AxB)XC。通过Fi杂种展示的多数杂种活力在下一代(F2)中消失。因此，来自杂种的种子不用于种植。0090杂种的种子生产需要将通过该母本产生的花粉消除或失活。花粉的不完全去除或失活为自花授粉提供了可能性。这个不注意地自我授粉的种子可能无意中与杂种种子一起收获并包装。以下实施例仅旨在说明本发明的一个或多个优选的实施方案，并且不应被解释为限制本发明的范围。实施例^滋辨A,斧W橫必和逸举对两种转基因阳性并且对^ec基因阴性的植物被转移至温室中进一步繁殖。通过使用抗秋夜蛾的昆虫生物测定鉴定并筛选出阳性事件。通过TAQMAN分析就拷贝数表征杀虫事件。基于具有单一拷贝的该转基因、如用ELISA鉴定出的良好的蛋白质表达，以及良好的抗秋夜蛾的杀虫活性选择MIR162进行进一步分析。[OOiOOj该MIR162事件的育种系谱如下T。MIR162植物(xNPH8431)+今NPH8431(MIR162)F！(xNP2161)+NP2161(MIR162)Fi(xNP2161)+NP2161(MIR162)BC1F,(xB9620)+Fi(xB9620)+BC1F!(xB9620)+BC2Fi(xB9620)+BC3F！(xB9620)+BC4F！(xB9620)。将来自BC4代的植物材料用于DNA分析、插入DNA的拷贝数确定和测序。这些实验的阴性对照由来自BC4代的IO个阴性分离子植物组成。实施例2.通过TAQMANPCR检测MIR162用于DNA分析的基因组DNA基本上用Thomas等的方法(Theor.Appl.Genet.86:173-180，1993)(通过引用纳入本文)，从代表MIR162的BC4代的IO棵植物的汇集的叶组织中分离出来。用于DM分离的所有植物用TAQMANPCR(如实施例2所描述的)逐个进行分析以确认存在单个拷贝的W/0^"差厉和萍/基因。对于阴性分离子对照，DNA从BC4代的阴性分离子的汇集的叶组织中分离出来。这些阴性分离子植物用TAQMANPCR逐个进行分析以确认W/0^^和;7/z/基因的缺失，但如所预期，它们对内源玉蜀黍a^/基因呈阳性。47[001061使用常规的分子生物学技术进行DM分析(参见Chomczynski，P.1992.AnalyticalBiochemistry201:34-139)。基因组DNA(7.5ng)用限制性内切酶进行酶解，这些限制性内切酶在事件MIR162插入物内酶解，但在对应于本实验使用的特异探针的编码序列内不酶解。这个方式允许确定并入事件MIR162中的每个基因的拷贝数目，对应于用于每个DM分析的特异探针。100107]进行了另一个系列的限制性酶解，其中用限制性内切酶酶解该插入物，这将从该插入物中释放已知大小的片断。这个方法为在MIR162中存在单个拷贝的各编码序列提供了额外的证据，并允许检测可能被紧密地连接至MIR162插入物的插入物的部分拷贝。在琼脂糖胶电泳以及碱转移至一个Zeta-ProbeGT膜(Bio-Rad，Cat.No,162-0195)后，使用全长的PCR产生的元件探针进行杂交。这些探针使用MegaPrime系统(AmershamBiosciences,Cat.No.RPN1607)通过随机引物法用"P进行标记。在65X:进行杂交，随后在2XSSC，0.1%SDS中，并且接着在0.IXSSC和0.1%SDS中多次冲洗。接着对这些膜进行放射自显影。1001081在每个DM分析中包含了三个对照样品(1)来自阴性(非转化的)分离子的DNA，用于鉴定任何内源性的可能与元件特异性探针交叉杂交的；萄,序列；(2)来自阴性分离子的DNA，在该分离子中引入了一定量的酶解的pN0V1300，该酶解的量与基于质粒大小被引入的一个拷贝数相等，用于表明本实验在检测玉萄#基因组内的单个基因拷贝中的敏感性；以及(3)经酶解的pNOV1300质粒，其等于基于质粒大小的一个拷贝数，用于作为杂交的阳性对照以及表明本实验的敏感性。001091DNA分析的结果表明该MIR162插入物包含单个w^Ua^基因和/7边/基因，并且不包含pNOV1300主链序列。W/7^a/夕探针(SEQIDNO:13)用于进行W/X^^DNA分析。W;J^/夕和W/7WaM的核苷酸序列由两个核苷酸相区别，且99.9%是相同的。因此，该W/Wa/夕探针在严格条件下与存在于MIR162中的W;Wa^序列杂交。使用该K2'/7Xis/夕探针，J/w/和^t^r酶解分别产生约8kb和13kb大小的单一杂交带。此外，A^o/双酶解产生与预期的4.6kb大小一致的单一杂交带。使用该；7/z7/探针(SEQIDNO:14),Jcc"/和^迈A7酶解分别产生约4kb和6kb大小的单一杂交带。此外，J/zal+双酶解产生与预期的8.lkb大小一致的单一杂交带。