到1000ml后分装。
[0017] 实施例4,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉5. 0g ;麦芽浸粉5. 0g ;酵母浸 出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;卟啉铁0. 03g ;乳酸钙0. 03g ;萘啶酮酸0.0 lg ;毛子 草酮0. 001g ;维生素& 0. 03g ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;200g / L生地黄水提液200ml ;蒸 馏水加至l〇〇〇ml。制备方法：（1)取40g生地黄加水煮沸30min，过滤，取滤液，根据滤液体 积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得生地黄水提液200ml ; (2)称取牛肝粉； 麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸钙；毛子草酮；混匀溶于步骤1所得的生地黄提 取液中，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌卟啉铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K 1; 无菌脱纤维绵羊血混勾，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0018] 实施例5,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麦芽浸粉2. 0g ;酵母 浸出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;卟啉铁0. 05g ;乳酸钙0. 05g ;萘啶酮酸0. 03g ;毛 子草酮〇.〇〇3g ;维生素& 0.0 lg ;络蛋白磷酸肽0. 5g ;天冬酰胺0. 05g ;无菌脱纤维绵羊血 90ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳 酸钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀蒸馏水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌卟啉 铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏 水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0019] 实施例6,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉5. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母浸 出粉5. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;卟啉铁0. 02g ;乳酸钙0. 03g ;萘啶酮酸0.0 lg ;毛子 草酮0. 001g ;维生素& 0. 03g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;无菌脱纤维绵羊血90ml ;浓度200g / L的生地黄水提液250ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法制备方法：（1)取50g生地黄加水 煮沸45min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得 生地黄水提液250ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸钙；毛子 草酮混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭 菌卟啉铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭 菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
[0020] 实施例7,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉10. 0g ;麦芽浸粉5. 0g ;酵母 浸出粉8. 0g ;氯化钠5. 0g ;琼脂15. 0g ;卟啉铁0. 05g ;乳酸钙0.0 lg ;萘啶酮酸0. 03g ;毛子 草酮0. 003g ;维生素& 0. 05g ;天冬酰胺0. lg ;无菌脱纤维绵羊血100ml ;浓度200g / L的 生地黄水提液300ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法：（1)取60g生地黄加水煮沸60min，过 滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得生地黄水提液 300ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸钙；毛子草酮；天冬酰 胺混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌 卟啉铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K 1;无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml 后分装。
[0021] 实施例8,配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉10. 0g ;麦芽浸粉3. 0g ;酵母 浸出粉10. 〇g ;氯化钠5. 0g ;琼脂20. 0g ;卟啉铁0.0 lg ;乳酸钙0. 05g ;萘啶酮酸0. 05g ;毛 子草酮〇. 〇〇5g ;维生素Ki 0. 05g ;络蛋白磷酸肽0. 3g ;天冬酰胺0.0 lg ;无菌脱纤维绵羊 血100ml ;浓度200g / L的生地黄水提液300ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法：（1)取 60g生地黄加水煮沸60min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓 度为200g/L，得生地黄水提液300ml ; (2)称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼 脂；乳酸钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀溶于步骤（1)所得的生地黄提取液中混匀，210°C灭菌 15min，冷却到45°C，加入灭菌卟啉铁；灭菌萘啶酮酸；灭菌络蛋白磷酸肽；灭菌维生素K 1; 无菌脱纤维绵羊血混勾，灭菌蒸馏水定容到l〇〇〇ml后分装。
[0022] 所述生地黄水提液浓度200g/L指的是每升含有生药200g。
[0023] 本发明所得星状诺卡氏菌选择培养基用于痰液标本，具有检出可靠、星状诺卡氏 菌分离率高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。
[0024] 1对象与方法。
[0025] 1. 1培养基制备：实验组共设4组，分别为实施例1方案组；实施例2方案组、实 施例6方案组、实施例8方案组和对照组，对照组为普通血琼脂培养板（BAP)培养基，其配 方为：牛肉粉5g / L、蛋白胨12g / L、琼脂15g / L、氯化钠5g / L、无菌脱纤维绵羊血 100ml / L〇
[0026] 1. 2痰液采集培养方法：高度疑似星状诺卡氏菌肺炎患者26例，取晨痰，先用20ml 生理盐水洗涤两次，经过l〇ml生理盐水稀释后，加入1%的pH 7. 6的胰蛋白酶溶液消化 90min后用接种环分区划线接种于实施例1方案组；实施例2方案组；实施例6方案组；实 施例8方案组和对照组培养基。37°C保温，保温箱培养48h、96h挑取细小菌落进行菌属鉴 定。各样本编号送检PCR做分子生物学鉴定。
[0027] 1. 3检出阳性标准：取出培养皿，观察培养基上小菌落，生长慢，菌落皱裙，呈颗粒 状，无菌丝，带有黄色或深橙色的菌落生长情况，挑选目标菌涂片，革兰氏染色，显微镜镜检 出阳性，依据《临床微生物学诊断与图解》检验，最终结果金标准为PCR鉴定。
[0028] 2结果：26份高度疑似星状诺卡氏菌肺炎患者痰液标本经PCR最后鉴定为星状诺 卡氏菌阳性的为21例。48h各组检出阳性、假阳性、阴性、假阴性菌株例数见下表，
【主权项】
1. 一种用于痰液标本的星状诺卡氏菌选择培养基，其特征在于配制1000 ml培养基的 配方中含有： 牛肝粉5. 0~15. Og ; 麦芽浸粉2. 0~5. Og ; 酵母浸出粉5. 0~10.0 g ; 氯化钠5. Og ; 琼脂 15. 0 ~20.0 g ; 卟啉铁〇. 01~〇. 〇5g ; 乳酸钙0. 01~0. 05g ; 萘啶酮酸0. 01~0. 05g ; 毛子草酮〇? 001~〇? 005g ; 维生素K1 0.01~0? Ig ; 无菌脱纤维绵羊血80~100mL ; 蒸馏水加至1000ml。
【专利摘要】本发明公开了一种用于痰液标本的星状诺卡氏菌选择培养基。属于检验微生物培养领域，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：牛肝粉、麦芽浸粉、酵母浸出粉、氯化钠、琼脂、卟啉铁、乳酸钙、萘啶酮酸、毛子草酮、维生素K1、无菌脱纤维绵羊血，蒸馏水加至1000ml。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠，星状诺卡氏菌分离率高的特点。
【IPC分类】C12R1-04, C12Q1-04
【公开号】CN104846058
【申请号】CN201510299068
【发明人】康丛霞
【申请人】康丛霞
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月4日