一种从红豆杉树根中提取紫杉醇的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从红豆杉树根中提取紫杉醇的方法，属于精炼加工领域。
【背景技术】
[0002]紫杉醇是从红豆杉植物上提取的一种化合物，主要适用于治疗卵巢癌和乳腺癌，以及肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤等，是继阿霉素后最有效的抗癌新药之一，总有效率达75%以上。长期以来，紫杉醇是从红豆杉的树皮中提取的，由于红豆杉的树皮为不可再生资源，导致紫杉醇的获取原料非常有限；加之，红豆杉是世界上公认的濒临灭绝的天然珍稀抗癌植物，在自然条件下生长速度缓慢，再生能力差，世界范围内还没有形成大规摸的红豆杉原料林基地，中国已将其列为一级珍稀濒危保护植物，联合国也明令禁止采伐，从而使得紫杉醇的获取原料更为匮乏。
[0003]所有种类的红豆杉中都含有极有限量的紫杉醇。例如短叶红豆杉和云南红豆杉树的树皮中含有约0.02%的紫杉醇，直立曼地亚红豆杉灌木地针叶和根中含有约0.005%至约0.1%的紫杉醇。因此，开发有效的从植物材料中提取高纯度紫杉醇的方法引发了人们极大的兴趣。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题:针对目前技术虽能从红豆杉的枝叶中有效分离提取紫杉醇，但其纯化效果非常不理想，无法直接达到药用标准，需要进行后续的纯化操作，从而增加紫杉醇的提取成本，提取效率低，不能适宜规模批量化生产的现状，提供了一种从云南红豆杉树根中提取紫杉醇的方法。该方法以云南红豆杉树根为原料，打碎后用有机溶剂溶解，萃取并脱脂，再进行梯度淋洗，将含有紫杉醇的淋洗液浓缩干燥，再次提纯，得到高纯度的紫杉醇。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(1)取I?5kg红豆杉树根，放入粉碎机中粉碎成I?2cm的碎片，加入浓度为70?80%的异丙醇溶液，放入发酵罐中，设置温度为28?38°C，密封发酵24?36h ;
(2)将上述发酵液过滤，让得到的滤液通过活性炭柱，进行脱色，得到脱色液，再用二氯甲烷对脱色液进行萃取，常压升温回收溶剂后得到萃取物；
(3)按乙醇和石油醚体积比为1:1?1:3配制混合液，再将萃取物与混合液体积比为1:0.1?1:0.5进行混合并搅拌均匀，放入高压脱脂罐，溶剂脱脂处理2?5h，脱脂温度为50?80°C，压力为0.1?0.5MPa，脱脂完成后冷却至室温，排出脱脂废液，排完废液后，通入120?130°C的过热蒸汽，处理I?2h，然后冷却至室温卸压取出，过滤，放入烘箱中，烘干，烘箱温度为105?110°C，得到紫杉醇粗品；
(4)将紫杉醇粗品与其10?20倍的硅胶进行搅拌，装柱，进行梯度淋洗，淋洗流速为200?250L/h，淋洗液为三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合体积比为100:5:2，用色谱分离法分离紫杉醇，其保留时间为14min,在流动相流出13?15min内收集紫杉醇，将收集到的紫杉醇减压至900?100Pa进行减压浓缩，将浓缩物放入烘箱，烘干，烘箱温度为100?105°C，得到紫杉醇半成品；
(5)将半成品用其5?10倍重量的异丙醇溶解，边搅拌边加入石油醚，直至有晶体析出为止，静置15?20h，过滤，放入烘箱烘干，烘箱温度为105?110°C，即得到纯度80%以上的的紫杉醇。
[0006]本发明的有益效果是:
(O紫杉醇提取纯化率增高，降低了提纯成本；
(2)紫杉醇根可以再生，获取原料更加丰富；
(3)操作容易、分离彻底、能直接达到药用标准。
具体实施方案
[0007]取I?5kg红豆杉树根，放入粉碎机中粉碎成I?2cm的碎片，加入浓度为70?80%的异丙醇溶液，放入发酵罐中，设置温度为28?38°C，密封发酵24?36h ;