该8.lkbJ则I+pN0V1300带(阳性对照)也如预期与该W;J^/夕和/7边i探针杂交。用DNA梯度探针在仅有质粒的道中检测出一些交叉杂交。典型的可商购的DNA梯度可能含有一些载体序列，这些载体序列能如在这些实验中观察到的那样与质粒对照序列交叉杂交，但这不影响本研究的发现。最终，pN0V1300主链探针没有杂交表明在转化过程中没有任何pNOV1300载体主链序列并入MIR162中。实施例4.异源DNA插入物测序iooiio确定了插入MIR162的异源DNA分子中的7//Oi3和；^/编码序列的核苷酸序列，以表明该插入物的整体的完整性、功能元件的连续性，并检测任何单独的碱基对变化。从衍生自BC4代的DNA扩增编码序列。釆用ExpandHighFidelityPCR系统(Roche，Cat.No.1732650)或PfuUltraHotstartHigh-FidelityDNA聚合酶(Stratagene，Cat.No.600390)进行PCR扩增。每个PCR产物被单独地克隆至pCR-XL-T0P0载体(Invitrogen，Cat.No.K4700-20)或pCR-BluntII-TOPO载体(Invitrogen，Cat.No.K2800-20)中，并且对每个PCR产物的三个单独的克隆进行鉴定并测序。使用ABIBigDye1.1或BigDye3.1dGTP(用于GC丰富的模板)化学法使用ABI3730XL分析仪进行测序。使用来自华盛顿大学(UniversityofWashington)的Phred、Phrap和Consed包进行序歹U分析，并且该序列分析进行的误差率少于10，000个碱基中1个(￡11^&Green,1998.GenomeResearch8:186-194)。每个基因的最终一致序列通过结合来自三个单独的克隆的序列数据进行确定以针对每个基因产生一个一致序列。采用ClustalW程序使用下列参数进行序列对比记分矩阵(scoringmatrix)blosum55、空位开放罚分(gapopeningpenalty)15、空位延伸罚分(gapextensionpenalty)6.66(Thompson等，1994.NucleicAcidsResearch22:4673-4680)。ooiii完整的WpX^M编码序列采用下列引物和户/》UltraHotstart酶进行PCR扩增MOV3Aa-01-5':5'ATGAACAAGAACAACACCAA3'(SEQIDNO:15)以及MOV3Aa-01-3':5'CTACTTGATGCTCACGTCGTAG3'(SEQIDNO:16)，产生一个2370bp产物。该PCR扩增子使用表2中所示的引物进行测序。表2引物名称序列(5W)序列号b03503bACGAGCAGAACCAGGTGCSEQIDNO17b03503cGGTGAAGAAGGACGGCAGSEQIDNO18b03503dACCTGTCGCAAGCTGCTGGGSEQIDNO19b03503eTGGACAAGCTGCTGTGTCSEQIDNO20b03503fTGCAGGCCGACGAGAACAGSEQIDNO21b03503gTGATCCAGTACACCGTGAASBQIDNO22b03503hACCCTGACCCTGTACCAGSEQIDNO23b03504bGTGTTGCCGCTGATGTTGSEQIDNO24b03504cCGTACTCGGTCTTCGGCTSEQIDNO25b03504dCTGCAGGCCAAAGCCGTTSEQIDNO26b03504eTCGCCGTAGATCACCTCGSEQIDNO27b03504fGCTTGCGACAGGTGGTCASEQIDNO28b03504gTTGCTGCTGGTCTCGGTGGSEQIDNO29b03504hCGTTGGCGATCTTAAGGATSEQIDNO30b00203cGCAAGCCATCGATTCACSEQIDNO31b00203dGCAACACCCTGACCCTGSEQIDNO32b00203eTCTACGACGTGAGCATCAAGSEQIDNO33b00203fGTAGAAGTGCACGATCGGGSEQIDNO34b00203gCGGTGCTGGTCCAGTTGSEQIDNO:35—致序列数据揭示，与pN0V1300中的WpWa编码序列(被指定为W;0^/刃(它被用于转化MIR162)相比，MIR162中的W/7"5编码序列(被指定为W/7^W"中有两个核苷酸变化。第一个核苷酸变化，一个G至T的突变，发生在W;WW夕薦码序列(SEQIDNO:3)的387位置。这一突变导致Vip3Aal9的129位置的甲硫氨酸变为Vip3Aa20的异亮氨酸(M1291)。第二个核苷酸变化发生在编码序列的1683位置，一个G至C的突变，但不产生氨基酸的变化。