一种老油茶树高效嫁接山茶花砧穗组合选配的分子识别方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及选配砧穗组合的植物嫁接方法，尤其涉及利用遗传系数选配老油茶树 高效嫁接山茶花的砧穗组合的方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 油茶与油棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料植物，其主要产品茶油 是一种高级食用油，色清味香，耐储藏，营养比例合理，有"东方橄榄油"之称。我国油茶产 区存在大量的低产油茶林，其部分植株的产量低、效益差，作为产油树价值不高，如何充分 利用其剩余价值以帮助油茶产区农民脱贫致富是一个重要问题。山茶花是庭院、园林、居家 装饰绿化、美化环境的优良珍贵花木，但其生长速度慢、形成高价值大树一般需数十年。以 老油茶树高冠嫁接山茶花可集二者的优势于一体，既可在2~3年内培育出高大优美的山 茶花，又可改造低产老油茶树，充分发挥其残值效益，增加茶农收入。随着市场对高品质、大 型山茶花需求的日益增加，老油茶树高冠嫁接山茶花已在我国产茶区被广泛应用，并已培 育出许多珍贵山茶花粧景，尽管在嫁接时间、嫁接方法、接后管理及出圃措施等方面已形成 一系列成熟技术，但缺乏高接亲和力、低高接病发生率的砧穗组合早期诊断评价和优选技 术，嫁接不亲和导致的高接病在不同砧穗组合中都有发现，嫁接3年后，高接病导致整株死 亡的发病率高达80%，这严重限制了利用老油茶树嫁接名贵山茶花产业的健康持续发展。
[0003] 梁英荣在2006年介绍了嫁接时间、生长势选择砧枝和砧穗组合、接穗采集、嫁接 操作及接后管理等对成年油茶嫁接山茶花技术的影响因素；康志坚在2006年介绍了油茶 树粧采集、移植及嫁接方法和生长势选择山茶花品种的组合方式及其养护、管护等大粧油 茶换冠山茶花的实用技术措施；曹汉雄在2012年介绍了油茶粧换接山茶花操作过程的 技术要点。本发明人按照梁英荣、康志坚和曹汉雄等提供的方法以老油茶树嫁接山茶花， 但并没能有效防止高接病的发生，一些园区高接病发病率达80%以上。目前，在油茶树 嫁接山茶花领域仅有一项名称为油茶嫁接山茶花嫁接切口（伤口）处理方法（公开号为 CN103109682A)的发明专利，并没有砧穗组合选配方面的启示；而且，现有技术中也没有油 茶树嫁接山茶花的站穗组合分子识别技术的相关报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述问题，本发明以老油茶树为砧木，以山茶花为穗条，根据不同老油茶树和 山茶花种质间的Dice遗传系数设计不同的砧穗组合，根据其嫁接成活率和高接病发病率 选出最适的砧穗组合，可有效避免高接病发生，实现老油茶树高效嫁接名贵山茶花，为山茶 花产业提供技术依托。本发明的技术方案如下：一种老油茶树高效嫁接山茶花砧穗组合选 择的分子识别方法，包括以下顺序的步骤：
[0005] (1)选择不同品种的老油茶树和山茶花，分别提取其DNA ;
[0006] (2)筛选适用于老油茶树和山茶花的SSR标记引物；
[0007] (3)利用筛选出的SSR标记引物，计算不同品种老油茶树和山茶花间的Dice遗传 系数；
[0008] (4)将Dice遗传系数划分为8个级别；在每个Dice遗传系数级别内，以老油茶树 为砧木，山茶花为穗条，设计不同的砧穗组合；
[0009] (5)根据步骤⑷设计的砧穗组合，以老油茶树嫁接山茶花。
[0010] 进一步的，所述步骤⑴获得DNA的方法为：改良CTAB方法。
[0011] 进一步的，所述步骤（2)筛选SSR标记引物的方法包括如下步骤：
[0012] 1)利用RNA-Seq技术开发老油茶树的SSR标记序列；
[0013] 2)采用Primer Premier 5. 0软件设计特异引物：参数为：引物长度（20~24nt)、 3'端稳定性（-6. 0~-9. Okal/mol)、引物Tm值（55~60°C )、GC含量（45~55% )、引物 rating值> 90。以老油茶树和山茶花的DNA为模板，进行PCR扩增，根据聚丙烯酰胺垂直 凝胶电泳结果，筛选出SSR标记引物。
[0014] 进一步的，所述步骤（5)老油茶树嫁接山茶花所使用的方法为撕皮嵌接法。
[0015] 本发明以SSR标记检测老油茶树和山茶花间遗传系数技术为基础，再根据不同遗 传系数的砧穗组合间的嫁接成活率和高接病发生率，选配出最适砧穗组合，有效地降低高 接病发病率，保证老油茶树高效嫁接山茶花。
[0016] 本发明的有益效果如下：
[0017] (1)本发明的分子识别方法操作简单，易推广扩大使用；
[0018] (2)使用本发明方法提供的分子识别方法，筛选出Dice遗传系数范围0. 551~ 0. 600及0. 751~0. 800的老油茶树和山茶花作为嫁接砧穗组合，其嫁接成活率分别为 86%和84%，高接病发病率分别低到3. 5%和2. 7%，保证了老油茶树高效嫁接山茶花。
【附图说明】
[0019] 下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明：
[0020] 图1为SSR标记引物垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳图，其中1~19为山茶花；20~25 为老油茶树；
[0021] 图2为老油茶树嫁接山茶花成活示意图；
[0022] 图3为老油茶树嫁接山茶花死亡示意图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但这不限制本发明的范围，实施例以 在玉屏县大面积种植的7种无性系老油茶树，48种山茶花为材料；老油茶树品种分别为：湘 210、湘林5号、长林27、岑软11、Y-41、Y-44、Y-I ;山茶花品种分别为：大松子、大叶桂、大 紫袍、丹顶鹤、杜丹魁、凤山茶、鹤顶鹤、黑牡丹、恨天高、花露珍、花仙子、火瀑布、娇美人、金 芯芙蓉、锦袍红、靖安茶、菊瓣、宽彩带、六角大红、六角银丝、玛瑙1、玛瑙2、美布尔、美国大 红、魔术城、南天武士、农香、乔伊、秋杜丹、上海女士、师子头、松子魁、童子面、午夜飘云、新 松花、雪娇、早杜丹、早桃红、正黄旗、织女、朱沙紫袍、紫蝴蝶；NaAc溶液的浓度为3mol/L， PH 为 5. 2。
[0024] 实施例1
[0025] (1)以7种无性系老油茶树及48种山茶花为材料，利用改良CTAB方法分别提取其 DNA，步