4-[1-甲基-5-(2-氯乙基-2-羟乙基)胺基-2-苯并咪唑基]丁酸盐酸盐的制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及4-[1-甲基-5-(2-氯乙基-2-羟乙基）胺基-2-苯并咪唑基]丁酸 盐酸盐（即单羟基苯达莫司汀盐酸盐）的制备方法与应用，单羟基苯达莫司汀盐酸盐是盐 酸苯达莫司汀原料或制剂工艺中的重要杂质。
【背景技术】
[0002] 盐酸苯达莫司汀最早于1963年在德国耶拿的微生物试验协会研制获得，是一种 双功能基烧化剂。1993年后，RibosepharmGmbH公司首次完成盐酸苯达莫司汀的大规模临 床验证试验，被统一后的德国正式批准上市，商品名_RibomusUnK,主要用于霍奇金病、非霍 奇金淋巴瘤、浆细胞瘤（多发性骨髓瘤）、慢性淋巴细胞白血病（CLL)及乳腺癌的治疗。2008 年3月20日，FDA批准C印halon公司开发的注射用盐酸苯达莫司汀在美国上市，用于"慢 性淋巴细胞白血病（CLL) "的治疗，商品名Trcanda?;同年10月31日，FDA又批准该药用于 "接受美罗华或含美罗华方案6个月内进展的惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤（NHL) "的治疗。 2010年7月，Mundipharma公司以商品名Lcvacf在欧洲上市用于治疗NHL，CLL和多发性骨 髓瘤（MM)，2010年12月日本Eisai公司以商品名Treakisym?上市用于治疗NHL和套细胞 淋巴瘤（MCL)。盐酸苯达莫司汀的化学结构式如式I所示：
[0005] 关于单羟基苯达莫司汀盐酸盐（HP1，式II化合物所示），文献"Investigations on the Stability of Bendamustin,a Cytostatic Agent of the Nitrogen Mustard Type,I. Synthesis,Isolation,and Characterization of Reference Substances"（Monatshefte fur chemie. 128,1997,291-299)，"盐酸苯达莫司汀临床给 药过程中的降解产物及其结构确证"（中国新药与临床杂志2013, 32 (3) ,211-216)和专 利文献CN102375033A仅对其检测和分析方法进行了报道，未涉及该化合物的具体制备。 0附033513464对该化合物的合成方法进行了报道，在该专利文献中，以[1-甲基-2-(4'-丁 酸乙酯基）-5-氨基]-IH-苯并咪唑（式IV所示）为原料，再经过四步反应制备得到单羟 基苯达莫司汀盐酸盐，其中前三步均存在柱层析纯化等复杂操作，使得整个工艺过程较长， 操作复杂，收率较低；同时，苯达莫司汀及其类似物结构中的氯原子属于易离去基团，操作 复杂且制备周期过长易使氯乙基降解成羟乙基，生成双羟基苯达莫司汀盐酸盐（式III所 示），使得最终产品质量难以保证。
[0006] 因此有必要开发一种更稳定、更便捷、质量更高的方法制备单羟基苯达莫司汀盐 酸盐。
[0007] 对盐酸苯达莫司汀原料和制剂的质量控制，必须有质量合格的杂质对照品。本发 明的4_[1_甲基-5-(2-氯乙基-2-羟乙基）胺基-2-苯并咪唑基]丁酸盐酸盐为盐酸苯 达莫司汀杂质，可以作为杂质对照品控制盐酸苯达莫司汀原料或制剂的纯度。
【发明内容】
[0008] 本发明一方面提供了单羟基苯达莫司汀盐酸盐的制备方法，其化学结构式如式II 所示，化学名为4-[1-甲基-5- (2-氯乙基-2-羟乙基）胺基-2-苯并咪唑基]丁酸盐酸盐。
[0009] 文献"盐酸苯达莫司汀的合成研究"（海峡药学，2011，23 (11)，227-229)报道了盐 酸苯达莫司汀的合成，以2, 4-二硝基氯苯为起始原料，经取代、还原、酰化、环合和还原，得 到 [1-甲基-2-(4'_ 丁酸乙酯基）-5-氨基]-IH-苯并咪唑（式IV所示），再经取代、氯代 和水解得到盐酸苯达莫司汀。整个工艺操作简便快捷，没有柱层析纯化步骤，适合工业化生 产。
[0011] 本发明是在参考上述文献"盐酸苯达莫司汀的合成研究"制备得到盐酸苯达莫司 汀的基础上，开发出的盐酸苯达莫司汀杂质----单羟基苯达莫司汀盐酸盐的合成新方法。 和CN103351346A相比较，本发明专利采用工艺条件稳定的方法，通过一步水解和纯化得到 单羟基苯达莫司汀盐酸盐，解决了该杂质获得的便捷性和稳定性；尤其重要的是，本发明 对单羟基苯达莫司汀盐酸盐纯化方法进行了详细研究，筛选出了更加稳定的柱层析分离条 件，纯度更高，使双羟基苯达莫司汀盐酸盐含量降到0.2% (HPLC法）以下，单羟基苯达莫司 汀盐酸盐HPLC纯度可达99 %以上。本发明的制备条件温和可控，可快捷方便地制备得到高 纯度的单羟基苯达莫司汀盐酸盐。
