一种绿原酸原料或原料药及其制备方法和质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种绿原酸原料或原料药。
技术领域 [0002]
[0003] 绿原酸（chlorogenicacid)，又名 3_0_ 咖啡醜查宁酸（3_〇-caffeoylquinnic acid)，是广泛存在于植物中的一种多酚类化合物，其中在忍冬类、杜仲、咖啡等植物中的含 量较高。绿原酸具有较强的抗变态反应、调节体内血糖、清除氧自由基及抗癌抗HIV等作 用，由于其疗效显著、毒副作用小而引起广泛研究。绿原酸源自于植物提取，由于其结构不 稳定，因此极易在生产和贮运过程中引入相关杂质。为保证药物的安全有效和质量可控， 相关杂质的研究已成为目前新药质量研究的重要环节，因此，对绿原酸中相关杂质进行研 究十分必要。（田晨煦，等，高效液相色谱-串联质谱法分离鉴定绿原酸及其相关杂质，色 谱，2007年7月）
[0004] 此外，针对绿原酸的标准，也有相关文献报道，如：廖丽云，绿原酸及冻干制剂质量 标准、稳定性的研究和绿原酸精制品结构确证，四川大学，药物分析，2005,硕士。该文献对 绿原酸中的杂质进行了分析，但没有说明哪些杂质影响绿原酸的质量。
【发明内容】
[0005] 本发明的技术方案是提供了一种绿原酸原料或原料药及其制备方法和质量检测 方法。
[0006] 本发明提供了一种绿原酸原料或原料药，它含有重量百分含量占98%以上的绿原 酸及1. 9%以下的杂质，其中，杂质中含有3-香豆酰奎尼酸，占中间体总重量的0. 1-0. 5%。
[0007] 本发明所述的"绿原酸原料"系从杜仲叶中提取出的绿原酸单体，其绿原酸含量在 98%以上，其他杂质在1.9%以下。除了来源于杜仲外，也可指来源于其它含有绿原酸的植 物提取纯化，如金银花等。
[0008] 进一步优选地，它含有5-咖啡酰奎尼酸（新绿原酸）、4_乙烯基邻苯二酚（咖啡 酸脱羧物）、咖啡酸、4-咖啡酰奎尼酸（隐绿原酸）、绿原酸甲基化物中的一种或几种；其重 量百分含量为：咖啡酸的重量百分含量不超过〇. 4%，除了咖啡酸外其他相关物质中单个 重量百分含量不超过〇. 5 %。
[0009] 其中，3-香豆酰奎尼酸、5-咖啡酰奎尼酸（新绿原酸）、4_乙烯基邻苯二酚（咖啡 酸脱羧物）、4_咖啡酰奎尼酸（隐绿原酸）、绿原酸甲基化物的总百分含量不超过1. 5%。
[0010] 优选地，它含有重量百分含量为98. 0 - 99. 8 %绿原酸及0. 1-1. 9 %杂质。
[0011] 本发明还提供了一种制备绿原酸原料或原料药的方法，它包括如下步骤：
[0012] a、母液制备：取绿原酸含量在20% -60%的杜仲叶提取物，配制粗品水液浓度为 20% -80%，绿原酸浓度为 40mg/ml-480mg/ml，配制温度为 KTC -60°C，pH = L 0-3. 0 ;
[0013] b、萃取：采用乙酸乙酯萃取,萃取次数为3-8次,每次萃取用量为母液体积的5-10 倍，每次萃取前母液pH为1. 0-3. 0,萃取温度5°C -60°C ;
[0014] C、脱色：活性炭用量为粗品质量的0. l-o. 5倍，脱色温度50°C -70°c，脱色时间为 0? 5h_2. Oh ;
[0015] d、浓缩：浓缩温度50°C -70°C，真空度为-0. 06-0. 08MP，浓缩液控制绿原酸含量 为 20mg/ml_50mg/ml ;
[0016] e、沉降：沉降温度(TC _25°C，沉降时间12h-24h ;
[0017] f、结晶：沉降后结晶，结晶温度50°C -70°C，结晶时间0. 5h-3. 0h，结晶后冷却至 IO0C -400C ；
[0018] g、粉碎：乳化或研磨粉碎，粉碎后的晶体粒度100 U m-500μm，粉碎过程可用或不 用溶剂，其溶剂种类为乙酸乙酯、水或一定比例的乙酸乙酯和水的混合液，其混合比例为 1% -99% ；
[0019] h、洗涤：乙酸乙酯、水或一定比例的乙酸乙酯和水的混合液洗涤，其混合比例为 1% -99%，洗涤溶剂用量为物料质量的1-10倍体积，溶剂（液）温度0°C -70°C ;
[0020] i、干燥：干燥物料粒度为120目-20目，干燥温度30°C-8(TC，干燥真空度为常 压一0? 09MP。
[0021] 进一步优选地，它包括下述步骤制备而成：
[0022] a、母液制备：取绿原酸含量在40 %的杜仲叶提取物，配制粗品水液浓度为60%， 绿原酸浓度为240mg/ml，配制温度为25°C，pH = I. 0 ;
[0023] b、萃取：采用乙酸乙酯萃取，萃取次数为5次，每次萃取用量为母液体积的8倍，每 次萃取前母液PH为1. 0,萃取温度25 °C ;
[0024] c、脱色：活性炭用量为粗品质量的0. 2倍，脱色温度60°C，脱色时间为I.Oh;
[0025] d、浓缩：浓缩温度60°C，真空度为-0? 08MP，浓缩液控制绿原酸含量为40mg/ml ;
[0026] e、沉降：沉降温度25°C，沉降时间12h ;
[0027] f、结晶：沉降后结晶，结晶温度70°C，结晶时间I. 0h，结晶终止温度25°C;
[0028] g、粉碎：乳化或研磨粉碎，粉碎后的晶体粒度200μm-300μm，粉碎过程用乙酸乙 酯溶剂；
[0029] h、洗涤：用水洗涤，其用量为物料质量的3倍体积，水温度5°C;
[0030] i、干燥：干燥物料粒度为60目，干燥温度60°C，干燥真空度为-0. 08MP。
[0031] 本发明还提供了一种检测所述的绿原酸原料或原料药的方法，它包括绿原酸的检 测方法和杂质的检测方法：
[0032] 其中绿原酸的含量检测方法为：
[0033] 照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版二部附录V D)测定；
