X 250mm, 5 μπι);流动相为0.01mol/L的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调pH值至2.6，经0.45 μπι孔径合成纤维素酯膜过滤后，超声脱气Ih ;流速0.8mL/min，检测波长210nm，进样量20 μ L，柱温为室温，经检测发酵液中高达198g/L，纯度达到99%。
[0023]实施例2
一种采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:包括以下步骤:
步骤一、甘蔗渣的预处理:将甘蔗渣粉碎至200目，备用；用质量分数为0.5%的NaOH溶液对粉碎后的甘蔗渣进行喷洒揉搓，时间为12h，得到预处理后甘蔗渣；操作方法为:喷洒均匀后揉搓5min，放入45°C环境中；每隔4h喷洒NaOH溶液并揉搓一次，每次揉搓5min ;
步骤二、在预处理后甘蔗渣中添加蒸馏水调节PH值为4.8，然后加入木聚糖酶和纤维素酶，放入50°C摇床上进行酶解糖化，糖化时间为1h ;所述木聚糖酶和纤维素酶的加入量分别为预处理后甘蔗渣质量的0.05%和0.0 8% ;
步骤三、糖化结束后进行过滤，得到过滤酶解液；将得到的过滤酶解液进行浓缩，得到浓缩酶解液；在0.09个大气压条件下，水浴温度达到53°C糖化液出现沸腾现象，转速SOr/min ；
步骤四、取干酪乳杆菌接种于干酪乳杆菌种子液培养基中进行培养，得到干酪乳杆菌的种子液，备用；取凝结芽孢杆菌接种于凝结芽孢杆菌种子液培养基进行培养，得到凝结芽孢杆菌的种子液，备用；取黑曲霉，接种于黑曲霉种子液培养基中进行培养，得到黑曲霉的种子液；
步骤五、取干酪乳杆菌的种子液接种于发酵培养基中，接种量为发酵培养基体积的
2.3% ;接着，置于摇床培养发酵，温度35°C，速率150r/min ;发酵24h后，取出，接种凝结芽孢杆菌的种子液，接种量为发酵培养基的2% ;继续发酵1h后，取出，接种黑曲霉的种子液，接种量为发酵培养基的2% ;然后置于摇床培养发酵，温度32°C，速率200r/min，发酵时间65h ;所得到发酵液进行乳酸含量测定后，进行分离纯化，即得到乳酸。
[0024]所述干酪乳杆菌的种子培养基，每升培养基中含葡萄糖50g，蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，酵母膏 5 g，无水乙酸钠 5 g，MgSO4.7H20 20mL，Mn SO4.7H20 20mL，碳酸钙 20g，pH6.8和吐温lmL，余量为水。
[0025]所述凝结芽孢杆菌的种子培养培养基，每升培养基中含葡萄糖80 g，(NH)4SO4 4g，KH2PO4 0.3 g，ZnSO4.7H20 0.44 g，MgSO4.7H20 0.25 g，余量为水。
[0026]所述的黑曲霉种子液培养基的制备方法为:每1000晕升培养基，取马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，冷却后用纱布过滤除去马铃薯块，向滤液内加入葡萄糖20克搅拌至完全溶解，补水至1000毫升，121°C灭菌20分钟。
[0027]所述发酵液中乳酸含量测定的方法为:采用高效液相色谱进行分析发酵液中乳酸含量，色谱柱为迪马公司的C18反相(4.6mm X 250mm, 5 μ m);流动相为0.01mol/L的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调pH值至2.6，经0.45 μ m孔径合成纤维素酯膜过滤后，超声脱气Ih ;流速0.8mL/min，检测波长210nm，进样量20 μ L，柱温为室温，经检测发酵液中高达201g/L，纯度达到98%。
[0028]实施例3
一种采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:包括以下步骤:
步骤一、甘蔗渣的预处理:将甘蔗渣粉碎至150目，备用；用质量分数为0.5%的NaOH溶液对粉碎后的甘蔗渣进行喷洒揉搓，时间为12h，得到预处理后甘蔗渣；操作方法为:喷洒均匀后揉搓5min，放入45°C环境中；每隔4h喷洒NaOH溶液并揉搓一次，每次揉搓5min ;
