专利名称:系列水中细菌检验卡及取样器的制作方法
本发明涉及细菌检验，尤其涉及到水中细菌检验(卡)。
水质保护对于工业生产和人民的生活是至关重要的，而水质检验则是实现水质保护的前提。可是，在过去的几十年里，检验水中细菌总数都采用常规的平皿法;检验水中大肠菌群，则采用MPN法;检验粪大肠菌、粪链球菌等，则采用琼脂培养基。
上述这些常规方法，虽然有其较好的可靠性，但无可否认，这些常规方法有下述的不足1、由于细菌培养基一般都需要作细菌培养时临时配制，每次都要经历称量、加热溶解、调节PH、高压灭菌、分装平皿、冷却凝固等一系列操作，很费工、费时。
2、由于在制备培养基时，制备量肯定大于实际需要的用量，试剂的浪费是不可避免的;尤其是在实际用量不大时，浪费比率更大。
3、无论是琼脂培养基或者MPN法使用的流质培养基，都不耐冷冻、不耐高温、不耐干燥和挤压，保存条件苛刻;使用冰箱保存，占用设备和费电是显见的，而且其保存时间也不能很长，因其一旦长菌就不可使用了。
4、琼脂培养基或液质培养基的使用，都离不开易碎的玻璃器皿，不便于运输和野外作业。
5、即使使用预制的琼脂培养基，也需要用水浴加热几十分钟～二小时使之融化，再浇注平皿，待重新凝固后才可使用，费事、费时。
6、测定大肠菌群数的MPN法，需要三天才能出结果(数据)，而且所给结果仅是一个比较粗略的区间值。
近年来，日本一密列泊公司(Nihon milliPore LTD)制出了一种使用方便的快速检验水中细菌的水检验器(Watcr Samplcr)。这是一种带有培养基及其载体的塑料制品，将它插入水中，经十几个小时的适温培养，即可观察并确定水中细菌情况(如，细菌总数、大肠菌、粪链球菌等)。但是，关于该类产品的成分及制备方法等，未见有所报导。
本发明的目的在于提供一种易于保存、便于运输、使用方便、检测快速、结果正确(可定性、定量)的系列水中细菌检验卡及取样器。实现对水中细菌总数、大肠菌群、粪大肠菌、粪链球菌及酵母菌的检测。
细菌检验卡的制备(一)制备细菌培养基(液)1、检验细菌总数使用的培养基(液)的成分(重量百分数)蛋白胨0.9～1.5% (以1.2%为佳)
肉膏0.25～0.5% (以0.36%为佳)氯化钠0.3～0.8% (以0.60%为佳)吐温80 0.04～0.25% (以0.10%为佳)TTC 0～0.03% (以0.01%为佳)其余均为水将上述经灭菌的混合溶液，调节PH至7.4～7.6即成所需的培养基(液)。
2、检验大肠菌群使用的培养基(液)成分(重量百分数)蛋白胨0.7～1.6% (以1.2%为佳)乳糖0.7～1.6% (以1.2%为佳)氯化钠0.03～0.10% (以0.6%为佳)吐温800～0.2% (以0.1%为佳)伊红0.02～0.07% (以0.04～0.06%为佳)美兰0.01～0.03% (以0.01～0.015%为佳)其余皆为水将上述灭菌的混合溶液调至PH至7.4～7.6即成培养基(液)3、检验粪大肠菌的培养基(液)成分(重量百分数)蛋白胨0.3～1.0% (以0.6%为佳)酵母浸膏0.2～0.7% (以0.36%为佳)
乳糖0.5～1.6% (以1.2%为佳)甘露醇0.3～1.0% (以0.6%为佳)氯化钠0.4～1.2% (以0.9%为佳)吐温800～0.3% (以0.1%为佳)十二烷基硫酸钠0.01～0.04 (以0.024%为佳)去氧胆酸钠0.01～0.02% (以0.012%为佳)溴甲酚紫0.02～0.06% (以0.04%为佳)酚红0.02～0.05% (以0.035%为佳)其余皆为水将上述灭菌的混合溶液调节PH至7.2～7.5即成培养基(液)。
4、检验粪链球菌的KF培养基(液)蛋白胨0.4～1.5% (以1.2%为佳)酵母浸膏0.4～1.6% (以1.2%为佳)氯化钠0.2～0.9% (以0.6%为佳)甘油磷酸钠0.4～1.6% (以1.2%为佳)麦芽糖0.7～3.0% (以2.4%为佳)乳糖0.4～1.5% (以1.2%为佳)叠氮钠0.02～0.1% (以0.5%为佳)吐温800～0.2% (以0.1%为佳)TTC0～0.02% (以0.01%为佳)
其余为水将上述灭菌的混合溶液节PH至7.2即成培养基(液)。