[0013] 单羟基苯达莫司汀盐酸盐的制备步骤：（1)将式I的盐酸苯达莫司汀在反应溶液 中进行水解反应；（2)水解反应后，再通过柱层析方法分离得到单羟基苯达莫司汀盐酸盐， 浓缩、冷冻干燥得到单羟基苯达莫司汀盐酸盐。
[0014] 进一步地，步骤（1)中所述的反应溶液为水或碱性溶液。
[0015] 进一步地，所述的碱性溶液选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢 氧化钾或氢氧化钠的一种或几种的水溶液，碱性溶液重量百分浓度不大于5 %。
[0016] 进一步地，所述反应溶液为碱性溶液时，还包括在步骤（1)中水解反应后调节反 应溶液的pH值到1~5。
[0017] 进一步地，步骤（1)中所述水解反应温度为25~70°C，反应时间为1~3h。
[0018] 进一步地，步骤（2)中所述柱层析方法使用十八烷基硅烷键合硅胶（ODS-C 18)进行 分离，流动相选自乙腈与稀盐酸、甲醇与稀盐酸的混合液。
[0019] 更进一步地，稀盐酸的pH为1~5。
[0020] 更进一步地，稀盐酸的pH为2~3。
[0021] 另一方面，本发明提供了制备的化合物4-[1-甲基-5-(2-氯乙基-2-羟乙基）胺 基-2-苯并咪唑基]丁酸盐酸盐的用途，其可作为盐酸苯达莫司汀的有关物质检测用对照 品，用于盐酸苯达莫司汀及其相关制剂的质量控制。
[0022] 本发明中所述的稀盐酸为浓盐酸和水混合后所得到的氯化氢水溶液，浓盐酸摩尔 浓度不大于12mol/L，所述稀盐酸浓度控制在10 1~10 5mol/L之间，其pH值为1~5。
[0023] 本发明采用的技术方案的有益效果是操作便捷，反应条件温和可控，大大提高反 应的稳定性，反应产物纯度高。
[0024] 式II化合物结构经核磁共振谱和质谱确证，具体数据为：质谱（MS) :m/z =340[M+H]+，m/z = 338[M-H] + ;高分辨质谱（HRMS) :m/z = 340. 1431[M+H]+，m/z = 338. 1274[M-H]+ !1H NMR(DMS0-d6) S 15. 04(br，1H)，7. 70(d，1H)，7. 10(dd，1H)，6. 90(d，IH ),3. 91 (s, 3H), 3. 78 (s, 4H), 3. 59 (t, 2H), 3. 55 (t, 2H), 3. 18 (t, 2H), 2. 42 (t, 2H), 2. 42 (m, 2 H) ； 13C-NMR(DMS0-d6) 8 173. 5, 151. 3, 146. 3, 131. 5, 124. 2, 113. 2, 112. 2, 94. I, 57. 9, 53. 4, 52. 8, 40. 8, 32. 6, 30. 9, 23. 9, 21. 6〇【附图说明】
[0025] 图1为单羟基苯达莫司汀盐酸盐的合成路线图。
【具体实施方式】
[0026] 本发明将于下文通过实施例更加详细的描述，这些实施例示例性地用于进一步说 明，且不应当视为对本发明的限制。
[0027] 实施例中式I化合物（盐酸苯达莫司汀）是按照文献"盐酸苯达莫司汀的合成研 究"（海峡药学，2011，23 (11)，227-229)报道的盐酸苯达莫司汀的合成方法，以2, 4-二硝基 氯苯为起始原料，经取代、还原、酰化、环合、还原、取代、氯代和水解制备得到盐酸苯达莫司 汀的。其他材料与试剂均为市售可得。
[0028] 单羟基苯达莫司汀盐酸盐的制备
[0030] 实施例1 :
[0031] 式I化合物（Ig)和5%K2C035ml混合搅拌，加热至25°C，反应1小时，用3mol/L 的盐酸溶液调节pH到5,加入乙腈，过滤，母液采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅 胶为十八烷基硅烷键合硅胶（ODS-C 18)，流动相为稀盐酸（pH为5):乙腈=3:1 (体积比）， 流速为2ml/分钟，收集相应的组分，在KTC以下减压浓缩后冷冻干燥，得0. 35g化合物II， HPLC纯度 99. 5%。
[0032] 实施例2 :
