瘤背石磺肌肉粗蛋白的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品加工领域，具体设及一种瘤背石横肌肉粗蛋白的提取方法。
【背景技术】 阳00引瘤背石横俯ichidiumstruma)在江苏沿海及上海又名±海参、海癒子、± 鸡等，是软体动物口（Mollusc)腹足纲（Gastropoda)肺螺亚纲（Pulmonata)缩眼目 (Stylommato地ora)石横科俯ichidiidae)的一种生物。瘤背石横的身体表面分布着许多 瘤状突起，背部中间有一背眼，可W自由的伸缩，触角顶端的眼没有感光作用，是一种介于 海洋和陆地之间的过渡带海洋软体动物。
[0003] 瘤背石横的肌肉粗蛋白是瘤背石横中的有效活性成分之一，瘤背石横的活体肌肉 中含有7种人体必需氨基酸。腹足和外套膜是瘤背石横的可食部分，两者肌肉中的谷氨酸 和甘氨酸的比例为6. 51 %和4. 77,同时还含有铁、巧、儘、侣等矿物质，W及维生素B1、B2 等，与一般的植物蛋白相比更容易消化、吸收和利用，营养价值也相对较高，具有抗氧化，抗 肿瘤，降血压，调节免疫等功能。在食品，保健品和药品等领域有广泛的应用。
[0004] 通过对现有文献的检索发现，申请号为201310516990.X的中国发明专利申请公 开了一种采用瘤背石横酶解提取蛋白多肤的方法。首先将干品瘤背石横粉碎后按比例加入 蒸馈水浸泡制成料液；然后调节料液的抑值并按比例加入木瓜蛋白酶揽拌均匀；接着上述 料液加溫至50~60°C水解蛋白质，蛋白质水解后升溫进行灭酶，自然冷却至室溫后放入高 速离屯、机离屯、获得上清液，并按比例加入粉末活性炭揽匀后加溫至50~60°C，保溫一段时 间后过滤去除粉末活性炭；接下来按比例加入P-环状糊精揽匀后升溫至65~70°C后保 溫，自然冷却至室溫即获得液态蛋白多肤；将液态蛋白多肤采用真空低溫浓缩并真空冷冻 干燥后即制得蛋白多肤成品。然而，该方法中步骤繁琐，在操作过程中会对瘤背石横中的蛋 白含量和活性造成损失；酶解时间巧~lOh)过长，成本偏高、蛋白酶解率欠佳的同时还容 易造成蛋白的损失。并且，该发明专利申请中并未明确指出究竟酶解的是瘤背石横内脏还 是肌肉蛋白，而根据相关文献调查显示，瘤背石横肌肉蛋白和内脏蛋白所含成分是不同的， 因此很有必要分别对两者进行一些研究，而根据（黄金田，瘤背石横营养成分分析及品质 评价）文献，瘤背石横肌肉中含有大量氨基酸和蛋白质，因此对肌肉蛋白的研究是很有必 要的。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，提供了一种瘤背石横肌肉粗蛋 白的提取方法。
[0006] 本发明的目的是通过W下技术方案来实现的：
[0007] 本发明设及一种瘤背石横肌肉粗蛋白提取方法，所述方法包括如下步骤：
[0008] S1、样品预处理：将瘤背石横致死后解剖，取出内脏，用蒸馈水洗净剩余部分后揽 碎，加入石油酸浸泡去脂，过滤后加入无水乙醇浸泡去除石油酸，过滤洗净后放入烘箱烘干 至干粉状，得干粉样品；
[0009] S2、肌肉酶解：按照80~100血?g1的固液比，在所述干粉样品中加入蒸馈水，调 节抑值为8. 5~9. 5,加入由膜蛋白酶和中性蛋白酶组成的复合蛋白酶水浴反应1~化， 所述水浴反应的溫度为40~50°C;在高溫下灭活，冷却，离屯、后去除沉淀物，取上清液，冷 冻干燥，即得所述瘤背石横肌肉粗蛋白。
[0010] 在本发明中，水浴反应时间为1~3h。运是由于根据单因素实验显示，在本发明酶 解过程中，最佳时间为化，而超过化后酶解效果开始下降，部分酶开始失活。
[0011] 优选的，步骤S1中，所述瘤背石横为产自上海崇明湿地的瘤背石横。