对于检验其它细菌(如，铁细菌、硫细菌等)的培养基(液)，均可比照长期沿用的相应琼脂培养基的除琼脂外其它成分(即免去琼脂，保留其它各种成分并将含量各增加15～25%)而获得适用于制备细菌检验卡的各种培养基(液)。
(二)制备培养卡取质地松而多孔、富于吸水性的材料(如，纸、多孔陶瓷、布等，其中以27Dg/m2的特种滤纸为最宜)裁成自定的大小和形状，经高压灭菌、干燥，浸入上步骤所制的相应的培养基(液)内，待吸收至饱和后取出干燥，即成培养卡的营养衬垫。
将此含有上述各种不含培养基的营养衬垫，在边缘涂抹宽度约为2mm的无害于细菌生长的粘合剂，并将它与微孔滤膜粘合(微孔滤膜以孔径小于0.45μ的混合纤维膜为佳;〔注意上述操作均为无菌作业〕，把营养衬垫与微孔滤复合所得之制品，再经紫外灭菌，封入灭菌塑料袋，即成细菌检验卡成品(商品)。
特别要指出的是在配制上述四种培养基(液)时，已考虑了衬垫(载体)的吸附因素，故已将浓度增大了20%;事实上，可以根据衬垫(载体的吸附性质，将上述培养基(液)的成分按同一比率酌情增减，其增减幅度为±10%。
使用方法将上述细菌检验卡，以滤膜面向上的方式置入培养皿，从滤膜面上滴入定量的被检验水(加入量以衬垫饱和为宜)，然后在适当温度下培养适当时间(详见表一)，即可检验细菌菌落数，再由加入的被检水量换算出单位体积被检水中的细菌数。
表一检验卡种类 培养温度 培养时间细菌总数检验卡 35～37℃ 24小时大肠菌群检验卡 35～37℃ 24小时粪大肠菌检验卡 41～44.5℃ 7小时粪链球菌检验卡 35～37℃ 24小时对于细菌浓度很高的水，则可用蒸馏水将其稀释至原浓度的 1/10 ， 1/100 或 1/1000 后再行检验。
为了换算和检数的方便，本发明采用单位化的办法，就是根据纸的吸水性，把纸裁成一定大小，使衬垫的饱和吸水量正好是1克(1毫升)，只要将菌落数乘以1千即可算出每升水的细菌数了。为避免检数时因视觉疲劳产生的漏算和重复计数，故在滤膜面上打上方格(实际上有规律的其它格子也可)。
为采样时的干净、方便，本发明设计了四种涂有不同颜色以便区分的采样器与上述四种培养卡配套使用。采样器是一带有手把的小型浅盘式容器，其靠近手把底部有一个可以排气的小孔，当将检验卡卡在盘上(反置不掉为原则)后，周边封死以防样水从边上漏入(只能从滤膜面渗入)。使用时，只要将小盘容器插入被检水，过十几秒钟即可吸至饱和(注意不要让水面高于排气小孔)，取出装入小塑料袋并将口扎紧，按上述条件(表一)培养，即可观察结果。(盘式采样器如图1所示)实施例本人已按照上述方案和上述的四种细菌培养基的组分别制备了诸如检验细菌总数、检验大肠菌群、检验粪大肠菌、检验粪链球菌和酵母菌的无琼脂的细菌培养基，并通过细菌培养效果实验，确定增加各组分含量20%是适当的(若使用吸附能力不同的载体作营养衬垫，其含量还应适当增或减)。根据上述试验结果，又比照培养特定细菌(如，铁细菌，硫细菌等等)的琼脂培养基，免去琼脂，将其它各种成分保留，并将各组分的含量各增加20%，制成了无琼脂的培养基(液)，用它作细菌培养效果试验，证明这种配方是可行的(效果很好)。
在上述基础上，本人又将所制备的各种培养基(液)用滤纸浸润至吸收饱和，干燥、复合以微孔滤膜，制成了细菌检验卡。把含有经知细菌的水从滤膜面滴在检验卡上，作细菌培养，获得了圆满成功。进一步作定量试验，也获得了成功，其关键在于微孔滤膜之孔径必须≤0.45μ(否则细菌会掉入营养衬垫)，另一个关键是不能让水从旁侧或下侧进入(否则影响定量测定);这样，检验误差＜20%是不难实现的。在使用了一定面积(刚好饱和吸收量为1毫升)的检验卡并配备了取样器后，更简化操作;滤膜面上的格子，更增加了计数的方便。
实验还证明这种检验卡不仅携带方便，易于长期保存，而且耐候(在80～-30℃的范围内不会变质，不怕干、湿)，可随取随用，价格也低廉，完全实现了本发明的目的。
权利要求
1.一种系列的适用于不同细菌培养的琼脂培养基和用于检验水中细菌总数的常规平皿法、检验水中大肠菌群的MPN法、检验粪大肠菌和粪链球菌等的琼脂培养基，以及近年采用的带有细菌培养基的载体式水检验器，本发明的特征在于本系列水中细菌检验卡是由含有不同细菌培养基的载体构成的营养衬垫和微孔滤膜构成的，适用于被检水的取样器是一个带把的在近把的底部开有排气孔的浅盘式容器。