因此，该W/7^a^编码序列和该Vip3Aa20蛋白质对MIR162事件是独特的，并可用于鉴定包含该MIR162转基因的基因型的任何植物。该jM7/编码序列MIR162与转化质粒p丽1300中的序列相同。Vip3Aa2Q和Vip3Aal9杀虫蛋白质的比对显示在表3中。<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>Vip3Aa20Vip3Aal9(101)(101)NDVNNKLDAINTMLRVYLPKITSMLSDVIKQNYALSLQIEYLSKQLQEISNDVNNKLDAINTMLRVYLPKITSMLSDVMKQNYALSLQIEYLSKQLQEISVip3Aa20Vip3Aal9(151)(151)DKLDIINVNVLINSTLTEITPAYQRUYVNEKFEELTFATETSSKVKKDGDKLDIINVNVLINSTLTEITPAYQRIKYVNEKFEELTFATETSSKVKKDGVip3Aa20Vip3Aal9(201)(201)SPADILDELTELTELAKSVTKNDVDGFEFYLNTFHDVMVGNNLFGRSALKSPADILDELTELTELAKSVTKNDVDGFEFYLNTFHDVMVGNNLFGRSALKVip3Aa20Vip3Aal9(251)(251)TASELITKENVKTSGSEVGNVYNFLIVLTALQAQAFLTLTTCRKLLGLADTASELITKENVKTSGSEVGNVYNFLIVLTALQAQAFLTLTTCRKLLGLADVip3Aa20Vip3Aal9(301)(301)IDYTSIMNBHLNKEKEEFRVNILPTLSNTFSNPNYAKVKGSDEDAKMIVEIDYTSIMNEHLNKEKEEFRVNILPTLSNTFSNPNYAKVKGSDEDAKMIVEVip3Aa20Vip3Aal9(351)(351)AKPGHALIGFEISNDSITVLKVYEAKLKQNYQVDKDSLSEVIYGDMDKLLAKPGHALIGFEISNDSITVLKVYEAKLKQNYQVDKDSLSEVIYG薩KLLVip3Aa20Vip3Aal9(401)(401)CPDQSEQIYYTNNIVFPNEYVITKIDFTKKMKTLRYEVTANFYDSSTGEICPDQSEQIYYTNNIVFPNEYVITKIDFTKKMKTLRYEVTANFYDSSTGEIVip3Aa20Vip3Aal9(451)(451)DLNKKKVESSEAEYRTLSA腳GVYMPLGVISETFLTPINGFGLQADENSDLNUKVESSEAEYRTLSANDDGVYMPLGVISETFLTPINGFGLQADENSVip3Aa20Vip3Aal9(501)(501)RLITLTCKSYLRELLLATDLSNKETKLIVPPSGFISNIVENGSIEEDNLERLITLTCKSYLRELLLATDLSNKETKLIVPPSGFISNIVENGSIEEDNLEVip3Aa20Vip3Aal9(551)(551)PWKANNKNAYVDHTGGVNGTKALYVHKDGGISQFIGDKLKPKTEYVIQYTPWKANNKNAYVDHTGGVNGTKALYVHKDGGISQFIGDKLKPKTEYVIQYTVip3Aa20Vip3Aal9(601)(601)VKGKPSIHLKDENTGYIHYEDTNNNLEDYQTINKRFTTGTDLKGVYLILKVKGKPSIHLKDENTGYIHYEDTNNNLEDYQTINKRFTTGTDLKGVYLILKVip3Aa20Vip3Aal9(651)(651)SQNGDEAWGDNFIILEISPSEKLLSPELINTNNWTSTGSTNISGNTLTLYSQNGDEAWGDNFIILEISPSEKLLSPELINTNNWTSTGSTNISGNTLTLYVip3Aa20Vip3Aal9(701)(701)QGGRGILKQNLQLDSFSTYRVYFSVSGDANVRIRNSREVLFBKRYMSGAKQGGRGILKQNLQLDSFSTYRVYFSVSGDANVRIRNSREVLFEKRYMSGAKVip3Aa20(751)DVSEMFTTKFEKDNFYIELSQGNNLYGGPIVHFYDVSIKVip3Aal9(751)DVSEMFTTKFEKDNFYIELSQGNNLYGGPIVHFYDVSIK_阴影框表示氨基酸变化。实施例5.