肝癌细胞中β1蛋白功能及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药技术领域，涉及β I蛋白在肝癌细胞中功能及其应用。具体为β I做为粘附分子在肝癌中影响细胞的侵袭和迁移，以此为靶点，对肝癌进行诊断、检测和分型等，同时设计和筛选核酸，蛋白或其他物质作为靶向抗肝癌药物，用于肝癌治疗。
【背景技术】
[0002]电压门控性离子通道，或称电压依赖性和电压敏感性(voltage-dependent andvoltage-sensitive)离子通道，是迄今人类所了解的参与信号转导过程的最复杂的超家族之一，目前其成员已超过140个，并且还有新的成员不断被发现。经纯化、克隆和测定表明，离子通道蛋白是由多个亚基构成复合体。电压门控离子通道有α、β、Y、δ等亚基构成，但不同的离子通道的组成略有差异。
[0003]电压门控性钠离子通道有α亚基和β亚基组成。α亚基分子量约260 kDa，由四个同源跨膜结构域(1-1V)构成，而每个结构域含有六次跨膜螺旋(SfS6)，S4为电压感受器，S5和S6之间的短肽参与构成孔道，起到闸门的作用，参与介导去极化过程。一般来说，VGSC除了 α亚单位以外，还含有广2个被称之为β亚单位的小分子多肽。对于哺乳动物的脑神经细胞来说，钠通道由一个α亚单位(Nav1.1?Navl.9)与一个或更多的辅助β亚单位(β 1、β 2、β 3及β 4 (33?36 kDa))组成的复合体所构成。
[0004]β亚基有多种功能，它不仅能够调节电压门控、离子通道在质膜上的表达，还能够作为细胞黏附分子与细胞骨架蛋白、细胞外基质和其他细胞黏附分子相互作用。近年来，人们逐渐认识到β亚基作为辅助亚基对通道功能的重要性，如β亚基可以调节α亚基在细胞膜上的转运和定位、调节心肌Na+通道晚期电流。除此之外，基于β亚基突变所导致的疾病也逐步被纳入到基因-表型相互作用的研究中来。
[0005]β I和β 3亚基同源性较高，以非共价键的方式与α亚基相结合，β 2和β 4亚基同源性较高，以二硫键的方式与α亚基相结合。β?和β 2亚基功能已经明确为细胞粘附分子(CAM, cell adhes1n molecules), β3和β 4亚基的功能尚不明确。
[0006]在21世纪初，有研究电压门控钠离子通道在不同侵袭性乳腺癌细胞中的表达，在MDA-MB-231和MCF-7细胞中都有β 1、β 2和β 4的mRNA表达，没有检测到β 3，蛋白水平只有MCF-7细胞中有被称为粘附分子的VGSC β I的表达。针对以上结果，在MDA-MB-231细胞中转染VGSC β I并成功表达后，发现细胞的粘附性增强，转移性下降。同样的利用特异性的干扰RNA，对MCF-7细胞中的β I亚基进行干扰，8天后蛋白降低了 40%。同时细胞的粘附性降低了 25%，迁移性升高了 121%。研究表明VGSC β I亚基与乳腺癌细胞的迁移密切相关，因此在临床上可作为乳腺癌治疗的一个新靶标。
[0007]综上所述，电压门控钠离子通道β I亚基的研究也愈来愈受到人们的重视，功能辅助亚基如βI亚基已成为疾病治疗的新靶点以及认识疾病发病过程的新视角。
【发明内容】
[0008]本发明所解决的技术问题是提供肝癌细胞中β I蛋白功能及其应用。
[0009]本发明中β I蛋白功能为在肝癌中，作为粘附分子，影响细胞的侵袭和迁移。具体为肝癌细胞中存在β I蛋白的表达，不同肝癌细胞表达量不同，细胞侵袭和迁移能力不同。β I表达量高，细胞侵袭和迁移能力弱；β I表达量低，细胞侵袭和迁移能力强。
[0010]以β I为靶点影响β I表达的核酸和多肽等物质，能够影响肝癌细胞的侵袭和迁移能力。增加β I表达的核酸或蛋白等物质，降低肝癌细胞的侵袭和迁移能力。因此可以以此为靶点，对肝癌进行诊断、检测和分型等，包括设计和筛选核酸，蛋白或其他物质作为靶向抗肝癌药物，用于肝癌治疗。
[0011]本发明中β I蛋白应用包括:
以β I为革巴点，采用PCR或Western Blotting等技术,对β I蛋白mRNA或蛋白水平检测等方法，对肝癌进行诊断、治疗和分型等。
[0012]以β I蛋白为靶点的化学合成、天然、生物技术方法制造的小分子、多肽、抗体、核酸类靶向肝癌治疗药物及其应用。
[0013]以β I蛋白为靶点的设计和筛选靶向肝癌治疗药物(化学合成，生物化学合成、天然、生物技术方法制造的小分子、多肽、抗体、核酸类)。
【附图说明】
[0014]图1:肝癌细胞株H印G2和Hep3B及肝细胞株中β I的RNA的表达(Α)，蛋白水平表达(B)，细胞迁移能力检测(C)
图2:干扰后HepG2细胞中β? mRNA及蛋白表达检测。(A)干扰如后HepG2细胞中β?mRNA表达水平，(B)干扰前后IfepG2细胞中β I蛋白表达水平
图3:干扰后!fepG2细胞迁移和侵袭能力检测。(A)干扰前后!fepG2细胞迁移能力比较，(B)干扰前后!fepG2细胞侵袭能力比较
图4:Hep3B细胞转染β I后，β I蛋白表达水平的检测。泳道I为转染pcDNA3.0-hSCNIB，泳道2为转染空质粒pcDNA3.0，泳道3为未转染，以GAPDH为内参。
[0015]图5:转染β I基因后!fep3B细胞迁移和侵袭能力检测。(A)转染前后Ifep3B细胞迁移能力比较，(B)转染前后Hep3B细胞侵袭能力比较
图6:镇痛抗肿瘤缬精甘肽作用于肝细胞H印G2后，β I表达水平检测。
[0016]图7:镇痛抗肿瘤缬精甘肽细胞迁移和侵袭能力检测。(A) AGAP作用前后!fepG2细胞迁移能力比较，(B) AGAP作用前后!fepG2细胞侵袭能力比较。
【具体实施方式】
[0017]下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，而不是以任何方式限制本发明特批权利要求的范围。
[0018]如下为实施例中所涉及的序列: βI特异性引物序列如下:
F:5’-CGTCTACCGCCTGCTCTTCT-3’
R: 5’-GGTATTCCGAGGCATTCTCCT-3’
VGSC β I干扰RNA序列:SCNlB-homo-319 5’-GCACUGAGGAGUUUGUCAATT-3’
5，-UUGACAAACUCCUCAGUGCTT-3，
SCNlB-homo-607 5’-CUGAGAUCAUGAUGUAUGUTT-3，
5，-ACAUACAUCAUGAUCUCAGTT-3，
随机序列(Negative Control):
Se