一种富锶发菜细胞及其培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品生物富集加工技术领域，具体涉及一种富锶发菜细胞及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 锶是人体组织进行正常生命活动所需的微量元素之一。锶对人体的功能主要是与 骨骼的形成密切相关，是人体骨骼及牙齿的正常组成部分。它与血管的功能及构造有关系， 锶在肠内与钠竞争吸收部位，可减少人体对钠的吸收，增加钠的排泄。体内钠过多，易引起 高血压、心血管疾病，而锶却能减少人体对钠的吸收，有预防疾病的作用。
[0003] 发菜，又称发状念珠藻，因其色黑而细长，如人的头发而得名，且发菜与"发财"谐 音，千百年来深受人们的喜爱，发菜营养价值丰富，每l〇〇g天然发菜中含蛋白质22. 8g，是 鸡蛋的1. 5倍，脂肪含量低，富含钙、铁、碘、镁、锌、硒、锰等微量元素。近年来，由于发菜过 度的采收已经带来了严重的环境问题，给生态环境和社会稳定造成了极大的危害。目前，从 发菜藻体中分离发菜细胞进行液体悬浮培养逐渐受到人们的重视，发菜细胞培养技术是从 发菜藻体中分离纯化出具有旺盛分裂能力的发菜细胞，通过液体悬浮培养使发菜细胞大量 繁殖，通过再加工处理，实现发菜细胞工厂化生产，培养过程中发菜细胞的生长速率是野生 发菜生长速率的30倍，实现了发菜资源的快速生长繁殖。
[0004] 锶在发菜细胞中有两种存在形态：其一是锶的离子态形式，其二是与有机物结合 的有机锶形式。离子态锶能够溶解于水，被吸收到细胞内，其中一部分与蛋白质结合进一步 转化成有机锶，这是发菜细胞富集有机锶的前提。而溶于水中的离子态锶，在生产过程中特 别容易流失，导致利用率不高，经济效益不明显。如果长时间摄食高含量离子态锶，不仅造 成浪费，还会出现锶中毒现象；相反，有机锶毒性低，生物活性高，易被人和动物吸收利用， 是安全高效的锶制剂。富集有机锶发菜细胞有生产利用率高、食用安全的特点，有机锶发菜 细胞可用于因缺锶而引起的多种疾病。因此，利用发菜细胞作为载体进行生物富集和转化 无机锶为有机锶是目前具有发展前景的途径。
[0005] 中国专利CN103976411A公开了一种发菜产品的制造方法，通过在培养基中加入 土壤提取液和锶溶液的方式，促进发菜细胞对锶的吸收，同时起到了防止心血管病，但是该 公开的发菜产品的制备方法培养的发菜细胞中锶含量仍然较低，如何通过调整培养基的组 成成分，提高发菜细胞的锶含量，对锶的富集和发菜细胞的开发利用具有重要的意义。
【发明内容】
[0006] 为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种生物量高、锶含量高 的发菜细胞。
[0007] 同时，本发明还在于提供一种富锶发菜细胞的培养方法。
[0008] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种富锶发菜细胞，将发菜细胞置于富锶培养基中培养获得，所述富锶培养基为将 SrCl2添加至基本培养基中混合制得，SrCl 2的浓度为0. 5~4mg/L ;其中每lOOOmL基本培养 基主要由以下质量的原料配制而成：NaN03 2 50mg，MgS04 ? 7H20 75mg，CaCl2 ? 2H20 36mg， H3B04 0? 286mg，MnCl2 ? 4H20 0? 18mg，ZnS04 ? 7H20 0? 02mg，CuS04 ? 5H20 0? 08mg，NaMo04 ? 2H20 0? 04mg，CoC12? 6H20 0? OOlmg，EDTA-Na2 (乙二酸四乙酸二钠）0? lmg，FeS04 ? 7H20 0? 48mg， 柠檬酸 0.06mg，Na2Si03 58mg，K2HP04 40mg，余量为水。
[0009] 所述富锶培养基中SrClJ^浓度与Na 2Si03的浓度比为（1~8) : 116。