侧翼DNA序列的分析,锅柄PCR[Jones和Winistorfer，NucleicAcidsRes.20:595-600(1992);Jones和Winistorfer，Biotechniques23:132-138(1997)]，盒连接锚定PCR[Mueller和Wold，Science246:780-786(1989)〗，小载体PCR[Riley等，NucleicAcidsRes.18:2887-2890(1990)〗，新型-Alu-PCR[Puskas等，核酸研究(NucleicAcidsRes.)22:3251-3252(1994)]，以及热不对称交错PCR(TAIL-PCR)[Liu和Whittier，Genomics25:673-681(1995)]。iil的该PCR产物(扩增子)在包含溴化乙锭的1%琼脂糖凝胶上跑胶。从该琼脂糖凝胶中取出适宜的条带，并根据生产者的说明用QiagenQiaquickGelExtraction试剂盒进行纯化。将提取的DNA根据生产者的说明克隆至InvitrogenTOPO-XL克隆载体中。将这个克隆转化至Aco7/中。根据生产者的说明用QiagenMiniprep试剂盒从在培养基中过夜生长后的这些细胞中提取质粒DNA。三个质粒用列于表4的引物进行完全测序。对这些质粒序列进行比对以产生完整的确认的5，侧翼序列。采用这一方法，确定出约lkb的5，侧翼序列(SEQIDNO:46)。表4.引物序列引物名称序列(5'端+3'端)序列号b00201hTTCACGGGAGACTTTATCTGSEQIDNO:60b00605aCCGATTCATTAATGCAGSEQIDNO:61b00701bACGTAAAACGGCTTGTCSEQIDNO:62綱702bGTTTAAACTGAAGGCGGSEQIDNO:63b00704hAATAATATCACTCTGTACATCCSEQIDNO:64b01106fGTTGTAAAACGACGGSEQIDNO:65b01709fTAGGCACCCCAGGCTTTASEQIDNO:66b03504aAATTGAATTTAGCGGCCGSEQIDNO:67b05102fGGTCCCTACAACATAAATAGSEQIDNO:68b05102gTTCGTCCCTACTATCAACGCSEQIDNO:69b05102hCTTTAGGCATCAGCGGGTSEQIDNO:70b05103aAGCATCTGCGTAAGCACASEQIDNO:71b05103bCTGATGACACCAATGATGCSEQIDNO:72b05103cGATCAGATTGTCGTTTCCCSBQIDNO:73b05103dGCATCATTGGTGTCATCAGSBQIDNO:74b05103eTGTGCTTACGCAGATGCTSEQIDNO:75b05103fACCCGCTGATGCCTAAAGSEQIDNO:76b05103gGCGTTGATAGTAGGGACGAASEQIDNO:77b05103hCTATTTATGTTGTAGGGACCSEQIDNO-78b05210aCTAGACTGGAAAGCGGAGSEQIDNO:79b05210bCCACTTTCATCCCTAGTTGSEQIDNO:80评估CEW损伤的试验结果列于表10中。摄食损伤作为从耳穗顶至被破坏的平均最低内核测量得到的每个耳穗的内核损伤长度进行评级。在Bt11、杀虫剂和对照小块田地中观察到显著的耳穗损伤。与未处理的对照相比Btll提供了一定水平的保护，且与传统杀虫剂处理提供的保护相当。MIR162和BtllxMIR162为耳穗提供了几乎完全的保护使其免受CEW幼虫的摄食损伤。表l0.来自六个CEW试验的测量为摄食损伤的平均长度的耳穗损伤评级。当对照植物中CEW幼虫处于L5至L6时进行测量。处理平均耳穗损伤(cm)MIR1620.17Btll2.24BtllXMIR1620.02Warrior杀虫剂2.20阴性对照3.42实施例8.MIR162抵抗西部豆类夜盗虫(WesternBeanCutworm)的效力100143生产CrylAb蛋白质的当前商业转基因事件未提供可接受水平的抵抗西部豆类夜盗虫(WBCW，S"/flcos"a/6/cM")的保护。因此，测试了单独的MIR162以及与其他转基因的基因型堆积的64MIR162抵抗WBCW的效力。WBCW实验的结果列于表ll中。来自阴性等值线和常规杀虫剂处理的穗丝上WBCW的存活接近100°/。。WBCW幼虫在Btll和MIR604穗丝上的存活，单独测试或在同一植物中组合测试，与阴性等值线上的存活没有不同。当用来自MIR162的穂丝喂养幼虫时WBCW幼虫的存活被降低。在相同植物中MIR162XBU1的组合与单独的MIR16Z相比没有进一步减少存活。然而，出人意料地，当MIR162转基因基因型与MIR604转基因基因型在相同植物中堆积时，与单独的MIR162或单独的MIR604相比幼虫的死亡率显著增加。