和A 4的标定含量分别为0.56 %和2.59 %，将其加入到1500L搅拌提取罐，加入体积比为4:1的正庚烷、丙酮混合溶剂950L，30rpm搅拌提取2h，过滤，滤饼再按上述条件提取4次，合并滤液。将滤液栗入浓缩釜，50°C减压浓缩至约300L，得到浓缩液A。
[0026]2、将上步的浓缩液A转移至1000L萃取釜，加入76%乙醇水溶液290L，25rpm搅拌15min，静置30min，分液，上层正庚烷相用300L 85%乙醇溶液再萃取一次，合并萃取液，55°C减压浓缩至150L，得到浓缩液B。
[0027]3、将上步的浓缩液B转移至500L萃取釜，用氨水调节pH至8.5，加入体积比为
90:10的正庚烧、丙酮混合溶剂130L，30rpm搅拌15min，静置30min，分液，下层水相再萃取一次，合并萃取液，将其转入500L搅拌罐，加入15Kg无水硫酸镁，搅拌lOmin，过滤，将滤液在55°C下减压浓干得米尔贝霉素浸膏14.9Kg，米尔贝霉素A3、^标定含量分别为4.03%,20.12%，米尔贝霉素A3和A4的提取收率分别为84.0%和89.7%。
[0028]4、将上述米尔贝霉素浸膏用60L 二氯甲烷溶解转移至100L反应釜，加入Tempo (四甲基哌啶氮氧化物)52g，三氯化铁1350g，亚硝酸钠578g，27°C搅拌反应4h，取样检测，反应完全后，过滤，滤液在35 °C减压浓干得米尔贝酮。
[0029]5、将米尔贝酮用300L 75%乙醇水溶液溶解，转移至1000L萃取釜，加入体积比为93:7的正庚烷、丙酮溶液300L，搅拌15min，静置60min，分液，下层乙醇溶液再萃取一次，合并正庚烷相，45 °C减压浓干，得米尔贝酮纯化品。
[0030]6、米尔贝酮纯化品用甲醇、二氧六环溶解，滴加盐酸羟胺溶液，26°C反应19小时，将反应体系浓缩，用二氯甲烷-水体系萃取，二氯甲烷相经干燥、浓缩得米尔贝肟粗品；将米尔贝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶剂结晶，结晶品用乙醇溶解，在搅拌下滴加到水中析晶，过滤、干燥得米尔贝肟成品2.97Kg，总收率为73.2%。
[0031]实施例3
[0032]本实施例所提供的米尔贝肟的制备方法，其步骤如下:1、称取130Kg经干燥的米尔贝菌丝体，米尔贝霉素^和A 4的标定含量分别为0.58 %和2.55%，将其加入到1500L搅拌提取罐，加入体积比为8:1的正庚烷、丙酮混合溶剂1200L，30rpm搅拌提取2h，过滤，滤饼再按上述条件提取3次，合并滤液。将滤液栗入浓缩釜，60°C减压浓缩至约300L，得到浓缩液A。
[0033]2、将上步的浓缩液A转移至1000L萃取釜，加入88%乙醇水溶液250L，25rpm搅拌15min，静置30min，分液，上层正庚烷相用300L 85%乙醇溶液再萃取一次，合并萃取液，55°C减压浓缩至150L，得到浓缩液B。
[0034]3、将上步的浓缩液B转移至500L萃取釜，用氨水调节pH至10.5，加入体积比为93:7的正庚烧、丙酮混合溶剂170L，30rpm搅拌15min，静置30min，分液，下层水相再萃取一次，合并萃取液，将其转入500L搅拌罐，加入15Kg无水硫酸镁，搅拌lOmin，过滤，将滤液在55°C下减压浓干得米尔贝霉素浸膏14.9Kg，米尔贝霉素A3、^标定含量分别为4.03%,20.12%，米尔贝霉素A3和A4的提取收率分别为84.0%和89.7%。