[0034] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0. 1 %甲酸溶 液-乙腈（92:8)为流动相；检测波长215nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000,绿原 酸峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求；
[0035] 测定法取本品适量，精密称定，加流动相制成每1ml约含10iig的溶液，作为供试 品溶液，精密量取20 iU注入液相色谱仪，记录色谱图；另取绿原酸对照品适量，精密称定， 加流动相制成每1ml含10 y g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0036] 杂质的检测方法为：
[0037] 取本品适量，精密称定，加流动相制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为供试品溶液；取 供试品溶液Iml置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照溶液；另取咖啡酸对照品 适量，精密称定，加流动相制成每1ml中含2 ii g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下 的色谱条件，取对照溶液20 iU注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约 为滿量程的20 %，再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20 iil，分别注入液相 色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍；供试品溶液色谱图中如有咖啡酸杂质峰， 按外标法计算；如有其它杂质峰，按自身对照法计算。
[0038] 本发明绿原酸原料或原料药的制备方法，结晶后不需经过重结晶工序处理，减少 因重结晶带来的绿原酸损失，提高产品得率；同时，减少重结晶工序可缩短生产周期，实用 性很强，利于大生产制备绿原酸；产品质量可控性较高，相关杂质均在受控范围之内，含量 在0. 1 %以上的相关杂质能够定性定量分析；检测方法对绿原酸及其类似物检测灵敏度较 高；流动相对有关物质检测无明显干扰，塔板数较高，分离度较好，主峰对称性较好。
【附图说明】
[0039] 图1绿原酸原料药的水和流动相溶液紫外光谱图
[0040] 图2绿原酸原料药高温破坏DAD三维检测图
[0041] 图3绿原酸原料药高温破坏HPLC图（215nm)
[0042] 图4绿原酸原料药高温破坏各峰DAD检测紫外光谱图
[0043] 图5绿原酸原料系统适应色谱图
[0044] 图6绿原酸检测限图谱
[0045] 图7绿原酸定量限图谱
[0046] 图8系统适用性试验HPLC图
[0047] 图9咖啡酸及供试品碱氧化破坏前后HPLC图
[0048] 图10咖啡酸定量限图
[0049] 图11咖啡酸检测限图
[0050] 图12其它有关物质检测色谱图
[0051] 图13实施例1有关物质检测色谱图
[0052] 图14实施例2有关物质检测色谱图
[0053] 图15实施例3有关物质检测色谱图
[0054] 图16实施例4有关物质检测色谱图
[0055] 图17实施例5有关物质检测色谱图
[0056] 图18实施例6有关物质检测色谱图
[0057] 图19实施例7有关物质检测色谱图
[0058] 图20实施例8有关物质检测色谱图
【具体实施方式】
[0059] 实施例1本发明绿原酸原料或原料药的制备
[0060] 1、母液制备
[0061] 取杜仲叶提取物（绿原酸=20% ) 10kg，加水至50L于KTC条件下搅拌溶解，配制 成含绿原酸40mg/ml的水液，用盐酸调pH值至I. 0 ;
[0062] 2、萃取
[0063] 用乙酸乙酯萃取8次,每次用量为500L,每次萃取前母液pH值调至I. 0,萃取温度 5°C ；
[0064] 3、脱色
[0065] 向合并后的萃取液加入5kg活性炭，于50°C条件下搅拌脱色2.Oh;
[0066] 4、浓缩
[0067] 将脱色后的萃取液进行脱碳后，于50°C，真空度为-0. 08MP条件下进行浓缩，控制 浓缩液中绿原酸含量约为20mg/ml(浓缩液体积约为90L);
[0068] 5、沉降
[0069] 将浓缩液于0°C条件下静置24h，料液温度为0°C，过滤，收集滤液；
[0070] 6、结晶
[0071] 将沉降后的滤液加热至70°C，搅拌结晶3. 0h，通冷却水冷却至KTC，过滤，收集 滤渔，得3. 3kg ;
[0072] 7、粉碎
[0073] 取结晶过滤出的结晶体，加30L乙酸乙酯于乳化机中乳化至晶体粒度为 400-500iim，过滤，收集滤渣，得2. 8kg;
[0074] 8、洗涤
[0075] 取粉碎后的滤渣，用2. 8L0°C冰水搅拌使物料充分分散后，过滤，收集滤渣，
[0076] 9、干燥
[0077]将洗涤后的滤渣于80°C、真空度为-0. 09MP条件下干燥，将干燥至近干物料粉过 120目筛再置同等条件下进行干燥，直至干燥完全。
[0078] 10、产品特征
[0079] (1)产品重量：1.4〇7kg
[0080] (2)含量：99. 56% (按干燥品计）
[0081] (3)有关物质：3_香豆酰奎尼酸0.231 %、咖啡酸0.038%
[0082] (4)绿原酸转移率：70. 04%
[0083] 实施例2本发明绿原酸原料或原料药的制备
[0084] 1、母液制备