将上述发酵液过滤，让得到的滤液通过活性炭柱，进行脱色，得到脱色液，再用二氯甲烷对脱色液进行萃取，常压升温回收溶剂后得到萃取物；按乙醇和石油醚体积比为1:1?1:3配制混合液，再将萃取物与混合液体积比为1:0.1?1:0.5进行混合并搅拌均匀，放入高压脱脂罐，溶剂脱脂处理2?5h，脱脂温度为50?80°C，压力为0.1?0.5MPa，脱脂完成后冷却至室温，排出脱脂废液，排完废液后，通入120?130°C的过热蒸汽，处理I?2h，然后冷却至室温卸压取出，过滤，放入烘箱中，烘干，烘箱温度为105?110°C，得到紫杉醇粗品；将紫杉醇粗品与其10?20倍的硅胶进行搅拌，装柱，进行梯度淋洗，淋洗流速为200?250L/h，淋洗液为三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合体积比为100:5:2，用色谱分离法分离紫杉醇，其保留时间为14min,在流动相流出13?15min内收集紫杉醇，将收集到的紫杉醇减压至900?100Pa进行减压浓缩，将浓缩物放入烘箱，烘干，烘箱温度为100?105°C，得到紫杉醇半成品；将半成品用其5?10倍重量的异丙醇溶解，边搅拌边加入石油醚，直至有晶体析出为止，静置15?20h，过滤，放入烘箱烘干，烘箱温度为105?110°C，即得到纯度80%以上的的紫杉醇。
[0008]经检测，所提取的紫杉醇含量可达80%以上。
[0009]取Ikg云南红豆杉树根，放入粉碎机中粉碎成Icm的碎片，加入浓度为70%的异丙醇溶液，浸泡15h ;将上述浸泡液过滤，让得到的滤液通过活性炭柱，进行脱色，得到脱色液，再用二氯甲烷对脱色液进行萃取，常压升温回收溶剂后得到萃取物；按乙醇和石油醚体积比为1:1配制混合液，再将萃取物与混合液体积比为1:0.1进行混合并搅拌均匀，放入高压脱脂罐，溶剂脱脂处理2h，脱脂温度为50°C，压力为0.1MPa，脱脂完成后冷却至室温，排出脱脂废液，排完废液后，通入120°C的过热蒸汽，处理lh，然后冷却至室温卸压取出，过滤，放入烘箱中，烘干，烘箱温度为105°C，得到紫杉醇粗品；将粗紫杉醇与其10倍的硅胶进行搅拌，装柱，进行梯度淋洗，淋洗流速为200L/h，淋洗液为三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合体积比为100:5:1，用高效液相色谱法检测洗脱流分中的紫杉醇，当检测到紫杉醇流分时，收集含有紫杉醇的淋洗流分，将含有紫杉醇的淋洗流分减压至900Pa进行减压浓缩，将浓缩物放入烘箱，烘干，烘箱温度为100°C，得到紫杉醇半成品；将半成品用其5倍重量的异丙醇溶解，边搅拌边加入石油醚，直至有晶体析出为止，静置15h，过滤，放入烘箱烘干，烘箱温度为105°C，即得到高纯度的紫杉醇。
[0010]经检测，所提取的紫杉醇含量达82%。
[0011]取3kg云南红豆杉树根，放入粉碎机中粉碎成1.5cm的碎片，加入浓度为75%的异丙醇溶液，浸泡18h ;将上述浸泡液过滤，让得到的滤液通过活性炭柱，进行脱色，得到脱色液，再用二氯甲烷对脱色液进行萃取，常压升温回收溶剂后得到萃取物；按乙醇和石油醚体积比为1:2配制混合液，再将萃取物与混合液体积比为1: 0.3进行混合并搅拌均匀，放入高压脱脂罐，溶剂脱脂处理3h，脱脂温度为60°C，压力为0.3MPa，脱脂完成后冷却至室温，排出脱脂废液，排完废液后，通入125°C的过热蒸汽，处理1.5h，然后冷却至室温卸压取出，过滤，放入烘箱中，烘干，烘箱温度为108°C，得到紫杉醇粗品；将粗紫杉醇与其15倍的硅胶进行搅拌，装柱，进行梯度淋洗，淋洗流速为230L/h，淋洗液为三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合体积比为100:6:1，用高效液相色谱法检测洗脱流分中的紫杉醇，当检测到紫杉醇流分时，收集含有紫杉醇的淋洗流分，将含有紫杉醇的淋洗流分减压至950Pa进行减压浓缩，将浓缩物放入烘箱，烘干，烘箱温度为103°C，得到紫杉醇半成品；将半成品用其8倍重量的异丙醇溶解，边搅拌边加入石油醚，直至有晶体析出为止，静置18h，过滤，放入烘箱烘干，烘箱温度为108°C，即得到高纯度的紫杉醇。
