胃癌发生相关分子标志物lncRNA HOTTIP的检测及应用
【技术领域】：
[0001] 本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体而言，本发明涉及一种与胃癌发生相关的 肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP及其辅助诊断试剂盒。
【背景技术】：
[0002] 长链非编码RNA(long non-coding RNA, IncRNA)是一类长度大于200bp核苷酸， 缺少特异开放阅读框，不具备蛋白质编码功能的一类RNA分子。近年来研究显示，IncRNA 参与表观遗传修饰，在基因表达调控中起重要作用，目前IncRNA在肿瘤、血液病、心血管疾 病等多种疾病的临床诊断、治疗及预后评价等领域发挥了重要作用。
[0003] 中国是一个胃癌大国，我国的胃癌具有发病率和病死率尚、早期胃癌比例低、进展 期病例为主要诊治对象等特点。然而现有的肿瘤标志物CEA、CA19-9、CA50、CA125在胃癌 中的敏感度与特异性并不高。因此，寻找可靠的生物标志物作为早期诊断依据和可靠的治 疗靶点成为当务之急。如果能通过新的分子生物标志物对胃癌发生进行有效预测，筛查胃 癌的高危个体，指导临床制定合理的监测、随访、处理及治疗方案，这将极大地提高我国胃 癌的综合防治水平。
[0004] 最新研究发现，IncRNA与胃癌的关系密切，可以作为致癌或者抑癌分子参与胃 癌发生、发展、转移。同源基因 A末端转录本反义RNA(HOXA transcript at the distal tip，H0TTIP)，位于第7号染色体上，与同源基因 A13(H0XA 13)相邻。已有研究发现，HOTTIP 在肝癌及胰腺癌中表达上调，并促进肿瘤的侵袭及增值，可作为肝癌及胰腺癌的新型肿瘤 分子标志物。但是HOTTIP与胃癌关系的研究仍处于空白阶段。研究发现相对于癌旁正常 组织，HOTTIP在胃癌组织中表达显著下调。因此，IncRNA HOTTIP有望成为辅助胃癌诊断 的新型分子标志物。
【发明内容】
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[0005] 发明目的：
[0006] 本发明提供一种与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP及其检测试剂 盒，可对胃癌发生进行有效预测以及用于胃癌的辅助诊断。
[0007] 技术方案：
[0008] 与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA Η0ΤΤΙΡ，其特征在于：分子标志物 IncRNA HOTTIP 的基因序列为 SEQ ID NO. 1。
[0009] 上述与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP的用途，其特征在于：用 于制备胃癌辅助诊断、胃癌发生预测试剂盒中的应用。
[0010] 上述的与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP的诊断试剂盒，其特征 在于：该试剂盒包括：
[0011] ⑴组织中总RNA提取试剂；
[0012] (2)反转录试剂；
[0013] (3)实时荧光定量PCR试剂；
[0014] 其中，实时荧光定量PCR试剂包含与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物HOTTIP的特 异性引物：
[0015] HOTTIP 上游引物：5'-CGTAGAGACACAGGCAGCAG-3'（SEQ ID NO. 2);
[0016] 下游引物：5'-CAGCCGAACAGAGTCAGAGG-3'（SEQ ID NO. 3);
[0017] GAPDH 上游引物：5'-CGGATTTGGTCGTATTGGG-3'（SEQ ID NO. 4);
[0018] 下游引物：5' -CTGGAAGATGGTGATGGGATT-3'（SEQ ID NO. 5)。
[0019] 优点及效果：
[0020] 本发明提出了一种与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP及其检测试 剂盒，具有如下优点：
[0021] 本发明提供一种与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP及应用方法； IncRNA Η0ΤΤΙΡ，位于第7号染色体上，与同源基因 A13(H0XA 13)相邻，可应用于辅助胃癌 诊断的试剂盒中，该IncRNA HOTTIP基因序列详见SEQ NO: 1。
