[0012] 本发明的另一个实施方案是融合多肽作为免疫测定中的添加剂或作为测定试剂 的添加剂的用途，使得所述融合多肽可以用于降低干扰或用于尽可能减少假阳性结果。根 据本发明，所述融合多肽还可以用于增加测定试剂中蛋白成分的溶解度。本发明的一个进 一步优选实施方案还考虑包含所述融合多肽的用于通过免疫测定检测分离样品中的分析 物的试剂盒。
[0013] 在一个进一步优选的实施方案中，考虑用于检测分离样品中的分析物的方法，其 中如上表征的融合多肽用作用于降低干扰或尽可能减少假阳性结果的试剂。
[0014] 本发明的另一个实施方案是用于检测分离样品中的分析物，诸如，例如，抗体的方 法，所述方法包括 a) 通过混合体液样品与特异性结合伴侣形成免疫反应混合物，所述特异性结合伴侣 可以被所述样品中存在的所述分析物特异性结合 b) 在将所述特异性结合伴侣添加至所述样品之前、同时或之后，将根据本发明的融合 多肽添加至所述免疫反应混合物 c) 保持所述免疫反应混合物一段时期，所述时期足以允许所述体液样品中存在的所 述分析物与所述特异性结合伴侣免疫反应，以形成免疫反应产物；和 d) 检测任何所述免疫反应产物的存在和/或浓度。
[0015] 本发明的一个进一步方面是用于通过免疫测定检测分离样品中的分析物、具体而 言用于检测抗体的试剂盒，所述试剂盒包含根据本发明的融合多肽。试剂盒的其他成分对 于本领域技术人员是已知的，并且包括特异性结合试剂，诸如例如抗原。进一步试剂盒组分 是缓冲剂、防腐剂、标记物质和使用说明书。
[0016] 附图简沐 图1至7显示表Ia-C、2a-C和3 (参见实施例3)，其呈现融合多肽在用于检测HIV抗 gp41抗体的免疫测定中的抗干扰活性的结果。
[0017] 详细而言，图1显示表la。
[0018] 图2显不表lb。
[0019] 图3显示表lc。
[0020] 图4显示表2a。
[0021] 图5显不表2b。
[0022] 图6显不表2c。
[0023] 图7显示表3。
[0024] 图8显示如在近UV区以280 nm的检测波长监测的Skp-SlyD-SlyD的热诱导的解 折萱和再折萱。
[0025] 图9显示250-330 nm范围内Skp-SlyD-SlyD的近UV CD光谱（参见实施例5)。
[0026] 图10显示表4,其呈现融合多肽在用于检测抗HSV2抗体的免疫测定中的抗干扰活 性的结果（参见实施例4)。
[0027] 图11显示250-330 nm范围内Skp-SlpA-SlpA的近UV CD光谱（参见实施例5)。
[0028] SEQ ID NO. 1显示Skp-串联-SlyD或Skp-SlyD-SlyD的氨基酸序列。已经添加 Skp和SlyD单元之间的富含甘氨酸的间隔区（加下划线）以实现融合伴侣的最大柔性，并 确保Skp单元可形成有序的三聚体，而不具有对C末端融合的SlyD蛋白的任何干扰。已经 添加额外的C末端八组氨酸标签用于纯化目的（参见实验部分）。SEQ ID NO. 1包含串联 形式的大肠杆菌SlyD (完整分子参见SEQ ID NO. 3)的氨基酸残基1-165,即排成一列的两 个大肠杆菌SlyD (1-165)。
【主权项】
1. 包含几个分子的折叠辅助多肽的融合多肽，其包含一个多聚化结构域和至少一个分 子的SlyD或SlpA，其中没有进一步的目标多肽序列融合至所述融合多肽。
2. 根据权利要求1的融合多肽，其中所述多聚化结构域是Skp。
3. 根据权利要求1或2的融合多肽，其中一个分子的Skp融合至两个相邻分子的SlyD 或 SlpA〇
4. 融合多肽，其包含SEQ ID NO. 1 (Skp-串联-SlyD)。
5. 融合多肽，其包含SEQ ID NO. 9 (Skp-串联-SlpA)。
6. 根据权利要求1-5的融合多肽在免疫测定中用于降低干扰或用于尽可能减少假阳 性结果的用途。
7. 根据权利要求1-5的融合多肽用于增加测定试剂的蛋白成分的溶解度的用途。
8. 用于通过免疫测定检测分离样品中的分析物的试剂盒，其包含根据权利要求1-5的 融合多狀。
9. 用于检测分离样品中的分析物的方法，其中根据权利要求1-5的融合多肽用作用于 降低干扰或尽可能减少假阳性结果的试剂。
10. 用于检测分离样品中的分析物的方法，所述方法包括 a) 通过混合体液样品与特异性结合伴侣形成免疫反应混合物，所述特异性结合伴侣 可以被所述样品中存在的所述分析物特异性结合 b) 在将所述特异性结合伴侣添加至所述样品之前、同时或之后，将根据权利要求1-5 中任一项的融合多肽添加至所述免疫反应混合物 c) 保持所述免疫反应混合物一段时期，所述时期足以允许所述体液样品中存在的所 述分析物与所述特异性结合伴侣免疫反应，以形成免疫反应产物；和 d) 检测任何所述免疫反应产物的存在和/或浓度。
11. 根据权利要求9或10的方法，其中分离样品中存在的所述分析物是抗体。
【专利摘要】本发明涉及包含几个分子的折叠辅助多肽的融合多肽，其包含一个多聚化结构域(特别是Skp)和至少一个分子的SlyD或SlpA，其中没有进一步的目标多肽序列融合至所述融合多肽。本发明进一步涉及免疫测定和所述融合多肽在免疫测定中用于降低干扰或尽可能减少假阳性结果或用于稳定蛋白测定试剂的用途。进一步，本发明涉及用于免疫测定中使用的试剂盒，其包含所述融合多肽。
【IPC分类】C12N9-90, C12N15-62
【公开号】CN104583408
【申请号】CN201380046110
【发明人】迪费尔 H., 里德尔 A., 沙尔施密特 P., 施密特 U., 肖尔茨 C.
【申请人】霍夫曼-拉罗奇有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年9月4日
【公告号】CA2881411A1, EP2706115A1, EP2893021A1, WO2014037389A1