技术简介：
本发明涉及提高L-苏氨酸发酵产量的方法。传统方法使用具有AHV和AEC双重抗性的变异株进行生产，但产酸水平仍有提升空间。研究者采用琥珀酸为唯一碳源的平板培养基筛选出新的变异株，显著提高了L-苏氨酸的产量。
关键词：L-苏氨酸生产,琥珀酸选择,变异株筛选
专利名称:L-苏氨酸的发酵法生产的制作方法
本发明涉及L-苏氨酸生产菌及其选育方法。
发酵法生产L-苏氨酸，通常采用短杆菌属细菌和乳糖发酵短杆菌的α-氨基-β-羟基戊酸(AHV)和S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)双重抗性变异株。为进一步提高产酸水平，对这类变异株实施了新的改良。研究结果表明，采用以琥珀酸为唯一碳源的平板培养基(简称为琥珀酸培养基SAM)分离选择变异株，可得到收率更高的L-苏氨酸生产菌。
本发明使用的微生物，是从乳糖发酵短杆菌出发诱导的、具有AHV、AEC双重抗性、再通过琥珀酸培养基选择(以下称为SAMg标记)得到的变异株。首先从野生型菌株ATCC/3869出发诱导AHV抗性和AEC抗性，再赋予SAMg标记，即可获得本发明的变异株。
以下说明选育SAMg变异株的具体操作方法。将隔夜培养的乳糖发酵短杆菌B7-8354(AHVrAECr)的菌体用0.1M PH7.2磷酸盐缓冲液制成浓度为103个/毫升的单细胞悬浮液，加入甲基磺酸乙酯(最终浓度为0.4M)，31℃振荡处理1小时，中止反应后将处理液涂布于琥珀酸培养基上，31℃培养2-6天，挑选在该培养基上生长较快的大菌落，即为SAMg变异株。
图1表示从B7-8354出发诱导获得的175株SAMg变异株的摇管产酸分布。
图2表示最高株C2-1261(AHVrAECrSAMg)与其亲株B7-8354(AHVrAECr)产酸能力的比较。结果表明，由于诱导SAMg变异，使L-苏氨酸产量大幅度提高。
琥珀酸培养基组成(%)琥珀酸钠5.0(NH4)2SO40.15KH2PO40.1K2HPO40.3MgSO4·7H2O 0.01MnSO4·4H2O 0.001FeSO4·7H2O 0.001d-生物素(μg)3硫胺盐酸盐(μg)10尿素0.15琼脂粉2.0PH7.0
权利要求发酵法生产L-苏氨酸，其特征是采用从乳糖发酵短杆菌出发诱导的，具有α-氨基-β-羟基戊酸(AHV)和S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)双重抗性的、以琥珀酸为唯一碳源的平板分离培养基上选择得到的具有L-苏氨酸生产能力的变异株作为L-苏氨酸生产菌。
专利摘要发酵法生产L-苏氨酸，通常采用短杆菌属细菌的α-氨基-β-羟基戊酸(AHV)和S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)双重抗性变异株。本发明采用乳糖发酵短杆菌的AHV、AEC双重抗性、再通过以琥珀酸为唯一碳源的培养基(简称琥珀酸培养基)选择得到的变异株作为L-苏氨酸生产菌，代表株C2-1261的L-苏氨酸产量为16mg/ml。研究结果表明，琥珀酸培养基可有效地用于L-苏氨酸生产菌的筛选。
文档编号C12R1/13GK85104604SQ85104604
公开日1987年4月8日 申请日期1985年9月25日
发明者檀耀辉, 张炳荣 申请人:无锡轻工业学院