[0012] 优选的，步骤S1中，所述蒸馈水的溫度为4~8°C;所述石油酸浸泡去脂的时间为 6~lOh，所述无水乙醇浸泡去除石油酸的时间为4~化，所述烘干时间为10~15h。发明 人发现，未经去脂处理的瘤背石横干粉的粘度较大，会影响瘤背石横干粉的酶解过程，本发 明通过石油酸有效的去除瘤背石横肌肉中的脂质，并通过无水乙醇去除石油酸，提高了酶 解率。
[0013]优选的，步骤S2中，所述抑值是通过氨氧化钢溶液和/或稀盐酸溶液来进行调节 的。
[0014]优选的，步骤S2中，所述灭活溫度为90~100°C;所述灭活时间为10~20min。
[0015]优选的，步骤S2中，所述离屯、速度为3000~4000r?min1;所述离屯、的时间为10~20min。
[0016] 优选的，步骤S2中，每Ig所述样品干粉对应的复合蛋白酶的用量为0.08g~ 0.lOgo
[0017]优选的，所述复合蛋白酶中膜蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为1 : 2。采用该比例 的复合蛋白酶时酶解效果最佳。
[001引优选的，所述水浴反应过程中不断调节溶液的抑值为8. 5~9. 5。所述抑值是通 过氨氧化钢溶液和/或稀盐酸溶液来进行调节的。发明人发现实际操作中反应液的抑会 随着反应的进行而变化，从而对酶的水解造成损失，甚至造成酶的失活，因此本发明在反应 过程中通过氨氧化钢和稀盐酸对反应溶液的抑进行控制，维持抑的稳定。
[0019] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0020] 1、本发明利用复合酶解法提取瘤背石横肌肉的粗蛋白，双酶之间的酶切位点相互 互补，运样间接增加了酶切特异位点，从而提高酶解效率；与其他方法相比，本发明的酶解 法还具有过程条件易控制、条件溫和、成本低、效率高等优点。
[0021] 2、利用本发明的方法得到的粗蛋白更加易于分离纯化，提取率较高，且提取的瘤 背石横肌肉蛋白具有抗氧化，抗肿瘤，调节免疫功能等作用，具有很高的应用价值和良好的 市场开发前景。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明进行详细说明。W下实施例将有助于本领域的技术人员 进一步理解本发明，但不W任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可W做出若干调整和改进。运些都属于本发明的保 护范围。 阳似]连施俩11
[0024] 本实施例设及一种瘤背石横肌肉粗蛋白的提取方法；具体包括如下步骤：
[00巧]用4°C蒸馈水洗净解剖后的瘤背石横肌肉组织，并加入石油酸浸泡化去脂，过滤 后加入无水乙醇浸泡地，过滤放入烘箱中烘干lOh。称取Ig瘤背石横肌肉干粉，置于250mL S角烧瓶中，加入80血蒸馈水，揽拌均匀后，通过0.Imol?L1的化OH和0.Imol?L1的 肥1调整溶液抑至8. 5,按照加酶量8% (即Ig干粉对应的复合蛋白酶的用量为0. 08g)加 入复合蛋白酶（酶比例，即膜蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为1 : 2)，将反应液放入水浴 锅中，调节水浴锅溫度为40°C，保持溶液水浴反应比，反应过程中不断通过0.Imol?L1的 化0H和0.Imol?L1的肥1维持溶液抑为8. 5。反应结束后将水浴锅溫度设定为90°C，灭 活lOmin，冷却后，将溶液分别装入10ml离屯、管中，放入离屯、机中，在3000r?min1的转速 下离lOmin，离屯、后收集上清液，冷冻干燥，即得瘤背石横肌肉粗蛋白。整个工艺流程操作渐 变，绿色高效，获得的瘤背石横肌肉粗蛋白具有良好的活性。