一株成团泛菌及其应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明设及微生物领域，特别是一株成团泛菌（化/7toeaa媒?yoweraas)及其应用。
【背景技术】
[0002] 小麦赤霉病是一种典型的气候型病害，在中国、日本、东南亚和美国南、北部等世 界范围内均有发生，且发生频率逐渐增加，其多发生在小麦穗期多雨、气候潮湿的地区并具 有周期性流行的特点，根据其发病特点又被称为烂麦头、红麦头、麦穗枯等。随着农业耕作 中免耕、賴杆还田种植技术和小麦、玉米轮作的推广，化肥使用量的增加W及小麦品种抗性 的丧失，该病的发病率逐年上升，成为麦田中流行的一种毁灭性病害。自20世纪90年代起， 赤霉病给美国农业造成了极大的影响，损失多达30亿美元，很少有单个农业病害能带来如 此庞大的损失。在我国，赤霉病的波及范围和危害也极大，其中发生频率最高、损失最大的 是长江中下游地带。近年来，小麦赤霉病在华北麦区也逐渐流行，增加趋势明显，发病面积 逐步扩大，赤霉病的盛行严重影响着小麦等作物的种植。
[0003] 谷物感染赤霉病后可W产生多种毒素，其中最主要为呕吐毒素（DON)和玉米赤霉 締酬毒素（ZEN)，其中DON毒素会对人畜造成毒害，使动物产生包括嗜睡、食欲丧失、呕吐、 肠道损伤、皮肤坏死、胃肠功能障碍、免疫功能障碍和繁殖功能障碍等症状。
[0004] 目前针对小麦赤霉病及其产生的毒素污染问题，主要采取一些化学药剂防治的方 法，如：多菌灵、氯締菌醋、福美双、甲基硫菌灵等，运些方法尽管在一定程度上控制了小麦 赤霉病的病害，但是化学药剂本身会造成小麦中化学药剂的残留，摄入后影响人体健康，而 且由于相同化学药剂的长期使用，产生了大量的抗性菌株，使得赤霉病发病没法得到有效 控制。同时一些在小麦收获前期没有发病，但是收获的时候受到感染，运些染病小麦看起来 巧粒很健康，但其中已含有大量毒素，误食后极有可能危害人体健康。目前，本领域研究认 为的最佳方法是利用微生物制剂控制赤霉病的生长和产毒。
[0005] 微生物数量大、种类多、基因资源丰富、而且干净彻底、无二次污染，因此，利用微 生物来处理毒素是消除赤霉毒素污染的最好办法。成团泛菌（Pantoeaagglomerans)作 为一种生防菌，可W控制病原菌的生长，目前尚未有将成团泛菌用于防治赤霉病病害、减少 ZEN毒素和DON毒素产生的相关报道。
【发明内容】
[0006] 针对小麦中赤霉病病害和赤霉毒素广泛存在的问题，提供一株对赤霉病菌具有防 控作用的成团泛菌，用于控制小麦赤霉病，减少小麦中DON毒素和ZEN毒素的含量，本发明 是运样实现的： 一株成团泛菌（化/?拉63a媒畑eraas)，其保藏号为CCTCCN0:M2015563;所述成团泛 菌菌体呈杆状，革兰氏染色阴性。 保藏号为CCTCCN0:M2015563的成团泛菌在防治小麦赤霉病、降低小麦赤霉毒素含量 中的应用。
[0007] 进一步，本发明中所述保藏号为CCTCC N0:M2015563的成团泛菌在防治小麦赤霉 病、降低小麦赤霉毒素含量中的应用是指：将成团泛菌制成液体菌剂或可湿性粉剂，用于防 治小麦赤霉病、降低小麦赤霉毒素含量。
[0008] 进一步，本发明中所述液体菌剂是运样获得的： A) 将保藏号为CCTCCN0:M2015563的成团泛菌接种于LB培养基中，30°C试管斜面培 养4她，获得试管菌种； B) 将试管菌种接种至含有LB培养基的摇瓶中，30°C，ISOrpm振荡培养至对数生长期， 获得菌种； C) 将菌种接种至含灭菌LB培养基的种子罐中，接种量为LB培养基体积的10%，在 28-33°C溫度下，揽拌培养至对数生长期，揽拌速率为150-18化pm，培养期间通入无菌空气， 通入量为1 :〇. 2-0. 4,获得种子液； D) 将种子液接种至含有发酵培养基的发酵罐中，接种量为发酵培养基体积的10%，于 28-33°C，揽拌培养48-6化，揽拌速率为150-18化pm，发酵培养期间向发酵罐中通入无菌空 气，通入量为1 :〇. 2-0. 4,获得成团泛菌的液体菌剂，其菌体含量不低于IO9个/ml。