[0010] 上述富锶发菜细胞的培养方法，包括以下操作： 1) 将干发菜浸泡于基本培养基，均浆后得到发菜细胞接种液； 2) 取步骤1)制备的发菜细胞接种液在固体培养基上划线接种，纯化培养得到发菜细胞 培养物，从中选出纯化的单藻落，备用； 3) 取步骤2)中纯化的单藻落置于基本培养基中扩大培养，得到发菜细胞； 4) 将步骤3)制备的发菜细胞接种在富锶发菜培养基中培养，培养完成后静置过滤分离 出发菜细胞，即得所述的富锶发菜细胞； 其中固体培养基为基本培养基中加入琼脂制备而得。
[0011] 所述固体培养中基本培养基和琼脂的质量比为100:1. 7。
[0012] 步骤1)中干发菜浸泡于基本培养基前进行预处理，具体方法为：将干发菜用蒸馏 水清洗干净晾干后消毒，再用水冲洗干净。
[0013] 所述消毒为采用70%~75%的酒精消毒0. 5~1. Omin。
[0014] 步骤1)中发菜在基本培养基中浸泡时间为8~llh。
[0015] 步骤3)中扩大培养至对数生长期即得发菜细胞。
[0016] 步骤4)中所述培养的培养条件为：温度为25°C;光照周期为12h光照12h黑暗， 光照强度为2000Lux;培养时间为15~20天。
[0017] 上述富锶发菜细胞的培养方法，还包括将步骤4)中分离出的发菜细胞用水洗涤后 冷冻干燥，冷冻干燥过程中的捕水仓温度为-50~_55°C，时间为12~20h，即得所述的富锶发 菜细胞产品。
[0018] 所述基本培养基由包括以下操作步骤的方法制备而得： I :原料预溶解： a:取CaCl2、MgS04 ? 7H20,用水溶解，得到溶液A ; b :取 NaMo04 CHW'ZnSC^ .fflW'EDTA-NarFeSC^ .71120、〇1504.5H20、 C〇Cl2 ? 6H20、柠檬酸，用水溶解，得到溶液B ; c :取K2HP04 ? 3H20,用水溶解，得到溶液C ; d :取Na2Si03 ? 9H20,用水溶解，得到溶液D ; II :将溶液A和溶液B混合后灭菌得到溶液E ;将溶液C和溶液D混合后，加入NaN03， 灭菌得溶液F; III :将溶液E和溶液F混合，即得所述的基本培养基。
[0019] 所述溶液B 4°C冷藏保存备用。
[0020] 所述溶液A、C、D常温保存备用。
[0021] 步骤II中所述灭菌为湿热法灭菌，温度为121°C，时间为20min。
[0022] 所述富锶培养基由以下方法制备而得：取SrCl2用水溶解后，得到SrCl 2母液，将 31~(：12母液灭菌后加入基本培养基中，即得所述的富锶发菜细胞培养基。调整富锶发菜细胞 培养基的pH为7. 5。
[0023] 有益效果 本发明富锶发菜细胞，将发菜细胞置于富锶培养基中培养获得，富锶培养基中加入氯 化锶，并加入FeS04 ? 7H20、Na2Si03等物质，共同作用，促进发菜细胞对锶的吸收，发菜细胞 从培养基中吸收的无机锶通过细胞转化为有机锶，从而提高了发菜细胞中锶含量，同时提 高发菜细胞中的生物量。
[0024] 本发明富锶发菜细胞的制备方法，采用将发菜浸泡于基本培养液中提取接种获得 纯化的发菜细胞单藻落，并通过基本培养基的扩大培养获得发菜细胞，将发菜细胞置于富 锶培养基中培养获得富锶发菜细胞，提高了发菜细胞对培养基中无机锶的吸收，进而提高 了发菜细胞中锶含量，同时提高发菜细胞中的生物量。本发明制备方法，操作简便，过程易 于控制，适于工业化推广应用。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限 制。
[0026] 实施例1 本实施例富锶发菜细胞为将发菜细胞在富锶培养基中培养获得，其中富锶培养基为将 SrCl2添加至基本培养基中混合制得，SrCl 2的浓度为2mg/L ;其中每1000mL基本培养基主 要由以下质量的原料配制而成：NaN03 250mg，MgS04 ? 7H20 75mg，CaCl2 ? 2H20 36mg，H3B04 0? 286mg，MnCl2 ? 4H20 0? 18mg，ZnS04 ? 7H20 0? 02mg，CuS04? 5H20 0? 08mg，NaMo04 ? 2H20 0? 04mg，CoC12? 6H20 0? OOlmg，EDTA-Na2 (乙二酸四乙酸二钠）0? lmg，FeS04 ? 7H20 0? 48mg， 梓樣酸 〇? 〇6mg，Na2Si03 58mg，K2HP04 40mg。