步骤二、在预处理后甘蔗渣中添加蒸馏水调节PH值为4.8，然后加入木聚糖酶和纤维素酶；放入50°C摇床上进行酶解糖化，糖化时间为Sh-1Oh ;所述木聚糖酶和纤维素酶的加入量分别为预处理后甘蔗渣质量的0.05%和0.0 8% ;
步骤三、糖化结束后进行过滤，得到过滤酶解液；将得到的过滤酶解液进行浓缩，得到浓缩酶解液；
步骤四、取干酪乳杆菌接种于干酪乳杆菌种子液培养基中进行培养，得到干酪乳杆菌的种子液，备用；取凝结芽孢杆菌接种于凝结芽孢杆菌种子液培养基进行培养，得到凝结芽孢杆菌的种子液，备用；取黑曲霉，接种于黑曲霉种子液培养基中进行培养，得到黑曲霉的种子液；
步骤五、取干酪乳杆菌的种子液接种于发酵培养基中，接种量为发酵培养基体积的
2.1% ;接着，置于摇床培养发酵，温度35°C，速率150r/min ;发酵24h后，取出，接种凝结芽孢杆菌的种子液，接种量为发酵培养基的1.8% ;继续发酵1h后，取出，接种黑曲霉的种子液，接种量为发酵培养基的1.8% ;然后置于摇床培养发酵，温度32°C，速率200r/min，发酵时间60h ;所得到发酵液进行乳酸含量测定后，进行分离纯化，即得到乳酸。
[0029]所述过滤酶解液进行浓缩的方法为:在0.09个大气压条件下，水浴温度达到53°C糖化液出现沸腾现象，转速60-80r/min。
[0030]所述干酪乳杆菌的种子培养基，每升培养基中含葡萄糖50g，蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，酵母膏 5 g，无水乙酸钠 5 g，MgSO4.7H20 20mL，Mn SO4.7H20 20mL，碳酸钙 20g，pH
6.8和吐温lmL，余量为水。
[0031]所述凝结芽孢杆菌的种子培养培养基，每升培养基中含葡萄糖80 g，(NH)4SO4 4g，KH2PO4 0.3 g，ZnSO4.7H20 0.44 g，MgSO4.7H20 0.25 g，余量为水。
[0032]所述发酵培养基，每升培养基中含酶解液50ml，蛋白胨10 g，酵母膏5g，MgSO4.7H20 0.5 g，(NH)4SO4 4 g , KH2PO4 0.4，NaCl 0.1g 和 CaCO4 3g，，余量为水。
[0033]所述发酵液中乳酸含量测定的方法为:采用高效液相色谱进行分析发酵液中乳酸含量，色谱柱为迪马公司的C18反相(4.6mm X 250mm, 5 μ m);流动相为0.01mol/L的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调pH值至2.6，经0.45 μ m孔径合成纤维素酯膜过滤后，超声脱气Ih ;流速0.8mL/min，检测波长210nm，进样量20 μ L，柱温为室温，经检测发酵液中高达205g/L，纯度达到99%。
[0034]本发明所述原材料均可通过市场购买得到，凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、黑曲霉为普通菌种，经试验验证普通菌种均可使用，可通过市场购买得到；实施例中所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌 CICC6028 ;干酪乳杆菌 CICC6028(ZactoAaciWiAs casei CICC6028)，购于中国工业微生种保藏中心(CICC)。
【主权项】
1.一种采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤一、甘蔗渣的预处理:将甘蔗渣粉碎至100-200目，备用；用质量分数为0.5%的NaOH溶液对粉碎后的甘蔗渣进行喷洒揉搓，时间为12h，得到预处理后甘蔗渣；操作方法为:喷洒均匀后揉搓5min，放入45°C环境中；每隔4h喷洒NaOH溶液并揉搓一次，每次揉搓5min ； 步骤二、在预处理后甘蔗渣中添加蒸馏水调节PH值为4.8，然后加入木聚糖酶和纤维素酶，放入50°C摇床上进行酶解糖化，糖化时间为Sh-1Oh ;所述木聚糖酶和纤维素酶的加入量分别为预处理后甘蔗渣质量的0.05%和0.0 8% ; 步骤三、糖化结束后进行过滤，得到过滤酶解液；将得到的过滤酶解液进行浓缩，得到浓缩酶解液； 