表11玉米穗丝上WBCW幼虫的存活百分数(±SE)实验编号处理1234567Btll75(25)75(25)100(0)100(0)100(0)100(0)100(0)MIR16225(25)0(0)0(0)50(29)50(29)50(29)0(0)MIR604100(0)100(0)100(0)MIR162xBt1125(25)25(25)0(0)0(0)25(25)25(25)25(25)MIR162xMIR6040(0)25(25)50(29)MIR604xBt1175(25)Force100(0)100(0)100(0)阴性对照#1100(0)75(25)100(0)100(0)75(25)100(0)100(0)阴性对照#2100(0)100(0)100(0)100(0)100(0)100(0)100(0)实施例9.在玉蜀黍中用于靶向整合的事件MIR162插入位点的使用1001471将在SEQIDNO:46和SEQIDNO:48中公开的MIR162侧翼序列用于检索玉米基因组数据库。在Contig13(SEQIDNO:106)上染色体5的一个BAC克隆CH201-307P5(NCBI登录号AC185313)上发现与两个侧翼序列的相同匹配。更确切地说，该MIR162插入物在染色体5上在一个5，分子标记物(此处被指定为标记物，(SEQIDNO:106的核苷酸1680-3338))与一个3'分子标记物(此处被指定为标记物，(SEQIDNO:106的核苷酸43,275-45,086))之间。利用这个信息，确定了插入至MIR162中的异源DNA代替玉米基因组DNA的58个核苷酸，SEQIDNO:106的核苷酸25，455至25，512(也示为SEQIDNO:107)，该异源DNA在5'侧翼序列(SEQIDNO:106的核苷酸1-25，454)与3'侧翼序列(SEQIDNO:106的核苷酸25,513—51,328)之间。00148]事件MIR162的转基因在田间条件下经过几代的一致农业表现说明这些在MIR162插入位点周围的经鉴定的区域为其他目的转基因基因的乾整合提供了良好的基因组位置。这种靶整合克服了所谓的"位置效应"的问题以及在转基因整合进入宿主后在基因组中产生突变的风险。这种靶整合的其他的优点包括但不限于，在获得转基因植物(该植物展示所希望水平的转基因表达而不展示由该转基因不经意插入至宿主基因组中的一个重要基因座而导致的异常)之前减少必须篩选和测试的大量数目的转化事件。另外，这种乾整合允许堆积转基因使得具有两种基因的良种植物品系的育种更有效。00149j使用以上公开的教导内容，普通技术人员能够使用本领域已知的方法将目的异源核酸靶向至染色体5上与MIR162中的位点相同的插入位点，或乾向至与MIR162中的插入位点密切邻近的位点。一种此类的方法公开于美国专利申请公开号20060253918中，其全部内容通过引用纳入本文。简言之，位于插入位点5，侧翼的高达20Kb的基因组序列(SEQIDNO:106的核苷酸5，454-25，454)以及位于插入位点3，侧翼的高达20Kb的基因组序列(SEQIDNO:106的核苷酸25,513-45,513)被用在一个或多个相关基因的侧翼，这些相关基因意欲通过同源重组插入至染色体5上的基因组位置。这些序列可以进一步侧翼于T-DM边界重复，例如左边界(LB)及右边界(RB)重复序列及其他用于增强T00150)当其他相关基因在玉蜀黍和其他农作物的其他基因组位置中作为一个转基因被插入时，位于MIR162插入位点侧翼的基因组序列也可用于稳定这个(些)相关基因的表达。具体而言，位于插入位点5，侧翼的高达20Kb的基因组序列(SEQIDNO:106的核苷酸5，454-25，454)和位于插入位点3，侧翼的高达20Kb的基因组序列(SEQIDNO:106的核苷酸25，513-45，513)用于侧翼于旨在插入植物基因组的一个或多个相关基因。这些序列可进一步侧翼于T-DM边界重复，如左边界(LB)及右边界(RB)的重复序列以及其他用于增强T-DNA递送效率的加强序列。一个或多个相关基因能像在MIR162插入位点中一样精确地被放置或能被放置在MIR162插入位点周围的20Kb区域内的任何位置，以给予一致水平的转基因表达。包含一个或多个相关基因以及MIR162插入位点侧翼序列的DM载体能通过本领域技术人员已知的几个方法之一(包含但不限于原生质体转化、生物射弹轰击以及土壤杆菌属介导的转化)递送入植物细胞中。递送的DM能够随机整合入植物基因组中或也能作为独立分离的遗传单位(例如人工染色体或微型染色体)的一部分存在。包含一个或多个相关基因的DNA载体及MIR162插入位点侧翼序列也能递送入植物细胞中。因此，通过用位于MIR162插入位点侧翼的基因组序列围绕一个或多个相关基因，这些基因在转基因宿主植物(例如双子叶植物或单子叶植物，如玉米)中的表达得到稳定。