[0009] 进一步，本发明中，所述应用是指将菌体含量至少为IO9C化/ml的液体菌剂，喷施 于小麦穗部，5ml/m2,用W防治小麦赤霉病、降低小麦中赤霉毒素含量。
[0010] 进一步，本发明中，所述可湿性粉剂是由菌体含量至少为IO9C化/ml的液体菌剂与 娃藻±、凹凸棒±混合后获得，它们的质量比为1:1:1 ;其中，成团泛菌液体菌剂的菌体含 量不低于IO9个/ml,可湿性粉剂的菌体含量不低于10i°c化/g。
[0011] 进一步，本发明所述应用是指，将可湿性粉剂悬浮于水溶液中，喷施于小麦穗部， 用量为0. 2g/m2,用W防治小麦赤霉病、降低小麦中赤霉毒素含量。
[0012] 本发明中所述赤霉毒素为DON毒素和ZEN毒素。
[0013] 本发明通过对赤霉菌括抗菌筛选，获得能够同时抑制赤霉菌生长、同时减少DON 毒素和ZEN毒素产生的成团泛菌菌株，并保藏于中国典型培养物保藏中屯、，保藏号为CCTCC NO:M2015563;该菌株不但能有效地抑制赤霉病菌的生长，而且还能抑制赤霉毒素的产生； 同时在解决毒素污染的过程中，也没有毒副产品的产生，不存在二次污染，从而提高农产品 的质量，确保人畜的食用安全；W该菌种制备的液体菌剂和固体菌剂，用于小麦赤霉病的防 控，降低小麦中DON毒素和ZEN毒素含量，生产使用成本低，适宜推广使用。
【附图说明】
[0014] 图1为实施例成团泛菌对禾谷镶刀菌的抑制效果示意图。
【具体实施方式】
[0015] 实施例中设及的培养基配方： LB培养基：W质量百分比计，蛋白腺1. 0%，酵母粉0. 5%，化Cl1. 0%，余量为去离子水； 抑为 7. 0-7. 2; 发酵培养基：W质量百分比计，葡萄糖1. 〇%，（畑4)2SO40.1%，K2HPO40.2%，M拆〇40. 02%，化Cl0. 01%，CaC〇3 0. 3%，蛋白腺0. 05%，余量为蒸馈水，抑值为7. 2-7. 5。
[0016]PDA培养基/PDA平板：马铃馨200g/l，葡萄糖20g/l，琼脂15g/l，余量为蒸馈 水。
[0017] 实施例中所使用的禾谷镶刀菌GZ3639菌株由美国农业部真菌毒素研究中屯、馈 赠。
[001引实施例1筛选菌株 采集江苏六合地区的小麦穗，W常规方法进行表面消毒后，再无菌条件下磨碎麦穗，加 入无菌水，混匀后，进行系列稀释，把不同浓度的稀释液分别涂布于LB、PDA培养基上，30°C 条件下培养5天后，挑取平板上不同的菌落，验证不同菌株对禾谷镶刀菌的括抗能力，挑取 抑制禾谷镶刀菌生长的菌株，在小麦的扬花前期把括抗菌喷施到麦穗上，等小麦成熟后收 获小麦种子，按照国标SN/3136-2012的方法检测小麦中的DON毒素，按照NY/T2070-2011 的方法检测小麦中的ZEN毒素，最终获得能够同时抑制镶刀菌生长和降低赤霉毒素产生 的菌株，申请人将所获得的菌株自命名为AFXSJGH16,向AFXSJGH16培养基中加入甘油， 在-70°C冰箱保存。
[0019] 经检测，AFXSJGH16菌株主要生物学特性为：菌体呈杆状，革兰氏染色阴性；VP实 验、接触酶、硝酸盐还原、精氨酸双水解酶、0-半乳糖巧酶阳性；不能水解淀粉、酪素、糊 精、D-纤维二糖龙胆二糖，能利用巧樣酸、D-麦芽糖、D-海藻糖、薦糖、D-甘露醇、D-果糖。
[0020] 克隆AFXSJ細16菌株的ieSrDNA序列，进行测序，构建AFXSJQ01的系统发育进化 树，通过对AFXSJGH16的生理生化特征结果和系统发育进化地位等鉴定结果，申请人最终 把AFXSJGH16鉴定为成团泛菌a媒如曲eraas乂
[0021] 申请人于2015年9月21将AFXSJGH