[0012]经检测，所提取的紫杉醇含量达90%。
[0013]取5kg云南红豆杉树根，放入粉碎机中粉碎成2cm的碎片，加入浓度为80%的异丙醇溶液，浸泡20h ;将上述浸泡液过滤，让得到的滤液通过活性炭柱，进行脱色，得到脱色液，再用二氯甲烷对脱色液进行萃取，常压升温回收溶剂后得到萃取物；按乙醇和石油醚体积比为1:3配制混合液，再将萃取物与混合液体积比为1:0.5进行混合并搅拌均匀，放入高压脱脂罐，溶剂脱脂处理5h，脱脂温度为80°C，压力为0.5MPa，脱脂完成后冷却至室温，排出脱脂废液，排完废液后，通入130°C的过热蒸汽，处理2h，然后冷却至室温卸压取出，过滤，放入烘箱中，烘干，烘箱温度为110°C，得到紫杉醇粗品；将粗紫杉醇与其20倍的硅胶进行搅拌，装柱，进行梯度淋洗，淋洗流速为250L/h，淋洗液为三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合体积比为100: 7: 2，用高效液相色谱法检测洗脱流分中的紫杉醇，当检测到紫杉醇流分时，收集含有紫杉醇的淋洗流分，将含有紫杉醇的淋洗流分减压至100Pa进行减压浓缩，将浓缩物放入烘箱，烘干，烘箱温度为105°C，得到紫杉醇半成品；将半成品用其10倍重量的异丙醇溶解，边搅拌边加入石油醚，直至有晶体析出为止，静置20h，过滤，放入烘箱烘干，烘箱温度为110°C，即得到高纯度的紫杉醇。
[0014]经检测，所提取的紫杉醇含量达88%。
【主权项】
1.一种从红豆杉树根中提取紫杉醇的方法，其特征在于具体制备步骤为: (1)取I?5kg红豆杉树根，放入粉碎机中粉碎成I?2cm的碎片，加入浓度为70?80%的异丙醇溶液，放入发酵罐中，设置温度为28?38°C，密封发酵24?36h ; (2)将上述发酵液过滤，让得到的滤液通过活性炭柱，进行脱色，得到脱色液，再用二氯甲烷对脱色液进行萃取，常压升温回收溶剂后得到萃取物； (3)按乙醇和石油醚体积比为1:1?1:3配制混合液，再将萃取物与混合液体积比为1:0.1?1:0.5进行混合并搅拌均匀，放入高压脱脂罐，溶剂脱脂处理2?5h，脱脂温度为50?80°C，压力为0.1?0.5MPa，脱脂完成后冷却至室温，排出脱脂废液，排完废液后，通入120?130°C的过热蒸汽，处理I?2h，然后冷却至室温卸压取出，过滤，放入烘箱中，烘干，烘箱温度为105?110°C，得到紫杉醇粗品； (4)将紫杉醇粗品与其10?20倍的硅胶进行搅拌，装柱，进行梯度淋洗，淋洗流速为200?250L/h，淋洗液为三氯甲烷、乙醇、甲基丁酮，三者混合体积比为100:5:2，用色谱分离法分离紫杉醇，其保留时间为14min，在流动相流出13?15min内收集紫杉醇，将收集到的紫杉醇减压至900?100Pa进行减压浓缩，将浓缩物放入烘箱，烘干，烘箱温度为100?105°C，得到紫杉醇半成品； (5)将半成品用其5?10倍重量的异丙醇溶解，边搅拌边加入石油醚，直至有晶体析出为止，静置15?20h，过滤，放入烘箱烘干，烘箱温度为105?110°C，即得到纯度80%以上的的紫杉醇。
【专利摘要】本发明涉及一种从云南红豆杉树根中提取紫杉醇的方法，属于精炼加工领域。该方法以云南红豆杉树根为原料，打碎后用有机溶剂溶解，萃取并脱脂，再进行梯度淋洗，将含有紫杉醇的淋洗液浓缩干燥，再次提纯，得到高纯度的紫杉醇。紫杉醇提取纯化率增高，降低了提纯成本，紫杉醇根可以再生，获取原料更加丰富，操作容易、分离彻底、能直接达到药用标准。
【IPC分类】C07D305/14
【公开号】CN105153076
【申请号】CN201510492051
【发明人】雷春生, 林大伟
【申请人】江苏振宇环保科技有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月12日