保藏100151申请人已经在2007年1月23日根据布达佩斯条约将以上公开的事件MIR162的玉米种子保藏在美国典型微生物保藏中心(ATCC),,地址为1801UniversityBoulevard,Manassas,VA20110，ATCC登记号为PTA-8166。此保藏将在该保藏机构保存30年，或在最后一次要求之后的5年，或本专利的有效期内，以更长的为准，且在此期间内如果需要将被替换。申请人对从ATCC获得所保藏的材料没有限制；然而，申请人无权免除法律在转移生物材料或其在商业上的转运方面所施加的任何限制。申请人不放弃根据本专利或根据植物品种保护法案(PlantVarietyProtectionAct)(7USC2321以及以下等等)赋予的他们的权利的任何侵权。引用纳入本文，其程度如同每个单独的公开文献或专利文件被确切地并单独地指明通过引用而纳入本文。权利要求1.分离的核酸分子，包含对事件MIR162独特的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的分离的核酸分子，其中该核酸分子将插入事件MIR162的基因组的异源DM分子连接至事件MIR162中的基因组DNA，该事件MIR162中的基因组DNA包含该异源DM分子的至少10个连续核苷酸以及位于该异源DM分子插入点侧翼的该基因组DNA的至少IO个连续核苷酸。3.如权利要求1所述的分离的核酸分子，其中该核酸分子将插入事件MIR162的基因组的异源DNA分子连接至事件MIR162中的基因组DNA，该事件MIR162中的基因组DNA包含该异源DNA分子的至少20个连续核苷酸以及位于该异源DNA分子插入点侧翼的基因组DM的至少20个连续核苷酸。4.如权利要求1所述的分离的核酸分子，其中该核酸分子将插入事件MIR162的基因组的异源DNA分子连接至事件MIR162中的基因组DNA，该事件MIR162中的基因组DNA包含该异源DNA分子的至少50个连续核苷酸以及位于该异源DNA分子插入点侧翼的基因组DNA的至少50个连续核苷酸。5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸分子，其中该核苷酸序列选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49，以及其互补物。6.如权利要求5所述的分离的核酸分子，其中该核苷酸序列编码包含氨基酸序列SEQIDNO:2的蛋白质。7.根据权利要求1至6中任一项所述的分离的核酸分子，其中该核酸分子包含于玉米种子中，该玉米种子保藏在美国典型培养物保藏中心，登记号为PTA-8166。8.—种扩增子，其包含权利要求1至7中任一项所述的核酸分子。9.多核苷酸引物对，其包含第一多核苷酸引物以及第二多核苷酸引物，这些多核苷酸引物在样品中的事件MIR162DNA模板存在时共同起作用，以产生对事件MIR162有诊断性的扩增子。10.根据权利要求9所述的引物对，其中该第一引物序列和/或该第二引物序列是从SEQIDNO:1中选择的。11.根椐权利要求10所述的引物对，其中该扩增子包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:38，或其互补物。12.根据权利要求9所述的多核苷酸引物对，其中该第一引物序列是玉米植物基因组序列或与其互补，该玉米植物基因组序列位于插入事件MIR162的玉米植物基因组中的异源DM序列的插入点的侧翼，并且该第二多核苷酸引物序列是插入事件MIR162的基因组的异源DNA序列或与其互补。13.根据权利要求12所述的多核苷酸引物对，其中该第一多核苷酸引物包含选自下组的核苷酸序列的至少10个连续核苷酸，该组的构成为SEQIDNO:49的核苷酸1-1088、SEQIDNO:49的核苷酸9391-10579，以及其互补物。14.根据权利要求13所述的多核苷酸引物对，其中该第一多核苷酸引物包含选自下组的核苷酸序列，该组的构成为SEQIDNO:36、SEQIDNO:39、SEQIDNO:53、SEQIDNO:57、SEQIDNOs:68至72、SEQIDNO:79、SEQIDNO:80、SEQIDNOs:97至105，以及其互补物o15.根据权利要求12所述的多核苷酸引物对，其中该第二多核苷酸引物包含来自SEQIDNO:49的核苷酸1089-9390的至少10个连续核苷酸，或其互补物。16.根据权利要求15所述的多核苷酸引物对，其中该第二多核苷酸引物包含选自下组的核苷酸序列，该组的构成为SEQIDNO:15至35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:40、SEQIDNOs:50至52、SEQIDNO:54、SEQIDNO:56、SEQIDNO:57、SEQIDNO:63、SEQIDNO:73、SEQIDNO:82、SEQIDNO:96，以及其互补物。