一种醋酸加尼瑞克的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种醋酸加尼瑞克的制备方法。
【背景技术】
[0002] 醋酸加尼瑞克，英文名称为Ganirelix acetate ;化学名称为1'^〇6七丫1-3 - (2-napthy1)-D-alanyl-4-chlor〇-D-phnylalany1-3- (3-pyridyl)-D-alanyl-L -tyrosy 1_N9, N10diethyl-D-homoarginyl-L_leucyl-N9, N10_diethyl-L-homoargin yl-L-prolyl-D-alanylamide acetate ;分子式为 C8(IH113C1N18013 ;相对分子质量为 1570. 3 ; CAS登记号为123246-29-7。其化学结构如下式所示：
[0003]
【主权项】
1. 一种制备醋酸加尼瑞克的方法，包括如下步骤： 1) 制备加尼瑞克前体I，其具有如下所示的结构， Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-C1)-D-3-Pal-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Lys-Pr〇-D-Ala-NH2 ； 2) 对步骤1)获得的加尼瑞克前体I的Lys和D-Lys的侧链氨基进行修饰，获得加尼瑞 克粗品； 3) 步骤2)获得的加尼瑞克粗品经纯化、转盐和冻干后获得醋酸加尼瑞克纯品； 其特征在于，步骤2)中所述的修饰方法是将加尼瑞克前体I和试剂乙氨基乙亚胺基甲 磺酸溶解在溶剂水中，加碱调pH至7. 5~10. 5进行反应。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)制备加尼瑞克前体I包括如下步骤： (1) Fmoc-D-Ala-OH和树脂反应，获得Fmoc-D-Ala-树脂，所述树脂优选为RinkAmide resin、RinkAmideAMresin或RinkAmideMBHAresin; (2) Fmoc-D-Ala-树脂采用逐一偶联的方式偶联Fmoc保护基团的其他氨基酸，经乙酰 化后得到加尼瑞克前体I-肽树脂； (3) 加尼瑞克前体I-肽树脂经切割反应，获得加尼瑞克前体I。
3. 根据权利要求2所述的方法，其中步骤（2)所述的Fmoc保护基团的其他氨 基酸分别为Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc) -OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Lys(Boc) -0H、 Fmoc-Tyr(tBu) -〇H、Fmoc-Ser(tBu) -〇H、Fmoc-D-Pal-〇H、Fmoc-D_Cpa-〇H和Fmoc-D-Nal-OH。
4. 根据权利要求2所述的方法，其中步骤（3)所述的切割反应所采用的切割试剂为 TFA:H20=95:5 (V/V)〇
5. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)中所述的碱选自Na0H、Li0H、NaHC03、K0H、 Na2CO3'K2CO3 和KHCO3。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)加碱调pH至8. 5~9. 0进行反应。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)中试剂乙氨基乙亚胺基甲磺酸的投料比为 2~10倍，反应时间为4~48h。
8. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)中所述的纯化为HPLC两步纯化。
9. 根据权利要求8所述的方法，其中HPLC两步纯化的具体步骤为： (1) 第一步纯化：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，流动相A相为0. 1%TFA， B相为乙腈，梯度洗脱为79%A+21%B变化至64%A+36%B; (2) 第二步纯化：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，流动相A相中高氯 酸钠溶液的浓度为20mM，用磷酸调pH为2. 5,B相为乙腈，梯度洗脱为65%A+35%B变化至 55%A+45%B。
10. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)中所述的转盐的具体步骤为：以反相C18 色谱填料为固定相的色谱柱，流动相A1相为0. 2% (V/V)醋酸铵的水溶液，A2相为0. 1%冰 醋酸（V/V)溶液，B相为色谱纯乙腈，梯度洗脱为959^+59?作为流动相洗脱20分钟后，2分 钟内流动相由959^+59?变化为95%A2+5%B，然后用95%A2+5%B作为流动相洗脱10分钟后， 2分钟内流动相由95%A2+5%B变化为80%A2+20%B，然后用80%A2+20%B作为流动相洗脱30分 钟后，用70%A2+30%B作为流动相进行洗脱。
【专利摘要】本发明属于药物合成技术领域，公开了一种制备醋酸加尼瑞克的方法，其采用Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-D-Lys(Boc)-OH分别替代Fmoc-HArg(Et)2-OH和Fmoc-D-HArg(Et)2-OH，预先合成加尼瑞克前体I，再对前体I中Lys和D-Lys的侧链氨基进行修饰、处理即可获得醋酸加尼瑞克。同时，本发明以水代替有机溶剂作为反应溶剂，使得反应可在既定的pH值范围内进行，显著提高了粗肽中产品的含量。此外，本发明还可以通过HPLC两步纯化法显著提高产品的收率。
【IPC分类】C07K1-16, C07K1-06, C07K7-23, C07K1-04
【公开号】CN104844694
【申请号】CN201410052402
【发明人】陈友金, 尹传龙, 刘建, 马亚平, 袁建成
【申请人】深圳翰宇药业股份有限公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2014年2月17日