2.根据权利要求
1所述的水中细菌检验卡，其特征在于所述的营养衬垫(载体)可以用质松多孔的易于吸水的材料制作(如，滤纸、布、多孔陶瓷等)。
3.根据权利要求
1所述的系列细菌培养卡，其特征在于所述的适用于不同细菌培养的培养基液是不含琼脂的，其中适用于检验水中细菌的培养基(液)的成分如下适用于细菌总数使用的培养基(液)的成分(重量百分数)蛋白0.9～1.5% (以1.2%为佳)肉膏0.25～0.5% (以0.36%为佳)氯化钠0.3～0.8% (以0.60%为佳)吐温80 0.04～0.25% (以0.10%为佳)TTC 0～0.03% (以0.01%为佳)其余均为水适用于检验大肠菌群使用的培养基(液)的成分如下蛋白0.7～1.6% (以1.2%为佳)乳糖0.7～1.6% (以1.2%为佳)氯化钠0.03～0.10% (以0.6%为佳)吐温800～0.2% (以0.1%为佳)伊红0.02～0.07% (以0.04～0.06%为佳)美兰0.01～0.03% (以0.01～0.015%为佳)其余皆为水适用于检验粪大肠菌使用的培养基(液)的成分如下蛋白0.3～1.0% (以0.6%为佳)酵母浸膏0.2～0.7% (以0.36%为佳)乳糖0.5～1.6% (以1.2%为佳)甘露醇0.3～1.0% (以0.6%为佳)氯化钠0.4～1.2% (以0.9%为佳)吐温800～0.3% (以0.1%为佳)十二烷基硫酸钠0.01～0.04 (以0.024%为佳)去氧胆酸钠0.01～0.02% (以0.012%为佳)溴甲酚紫0.02～0.06% (以0.04%为佳)酚红0.02～0.05% (以0.035%为佳)其余皆为水适用于检验粪链球菌的KF培养基(液)成分如下蛋白0.4～1.5% (以1.2%为佳)酵母浸膏0.4～1.6% (以1.2%为佳)氯化钠0.2～0.9% (以0.6%为佳)甘油磷酸钠0.4～1.6% (以1.2%为佳)麦芽糖0.7～3.0% (以2.4%为佳)乳糖0.4～1.5% (以1.2%为佳)叠氮钠0.02～0.1% (以0.5%为佳)吐温800～0.2% (以0.1%为佳)TTC 0～0.02% (以0.01%为佳)其余为水对于检验其它细菌(如，铁细菌、硫细菌等)的培养基，其成分可以参照长期沿用的相应琼脂培养基，去掉琼脂并将其它成分含量各增加15～25%而制成相应的不含琼脂的培养基(液)。
4.根据权利要求
1所述的系列水中细菌检验卡，其特征在于系列细菌检验卡是将多孔载体浸入经灭菌并调节PH值的不同的如同权利要求
3中所述的细菌培养基(液)中，待至饱和，再经干燥、灭菌、封装而制成的。
5.根据权利要求
1所述的系列水中细菌检验卡，其特征在于所述的微孔滤膜的微孔孔径宜小于0.45μ，其表面最好印有便于计数的方格。
6.根据权利要求
1所述的系列水中细菌检验卡，其特征在于所述的营养衬垫与微孔滤膜最好用粘合剂将边缘粘合。
7.根据权利要求
1或3所述的系列水中细菌检验卡，其特征在于所述的各种培养基(液)的成分可以根据不同载体的吸附性能在增减幅度为±10%内酌情增成。
8.根据权利要求
1所述的系列水中细菌检验卡，其特征在于卡片面积最好制成饱和吸水量为1克的大小，卡片与水取样器最好吻合并在边缘密封，防止水从边缘渗入。
专利摘要
本发明涉及系列细菌培养基(液)的制备，以及含有培养基的细菌检验卡和其制备，也涉及水取样器。本系列检验卡是将质松多孔的载体材料吸足不含琼脂的适于培养不同细菌的细菌生长营养剂、细菌生长产物指示剂及不需要细菌的杂菌生长抑制剂的培养基(液)，经干燥、灭菌，制成营养衬垫，再在营养衬垫上复以微孔滤膜，制成检验卡。将被检水从滤膜面加入，经适温培养即可观察结果，配合取样器就更便于使用。
文档编号C12Q1/10GK86102137SQ86102137
公开日1987年10月14日 申请日期1986年3月31日
发明者宛吉斌 申请人:宛吉斌导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan