一种光合细菌菌剂的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于水体净化领域，具体设及一种用于净化养殖水体水质的光合细菌菌剂 的制备方法，W及运种细菌菌剂的应用。
【背景技术】
[0002] 在集约化养殖水体中，水产动物放养密度高、投喂巧料量大，养殖水体中极易蓄积 大量的残巧、动植物排泄物、死亡残体等含氮有机物。加之，未经处理的养殖废水和工业、生 活污水被排放或被雨水冲刷进入养殖水体，导致养殖水体中氨氮和亚硝酸盐严重超标。高 浓度的氨氮或亚硝酸盐易导致有害细菌和条件致病菌大量滋生，鱼、邮等养殖动物的体质 下降，抗应激能力差，易受病原茵的侵袭，引起水产动物疾病的大面积爆发。
[0003] 生物修复是国内外近10年发展起来的最新环境工程技术，已被成功地应用于± 壤、城市河湖、地下水、近海洋面、农业、畜牧业等多个领域，并成为21世纪环境科技发展最 快的高新技术领域之一。与传统掠夺式养殖模式不同，生物修复技术应用于水产养殖，并非 通过大量使用高营养的巧料和抗生素提高养殖产量，而主要通过生物-生态措施，修复受 损的池塘生态系统，加速生态系统的物质循环和能量循环，增加水体溶氧，改善水质和池塘 自净能力，提高水产养殖的产量和品质。把生物修复技术应用到水产养殖环境修复中，对恢 复和优化水产养殖环境，推动水产养殖业的可持续发展具有重大意义。
[0004] 光合细菌（PhotosyntheticBacteriaJSB)是一类在厌氧条件下进行光合作用的 细菌总称。在水产养殖业中，光合细菌可改善水质，稳定养殖环境，增进鱼邮的免疫力，预防 疾病。同时，光合细菌的菌体蛋白质含量高达65%W上，各种维生素、辅酶等生物活性物质 含量丰富，可W作为鱼邮的巧料及巧料添加剂。
[0005] 随着微生物水处理技术的兴起和发展，开发和利用新型的光合细菌来解决池塘养 殖水体在养殖中后期氨氮、亚硝酸盐升高的问题，已受到了人们的普遍关注。
【发明内容】
[0006] 本发明为解决现有技术的不足，其主要发明目的是提供一种有效净化水体、增强 水产对象抗病能力的光合细菌菌剂的制备方法。
[0007] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种光合细菌菌剂的制备方法，包 括W下步骤 a) 、菌种活化采用硅胶塞封口的试管作为培养容器，加入液体活化培养基，其总体积 占容器有效容积的70-80%，将在冷冻室中低溫保存的光合细菌菌种接种于液体活化培养 基中静置培养，接种量1毫升，培养溫度30-35°C，培养时间5-7天，即得到光合细菌一级 种子； b) 、种子液制备在无菌的操作台上，将光合细菌一级种子接种到250毫升液体种子 培养基中，接种量为20-25毫升，梓紧瓶盖后放于自然光下培养，溫度30-35 °C，培养周期 5-7天，得到光合细菌二级种子液； C)、发酵培养向5升可密封的塑料桶中加入发酵培养基，按照20-50%比例接入光合 细菌二级种子液，梓紧桶盖后露天放置，在光照下发酵，检测发酵液中菌体数量，待菌体数 量达到100亿/毫升时即可停止发酵。
[0008] 所述的一种光合细菌菌剂的制备方法，其步骤a)中液体活化培养基的抑值为 7. 2,含有W下重量百分比的物质：蛋白腺0. 6%，巧樣酸钢0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨钢 0. 2%，氯化钢0. 2%，氯化锭0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸二氨钟0. 2%和余量的水。
[0009] 所述的一种光合细菌菌剂的制备方法，其步骤b)中液体种子培养基的抑值为 7. 2,含有W下重量百分比的物质：蛋白腺0. 6%，巧樣酸钢0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨钢 0. 2%，氯化钢0. 2%，氯化锭0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸二氨钟0. 2%和余量的水。
[0010] 所述的一种光合细菌菌剂的制备方法，其步骤C)中发酵培养基含有W下重量百分 比的物质：醋酸钢0. 1% - 0. 2%，酵母膏0. 1%，氯化锭0. 1%，氯化钢0. 01%，碳酸氨钢0. 3%，屯 水硫酸儀0. 04%，憐酸氨二钟0. 6%，微量元素母液0. 1%，水余量。
[0011] 所述的一种光合细菌菌剂的制备方法，其微量元素母液含有W下重量百分比的物 质：乙二胺四乙酸二钢0. 25%，硫酸锋1. 0%，硫酸儀0. 2%，硫酸铜0. 04%，氯化钻0. 02%，硫酸 亚铁0.7%，水余量。
[0012] 所述的一种光合细菌菌剂的制备方法，其步骤C)中的发酵过程在室外自然光或室 内鹤丝灯光源下进行，每天摇动培养容器2-3次。