步骤四、取干酪乳杆菌接种于干酪乳杆菌种子液培养基中进行培养，得到干酪乳杆菌的种子液，备用；取凝结芽孢杆菌接种于凝结芽孢杆菌种子液培养基进行培养，得到凝结芽孢杆菌的种子液，备用；取黑曲霉，接种于黑曲霉种子液培养基中进行培养，得到黑曲霉的种子液； 步骤五、取干酪乳杆菌的种子液接种于发酵培养基中，接种量为发酵培养基体积的2-2.3%;接着，置于摇床培养发酵，温度35°C，速率150r/min ;发酵24h后，取出，接种凝结芽孢杆菌的种子液，接种量为发酵培养基的1.5-2% ;继续发酵1h后，取出，接种黑曲霉的种子液，接种量为发酵培养基的1.5-2% ;然后置于摇床培养发酵，温度32°C，速率200r/min，发酵时间55h-65h ;所得到发酵液进行乳酸含量测定后，进行分离纯化，即得到乳酸。2.如权利要求1所述的采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:所述过滤酶解液进行浓缩的方法为:在0.09个大气压条件下，水浴温度达到53°C糖化液出现沸腾现象，转速60-80r/mino3.如权利要求1所述的采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:所述干酪乳杆菌的种子培养基，每升培养基中含葡萄糖50g，蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，酵母膏5 g，无水乙酸钠 5 g，MgSO4.7H20 20mL, Mn SO4.7H20 20mL，碳酸钙 20g，pH 6.8 和吐温 lmL，余量为水。4.如权利要求1所述的采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:所述凝结芽孢杆菌的种子培养培养基，每升培养基中含葡萄糖80 g，(NH)4SO4 4 g ,KH2PO4 0.3 g,ZnSO4.7H200.44 g，MgSO4.7H20 0.25 g，余量为水。5.如权利要求1所述的采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:所述发酵培养基，每升培养基中含酶解液50ml，蛋白胨10 g，酵母膏5g，MgSO4.7H20 0.5 g，(NH)4SO4 4 g，KH2PO4 0.4，NaCl 0.1g 和 CaCO4 3g，，余量为水。6.如权利要求1所述的采用甘蔗渣生产乳酸的方法，其特征在于:所述发酵液中乳酸含量测定的方法为:采用高效液相色谱进行分析发酵液中乳酸含量，色谱柱为迪马公司的C18反相(4.6mm X 250mm, 5 μ m);流动相为0.01mol/L的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调pH值至2.6，经0.45 μ m孔径合成纤维素酯膜过滤后，超声脱气Ih ;流速0.8mL/min，检测波长210nm，进样量20 μ L，柱温为室温。
【专利摘要】本发明一种采用甘蔗渣生产乳酸的方法，首先，对甘蔗渣的进行预处理后，添加蒸馏水调节pH值为4.8，然后加入木聚糖酶和纤维素酶，放入床上进行酶解糖化；糖化结束后进行过滤，得到过滤酶解液；将得到的过滤酶解液进行浓缩，得到浓缩酶解液；糖化结束后进行过滤，得到过滤酶解液；将得到的过滤酶解液进行浓缩，得到浓缩酶解液；取干酪乳杆菌的种子液接种于发酵培养基中，接着置于摇床培养发酵；发酵24h后，取出，接种凝结芽孢杆菌的种子液；然后置于摇床培养发酵；继续发酵10h，接种黑曲霉的种子液进行发酵；所得到发酵液进行乳酸含量测定后，进行分离纯化，即得到乳酸。本发明方法所得发酵液中乳酸的含量高，纯度高。
【IPC分类】C12P7/56, C12P19/02, C12R1/245, C12R1/685, C12P19/14, C12R1/07
【公开号】CN105063110
【申请号】CN201510636264
【发明人】李市场, 王延凯, 古绍彬, 李晓林, 卢嘉琪
【申请人】河南科技大学
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年9月30日