17.根据权利要求12所述的多核苷酸引物对，其中该第一多核苷酸引物由SEQIDNO:36构成，并且该第二多核苷酸引物由SEQIDNO:37构成。18.根据权利要求17所述的多核苷酸引物对，其中该扩增子由SEQIDNO:38构成。19.根据权利要求12所述的多核苷酸引物对，其中该第一多核苷酸引物由SEQIDNO:39构成，并且该第二多核苷酸引物由SEQIDNO:40构成。20.根据权利要求19所述的多核苷酸引物对，其中该扩增子由SEQIDNO:41构成。21.根据权利要求12所述的多核苷酸引物对，其中该第一多核苷酸引物由SEQIDNO:53构成，并且该第二多核苷酸引物由SEQIDNO:54构成。22.根据权利要求21所述的多核苷酸引物对，其中该扩增子由SEQIDNO:55构成。23.根据权利要求12所述的多核苷酸引物对，其中该第一多核苷酸引物由SEQIDNO:58构成，并且该第二多核苷酸引物由SEQIDNO:56构成。24.根据权利要求23所述的多核苷酸引物对，其中该扩增子由SEQIDNO:59构成。25.在包含玉米核酸的样品中检测对事件MIR162独特的核酸分子存在的方法，该方法包括(a)用引物对接触该样品，当该对引物被用于来自事件MIR162的基因组DNA的核酸扩增反应时产生对事件MIR162有诊断性的扩增子；(b)进行核酸扩增反应，由此产生该扩增子；并且(c)检测该扩增子。26.如权利要求25所述的方法，其中该扩增子包含核苷酸序列SEQIDNO:1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55、SEQIDNO:59，或其互补物。27.在包含玉米核酸的样品中检测对事件MIR162独特的核酸分子的存在的方法，该方法包括(a)用探针接触该样品，该探针在高严格条件下与来自事件MIR162的基因组DNA杂交，并且在高严格条件下不与对照玉米植物的DNA杂交；(b)将该样品以及探针置于高严格杂交条件中；和(c)检测该探针对该核酸分子的杂交。28.如权利要求27所述的方法，其中该探针包含选自下组的核苷酸序列，该组的构成为SEQIDNO:1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55、SEQIDNO:59，以及其互补物。29.—种检测核酸的试剂盒，所述核酸对事件MIR162是独特的，该试剂盒包含具有足够长度的连续多核苷酸的至少一个核酸分子，以便在核酸检测方法中作为引物或探针起作用，并且在对样品中的靶核酸序列的扩增或者杂交并随后检测针对该靶序列的扩增子或者杂交时，所述核酸对于在该样品中对事件MIR162独特的核酸序列的存在是诊断性的。30.如权利要求29所述的试剂盒，其中该核酸分子包含来自SEQIDNO:1或者SEQIDNO:49的核苷酸序列。31.如权利要求30所述的试剂盒，其中该核酸分子是选自下组的引物，该组的构成为SEQIDNO:15至37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:50至54、SEQIDNO:56至58、SEQIDNO:60至105,以及其互补物。32.转基因玉米植物，或者其细胞或组织，其均包含根据权利要求1至7中任一项所述的核酸分子。33.根据权利要求32所述的玉米植物，其特征在于用限制性内切核酸酶r/w/，化07r或者肋o/酶解该植物的基因组DNA，在高严格条件下使用W/04a"探针产生单一的W/7Wfl^7杂交带。34.如权利要求33所述的玉米植物，其中该探针包含SEQIDNO:13的核苷酸序列，或其互补物。35.根据权利要求32所述的玉米植物，其中该玉米植物对昆虫有抵抗力。36.根据权利要求35所述的玉米植物，其中昆虫抵抗性是由于W/^^20基因的表达。37.玉米种子，包含根据权利要求1至6中任一项所迷的核酸分子。38.玉米种子，保藏于美国典型培养物保藏中心，登记号为PTA-8166。39.转基因玉米植物，该植物从根据权利要求37或38所述的种子产生。40.衍生自事件MIR162玉米植物、组织，或种子的生物样品，其中该样品包含核苷酸序列，该核苷酸序列是下列序列或与其互补SEQIDNO:1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55,或者SEQIDNO:59，并且其中该序列用核酸扩增或核酸杂交方法在该样品中是可检测的。41.如权利要求40所述的生物样品，其中该样品选自下组，该组的构成为玉米面、玉米粉、玉米糖浆、玉米油、玉米淀粉，以及全部或部分包含玉米副产物的制造的谷类。