[0033] 式I化合物（3g)和5% NaHC0325ml混合搅拌，加热至35°C，反应2小时，用3mol/ L的盐酸溶液调节pH到2,加入乙腈，过滤，母液采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅 胶为十八烷基硅烷键合硅胶（ODS-C 18)，流动相为稀盐酸（pH为2):乙腈=3:1 (体积比）， 流速为5ml/分钟，收集相应的组分，在KTC以下减压浓缩后冷冻干燥，得0. 72g化合物II， HPLC 纯度 99. 1 %。
[0034] 实施例3:
[0035]式I化合物（0? 5g)和0? 5% Na0H5mr混合搅拌，加热至25°C，反应1小时，用3mol/ L的盐酸溶液调节pH到1，加入甲醇，过滤，母液采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅 胶为十八烷基硅烷键合硅胶（ODS-C 18)，流动相为稀盐酸（pH为3):乙腈=3:1 (体积比）， 流速为Iml/分钟，收集相应的组分，在KTC以下减压浓缩后冷冻干燥，得0. 13g化合物II， HPLC 纯度 99. 2%。
[0036] 实施例4:
[0037]式I化合物（IOg)和水50ml混合搅拌，加热至70°C，反应3小时，降温，加入甲 醇使固体溶解后采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅胶为十八烷基硅烷键合硅胶 (ODS-C 18)，流动相为稀盐酸（pH为2. 8):甲醇=3:1 (体积比），流速为6ml/分钟，收集相应 的组分，在KTC以下减压浓缩后冷冻干燥，得3. 42g化合物II，HPLC纯度99. 3%。
【主权项】
1. 一种式II的单羟基苯达莫司汀盐酸盐的制备方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 将式I的盐酸苯达莫司汀在反应溶液中进行水解反应； (2) 水解反应后，再通过柱层析方法分离，浓缩、冷冻干燥得到单羟基苯达莫司汀盐酸 盐；〇2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1)中所述的反应溶液为碱性 溶液或水。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的碱性溶液选自碳酸钾、碳酸 钠、碳酸铯、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钾或氢氧化钠的一种或几种的水溶液。4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的碱性溶液重量百分浓度不大 于5%。5. 根据权利要求3或4所述的制备方法，还包括在步骤（1)中水解反应后调节反应溶 液的pH值到1~5。6. 根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤（1)中水解反应的 温度为25~70°C，反应时间为1~3h。7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2)中所述柱层析方法使用 十八烷基硅烷键合硅胶进行分离，流动相选自乙腈与稀盐酸、甲醇与稀盐酸的混合液。8. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述稀盐酸的pH值为1~5。9. 根据权利要求7所述制备方法，其特征在于：所述稀盐酸的pH值为2~3。10. 权利要求1所述的单羟基苯达莫司汀盐酸盐在制备盐酸苯达莫司汀原料或制剂的 杂质对照品中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种式II的4-[1-甲基-5-(2-氯乙基-2-羟乙基)胺基-2-苯并咪唑基]丁酸盐酸盐的制备方法与应用。其制备方法是将盐酸苯达莫司汀进行水解，再经柱层析分离得到。式II化合物可作为盐酸苯达莫司汀有关物质检测用对照品，用于盐酸苯达莫司汀原料或制剂的纯度控制。
【IPC分类】G01N33/15, C07D235/16
【公开号】CN105085405
【申请号】CN201410188102
【发明人】张连第, 廖明毅, 杨少宁, 丁磊
【申请人】江苏先声药业有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月6日