[0022] 在对胃癌组织及其配对癌旁正常组织中，通过实时荧光定量分析发现，IncRNA HOTTIP在胃癌组织表达下调。同时HOTTIP在胃癌组织与癌旁正常组织中存在差异性 表达（Ρ〈0·01)，且在胃癌组织中表达下调。受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，R0C 曲线）分析后曲线下面积（Area Under Curve，AUC)为 0· 767〇 以上结果表明在组织中的低表达IncRNA HOTTIP可能成为新型胃癌诊断标志物。本发明为 胃癌的辅助诊断提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广应用 前景。
【附图说明】：
[0023] 图1为实时荧光定量PCR分析IncRNA HOTTIP在胃癌组织的相对表达量（通 过-Δ Δ Ct值计算）。
[0024] 图2为实时荧光定量PCR分析IncRNA HOTTIP在胃癌组织与癌旁正常组织中的表 达差异（2 Aet值比较，#Ρ〈0· 01)。
[0025] 图3为胃癌组织与癌旁正常组织中IncRNA HOTTIP的ROC曲线分析。
【具体实施方式】：
[0026] 以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而不能理解为对本发明的限制。在不脱 离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型。
[0027] 本发明提供了一种新的与胃癌相关的IncRNA HOTTIP的应用方法。该方法证实 IncRNA HOTTIP可用于胃癌患者的诊断，IncRNA HOTTIP在胃癌中的表达与正常胃组织相比 显著降低，且此方法准确性高。
[0028] 本发明提供了与胃癌发生相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA，IncRNA) HOTTIP肿瘤分子标志物及其试剂盒的应用。IncRNA HOTTIP，位于第7号染色体上，与同源 基因 A13(H0XA 13)相邻，序列详见SEQ ID N0:1。。已有研究发现，HOTTIP在肝癌及胰腺癌 中表达上调，并促进肿瘤的侵袭及增值，可作为肝癌及胰腺癌的新型肿瘤分子标志物。发明 人研究发现相对于癌旁正常组织，HOTTIP在胃癌组织中表达显著下调。IncRNA与胃癌的关 系密切，可以作为致癌或者抑癌分子参与胃癌发生、发展、转移。因此，IncRNA HOTTIP有望 成为辅助胃癌诊断的新型分子标志物。
[0029] 在94对胃癌组织及其配对癌旁正常组织中，通过实时荧光定量分析发现，78对组 织中IncRNA HOTTIP在胃癌组织表达下调（图1)。同时HOTTIP在胃癌组织与癌旁正常组 织中存在差异性表达（P〈〇. 01)(图2)，且在胃癌组织中表达下调。受试者工作特征曲线 (receiver operating characteristic curve，R0C 曲线）分析（图 3)后曲线下面积（Area Under Curve，AUC)为0.767。以上结果表明在组织中的低表达IncRNA HOTTIP可能成为新 型胃癌诊断标志物。本发明为胃癌的辅助诊断提供了强有力的分子生物学工具，具有深远 的临床意义和重要的推广应用前景。
[0030] 与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA Η0ΤΤΙΡ，其特征在于：分子标志物 IncRNA HOTTIP 的基因序列为 SEQ ID NO. 1。
[0031] 上述与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP的用途，可用于制备胃癌 辅助诊断、胃癌发生预测试剂盒中的应用。
[0032] 试剂盒为实时荧光定量PCR检测试剂盒。
[0033] 上述与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物IncRNA HOTTIP的诊断试剂盒，其特征在 于：该试剂盒包括：
[0034] (1)组织中总RNA提取试剂；
[0035] (2)反转录试剂；
[0036] (3)实时荧光定量PCR试剂。
[0037] 其中，实时荧光定量PCR试剂包含与胃癌发生相关的肿瘤分子标志物HOTTIP的特 异性引物：
[0038] HOTTIP 上游引物：5'-CGTAGAGACACAGGCAGCAG-3'（SE