一种细菌菌株及其培养方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及菌株领域，具体设及一种细菌菌株及其培养方法和应用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着我国溫室塑料棚蔬菜生产的不断扩大，已将农业推向工厂化高度。但 是，种植年限一长，重巷严重，病虫害严重影响保护地蔬菜生产的可持续发展。其中，根结线 虫病普遍发生且日益严重。根结线虫是一种典型的±传病害，其寄主十分广泛，已超过3000 种植物，W茄科、葫芦科、十字花科等植物受害尤为严重，已成为病虫害防治的世界性难题。 据统计，由根结线虫引起的病害而造成的损失每年高达数百亿美元。由于采用轮作、抗线品 种和化学防治等方法依然存才局限性，国际上逐渐采用生物防治的方法来控制病害的严重 发生。
[0003] 根结线虫的生防因子有很多，包括真菌、细菌、病毒和原生动物等。细菌由于易 于培养、定殖，且对植物寄生线虫的致死性强，因此对生防细菌的研究比较多。已报道的 可防治植物寄生线虫的生防细菌主要类群有：Bacillius, Pseudomonas, Acinebacter, Chromob曰cterium，Enterob曰cter，Serr曰ti曰，Burkholderi曰等，其中W Bscillus和 Pseudomonas中的种类最多。多样的生境造就了假单胞菌拥有较广的生长溫度、抑值范围 和较多的营养代谢类型。研究表明，假单胞菌可促进种子萌发、根生长、矿物营养的积累、水 分的利用和防治植物病害，使得假单胞菌作为生防菌具有广阔的应用前景。研究发现铜绿 假单胞菌化aeruginosa)和巧光假单胞菌化fluorescens)也具有防治根结线虫病的能 力，而且巧光假单胞菌产生的一种胞外蛋白酶在防治南方根结线虫的过程中发挥了重要 作用。Lard等研究发现，P. aeruginosa PAOl产生的氯化物是致死线虫唯一或主要的毒 性因子。Jang等研究发现P. Chlororaphis 06具有较强的杀线虫活性，推测是其产生的氯 化物的起到重要作用。而利用巧光假单胞菌或巧光假单胞菌的代谢产物对番茄种子进行处 理，来防治南方根结线虫的方法尚未有报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述问题，本发明通过系统筛选获得一株细菌，利用该菌或该菌的代谢产物 处理番茄种子，可诱导番茄在种子萌发和生长期间产生对南方根结线虫的抗性，从而解决 了根结线虫病的问题。 阳〇化]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0006] 一种细菌菌株，为巧光假单胞菌（Pseudomonas f Iuorescens) Sneb825,保藏号为 CGMCC No. 10730,保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、；地址：北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2015年4月21日；巧 光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens)Sneb825是从中国迂宁省沈阳市沈阳农业大学试 验田中筛选出的一株对番茄具有强诱导活性的细菌菌株。
[0007] 上述细菌菌株的培养方法，包括如下步骤：
[0008] SI、按质量百分比称取：酵母浸膏0. 1% -0.2%、蛋白腺0.5% -0.6%、牛肉浸膏 0. 3% -0. 4%、薦糖1% -2%，余下为蒸馈水，混合均匀后，得液体培养基；
[0009] S2、将步骤Sl所得的液体培养基按每瓶150血的比例分装于250血的S角瓶 内，分装完成后将上述菌株接种于液体培养基上，P册.8-7. 0,溫度25-28°C，摇床转速 15化?min1，发酵2-3d，得发酵液原液。
[0010] 优选的，发酵时间为3d。
[0011] 上述细菌菌株可用于诱导番茄产生对南方根结线虫的抗性。
[0012] 上述细菌菌株可用于制备番茄种子处理剂，所述番茄种子处理剂包含有效量的 步骤S2所得的发酵液原液。
[0013] 本发明具有W下有益效果：
[0014] 本发明的巧光假单胞菌（PseudomonasfIuorescens)Sneb825或其代谢物具有对 番茄的诱导活性，可用于番茄的种子处理，不仅可促进番茄植株和根部的生长，同时对南方 根结线虫根结的形成具有很大的抑制作用，解决了根结线虫防治的难题。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，W下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明，并不用于限定本发 明。
[0016] 实施例1
[0017]巧光假单胞菌（P.fIuorescens)Sneb825 的培养
[0018] 将巧光假单胞菌（P.fIuorescens)Sneb825的菌株接种到试管培养基上，培养基 配方为牛肉膏蛋白腺培养基，即成分：牛肉浸膏3g，酵母浸膏Ig,蛋白腺lOg，薦糖lOg，琼脂 17-20g，加蒸馈水至lOOOmL。28°C培养3d，获得试管种。
[0019] 再将试管种接种到250mLS角瓶（每瓶装150mL)液体培养基中，培养基配方为： W重量百分比计，酵母浸膏0. 1 % -0. 2 %、蛋白腺0. 5 % -0. 6 %、牛肉浸膏0. 3 % -0. 4%、薦 糖1% -2%，余下为蒸馈水，抑为6. 8-7. 0,发酵溫度为25-28°C，摇床转速15化?min1、发 酵时间2-3d。形成的发酵液或发酵液的制成品可W直接或间接处理番茄种子。被处理的番 茄种子可W减轻由根结线虫病害所造成的危害。
[0020] 实施例2
[0021] 巧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens)Sneb825的发酵处理同实施例1，不同 之处是将液体培养的菌种接种到1000 L的发酵罐进行发酵，在28°C下培养，pH为7. 0,发酵 3d。 阳0巧实施例3
[0023] 巧光假单胞菌（P.fluorescens)Sneb825发酵产品防治南方根结线虫田间效果试 验
[0024]本试验分别在迂宁省铁岭市李千户镇和迂宁省盘锦市高升镇溫室大棚进行田间 效果试验。将制备好的发酵原液，采用液种1 : 40体积比进行种子包衣处理，在无菌条件 下干燥，将处理过的番茄种子正常播种，番茄植株在苗期可W产生对南方根结线虫的抗性， 并且诱抗效果比较稳定，取得很好的防治效果。 阳O巧]步骤一、制备试验制剂 W26] 按前述液体发酵培养方法制备巧光假单胞菌（Pseudomo