[0013] 所述的一种光合细菌菌剂的制备方法，其步骤C)中菌体数量的检测采用双层琼脂 检测法。
[0014] 本发明的又一目的是提供一种上述光合细菌菌剂的应用。
[0015] 主要用途：应用于水产养殖水体施用W净化水质；可针对水体污染、氨氮及亚硝 酸盐含量过高的养殖水体，也可针对受污染的非养殖水体中使用；使用时按照0. 5-1升/ 亩的用量直接撒入水中。
[0016] 本发明的有益效果是：光合细菌菌剂在光合作用下，能够利用污水中的有机质作 为营养物质迅速生长繁殖，而在连续光照作用下，光合作用消耗C〇2的速率远大于其呼吸作 用产生c〇2的速率，导致CO3 7肥〇3值增大，因此抑值持续上升，而较高的抑值有利于降 低系统中憐的可溶性和生物有效性，因此对有机物污染的水体中的氨氮及亚硝酸盐均具有 良好的降解效果，对污水具有较强的净化效果，增加了水中的含氧量，在水产养殖中具有良 好的水质调节作用。
【具体实施方式】
[0017] 本发明作为一种光合细菌菌剂，包含光合细菌菌体及发酵液，活性组分为光合细 菌的一种或几种，有效活菌数不低于100亿/毫升，发酵成熟的菌剂为深红色菌剂，培养容 器内壁有菌体附着。使用沼泽红假单抱菌作为菌种时，发酵时间为3-5天，有效活菌数达 至Ij100亿/毫升。
[0018] 应用于水产养殖水体施用W净化水质时，可针对水体污染、氨氮及亚硝酸盐含量 过高的养殖水体，也可针对受污染的非养殖水体中使用，使用时按照0. 5-1升/亩的用量 直接撒入水中。
[001引制备方法如下： a)、菌种活化 采用硅胶塞封口的试管作为培养容器，加入液体活化培养基，其总体积占容器有效容 积的70-80%，将在冷冻室中低溫保存的光合细菌菌种接种于液体活化培养基中静置培养， 接种量1毫升，培养溫度30-35°C，培养时间5-7天，即得到光合细菌一级种子。
[0020] 液体活化培养基的抑值为7. 2,含有W下重量百分比的物质：蛋白腺0. 6%，巧樣酸 钢0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨钢0. 2%，氯化钢0. 2%，氯化锭0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸 二氨钟0. 2%，培养基基质为水，培养基在12rC条件下灭菌20min，然后降溫再使用。
[00川b)、种子液制备 在无菌的操作台上，将光合细菌一级种子接种到250毫升液体种子培养基中，接种量 为20-25毫升，梓紧瓶盖后放于自然光下培养，溫度30-35°C，培养周期5 -7天，得到光 合细菌二级种子液。
[0022] 液体种子培养基的抑值为7. 2,含有W下重量百分比的物质：蛋白腺0. 6%，巧樣酸 钢0. 6%，酵母浸粉0. 2%，碳酸氨钢0. 2%，氯化钢0. 2%，氯化锭0. 2%，屯水硫酸儀0. 2%，憐酸 二氨钟0. 2%，培养基基质为水。
[002引C)、发酵培养 向5升可密封的塑料桶中加入发酵培养基，按照20-50%比例接入光合细菌二级种子 液，梓紧桶盖后露天放置，在在室外自然光或室内鹤丝灯光源下进行发酵，每天摇动培养容 器2-3次，采用双层琼脂检测法检测发酵液中菌体数量，待菌体数量达到100亿/毫升时 即可停止发酵。发酵培养5-7天后形成深红色发酵液。
[0024]发酵培养基含有W下重量百分比的物质：醋酸钢0. 1%-0. 2%，酵母膏0. 1%，氯化 锭0. 1%，氯化钢0. 01%，碳酸氨钢0. 3%，屯水硫酸儀0. 04%，憐酸氨二钟0. 6%，微量元素母液 0. 1%，水余量。
[00巧]其中，所述的微量元素母液为微量元素混合液，含有W下重量百分比的物质：乙 二胺四乙酸二钢0. 25%，硫酸锋1. 0%，硫酸儀0. 2%，硫酸铜0. 04%，氯化钻0. 02%，硫酸亚铁 0.7%，基质为水。
[0026]实施例1本发明光合细菌菌剂对鱼塘水氨氮和亚硝酸盐处理的室内试验 在养殖池塘水中主要的化学指标有氨态氮、硫化氨、溶解氧、pH、亚硝酸盐和有机物耗 氧量等，其中W氨态氮和亚硝酸盐尤为重要，因为运两种物质是养殖池中的主要有害物质。 氨通常是由含氮有机物分解而产生的，如沉入池底的饲料、鱼排泄物、肥料和动植物死亡的 遗骸，或者是氨基酸经微生物氨化作用脱氨基生成，另外鱼类的代谢终产物多数也W氨的 形式排出。一般情况下，池水中氨的含量较低，水生生物和鱼类排泄的氨被大量池水稀释， 同时硝化细菌将其转化为硝酸盐，因此对鱼类不会产生多大影响，但在缺氧或高密度养殖 和大量投喂巧料时，氨的浓度就会升高。当氨氮的积累在水中达到一定的浓度时就会使鱼 中毒，水中NH4+-N含量超过0. 2mg/L时，就会直接危害鱼类生存，使鱼中毒，减少摄食，生长 缓慢；当水中NH4+-N含量超过0.6mg