42.衍生自事件MTR162玉米植物、组织，或种子的生物样品的提取物，所述提取物包含核苷酸序列，该核苷酸序列是或互补于SEQIDNO:、1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55或SEQIDNO:59。43.如权利要求42所述的提取物，其中该序列用核酸扩增或核酸杂交方法在该提取物中是可检测的。44.如权利要求42或43所述的提取物，其中该样品选自下组，该组的构成为玉米面、玉米粉、玉米糖浆、玉米油、玉米淀粉，以及全部或部分包含玉米副产物的制造的谷类。45.生产抵抗鳞翅类害虫的玉米植物的方法，包括(a)将第一亲代玉米植物与第二亲代玉米植物有性杂交，其中所述第一或第二亲代玉米植物包含事件MIR162DNA，由此产生多个第一代子代植物；(b)选择抵抗鳞翅类昆虫侵染的第一代子代植物；(c)将该第一代子代植物自交，由此产生多个第二代子代植物；(d)从这些第二代子代植物中挑选抵抗鳞翅类害虫的植物；其中这些第二代子代植物包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55，或者SEQIDNO:59。46.生产杂种玉米种子的一种方法，包括(a)种植第一近交玉米系的种子，该近交玉米系包含选自下组的核苷酸序列，该组的构成为SEQIDNO:1、SEQIDNO:38、SEQIDNO:41、SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:55，或者SEQIDNO:59，以及种植具有不同基因型的第二近交系的种子；(b)培育产生自所述种植的玉米植物直到开花的时期；(c)对该玉米近交系之一的植物的所述的花去雄；(d)将该两种不同近交系彼此有性杂交；并且(e)收获由此生产的杂种种子。47.根据权利要求46所述的方法，其中第一近交玉米系的植物是母本。48.根据权利要求46所述的方法，其中第一近交玉米系的植物是父本。49.用如权利要求46所述的方法生产的杂种种子。50.玉米植物，该植物是通过培育如权利要求44所述的杂种玉米种子产生。51.—种分离的杀虫蛋白质，其包含SEQIDNO:2。52.—种分离的核酸分子，该核酸分子编码权利要求51所述的蛋白质。53.嵌合基因，其包含可操作地连接至权利要求52所述的核酸分子的异源启动子序列。54.—种重组载体，其包含权利要求53所述的嵌合基因。55.—种转基因宿主细胞，其包含权利要求53所述的嵌合基因。56.玉蜀黍染色体靶位点，位于染色体5上在如SEQIDNO:106的核苷酸1680-3338所给出的opie2分子标记物与如SEQIDNO:106的核苷酸43，275-45,086所给出的的gag分子标记物之间，其中该靶位点包含异源核酸。57.根据权利要求56所述的玉蜀黍染色体靶位点，其中所述乾位点位于SEQIDNO:106的核苷酸25，454和25，513之间。58.根据权利要求56所述的玉蜀黍染色体乾位点，其中所述乾位点的5'侧翼是SEQIDNO:106的核苷酸5，454至25，454，且3'侧翼是SEQIDNO:106的核苷酸25，513至45，513。59.制造转基因玉蜀黍植物的方法，该方法包括在位于染色体5上在SEQIDNO:106的核苷酸1680-3338所给出的opie2分子标记物与在SEQIDNO:106的核苷酸43，275-45，086所给出的gag分子标记物之间插入异源核酸。60.根据权利要求59所述的方法，其中所述异源核酸被插入染色体5上SEQIDNO:106的核苷酸25，454与25，513之间。61.根据权利要求59所述的方法，其中所述插入的异源核酸的5'侧翼是SEQIDNO:106的核苷酸5，454至25，454，并且3'侧翼是SEQIDNO:106的核苷酸25，513至45，513。专利摘要披露了一种新颖的被称为MIR162的转基因玉米事件。本发明涉及对于事件MIR162独特的核酸以及涉及检测MIR162事件存在的方法，所述方法基于插入至产生MIR162事件的玉米基因组中的重组构建体以及位于插入位点侧翼的基因组序列的DNA序列。本发明进一步涉及包含MIR162的转基因的基因型的玉米植物并且涉及通过将包含MIR162基因型玉米植物与其自身或者与另一玉米品种杂交以生产玉米植物的方法。包含MIR162基因型的玉米植物的种子也是本发明的目标。本发明还涉及使用MIR162玉米植物控制昆虫的方法。文档编号C12N15/11GKCN101548011SQ200780029007公开日2009年9月30日申请日期2007年5月24日发明者D·普利阿姆,H·哈特,J·博托姆斯,M·迈格吉,N·龙,Q·曲申请人:先正达参股股份有限公司导出引文BiBTeX,EndNote,RefMan