[0035]4、将上述米尔贝霉素浸膏用60L 二氯甲烷溶解转移至100L反应釜，加入Tempo (四甲基哌啶氮氧化物)52g，三氯化铁1350g，亚硝酸钠578g，33°C搅拌反应3h，取样检测，反应完全后，过滤，滤液在35 °C减压浓干得米尔贝酮。
[0036]5、将米尔贝酮用300L 55%乙醇水溶液溶解，转移至1000L萃取釜，加入体积比为
91:9的正庚烷、丙酮溶液300L，搅拌15min，静置60min，分液，下层乙醇溶液再萃取一次，合并正庚烷相，45 °C减压浓干，得米尔贝酮纯化品。
[0037]6、米尔贝酮纯化品用甲醇、二氧六环溶解，滴加盐酸羟胺溶液，26°C反应19小时，将反应体系浓缩，用二氯甲烷-水体系萃取，二氯甲烷相经干燥、浓缩得米尔贝肟粗品；将米尔贝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶剂结晶，结晶品用乙醇溶解，在搅拌下滴加到水中析晶，过滤、干燥得米尔贝肟成品2.79Kg，总收率为68.8%。
【主权项】
1.一种米尔贝肟的制备方法，其特征在于包括以下步骤:(1)、米尔贝霉素提取:以发酵所得的米尔贝菌丝体为原料，经正庚烷与乙醇的混合溶剂搅拌提取后，将提取液减压浓缩，得到浓缩液A，将浓缩液A用乙醇水溶液萃取后，萃取液加压浓缩，得到浓缩液B ;调节浓缩液B的pH至8?11，加入正庚烷与丙酮的混合溶剂萃取，得到正庚烷相，将正庚烷相过滤后，再减压浓缩后得到米尔贝霉素； (2)、米尔贝酮制备:以米尔贝霉素为原料，建立氧化反应体系，反应完成后将反应体系过滤、浓缩、萃取、浓缩后得到中间产物米尔贝酮； (3)、米尔贝肟合成:将米尔贝酮用甲醇、二氧六环溶解，滴加盐酸羟胺溶液，25?35°C反应12?20小时，将反应体系浓缩，用二氯甲烷-水体系萃取，二氯甲烷相经干燥、浓缩得米尔贝肟粗品； (4)、米尔贝肟纯化:将米尔贝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶剂结晶，结晶品用乙醇溶解，在搅拌下滴加到水中析晶，过滤、干燥得米尔贝肟成品。2.根据权利要求1所述的米尔贝肟的制备方法，其特征在于:步骤(1)中正庚烷与乙醇的混合溶剂中两者的体积比为(4?8): 1，提取时的固液质量体积比为1: (5?10)，提取次数2?5次，提取液在50?60°C下减压浓缩至原体积的1/10?1/4，得到浓缩液A。3.根据权利要求1所述的米尔贝肟的制备方法，其特征在于:步骤⑴中浓缩液A萃取所用乙醇水溶液的浓度为75%?90 %，分两次萃取，每次的溶剂用量为浓缩液A体积的0.7?1倍，合并两次萃取的乙醇相，加压浓缩至原体积的1/10?1/4，制得浓缩液B。4.根据权利要求1所述的米尔贝肟的制备方法，其特征在于:步骤(1)中用氨水调节浓缩液B的pH至8?11，加入的正庚烷与丙酮的混合溶剂中正庚烷与丙酮的体积比为(10?20):1，分两次萃取，每次溶剂的用量为浓缩液B体积的0.8?1.2倍，合并正庚烷相，加入无水硫酸镁后搅拌、过滤。5.根据权利要求1所述的米尔贝肟的制备方法，其特征在于:步骤(2)的氧化反应体系中以氯化铁为氧化剂，以哌啶类氮氧自由基为催化剂，NaN02S铁离子螯合剂，在二氯甲烷溶剂中于25?40°C下反应2?5h，米尔贝霉素、催化剂、FeCl3、NaN02以及二氯甲烷之间的摩尔比为 1: (0.02 ?0.08): (1.2 ?1.5): (1.2 ?1.5): (100 ?160)。6.根据权利要求1所述的米尔贝肟的制备方法，其特征在于:步骤⑵中将反应体系过滤后35°C减压蒸干进行浓缩，再用浓度50%?80%的乙醇水溶液溶解，其中每千克浓缩物用15?30L的溶液溶解，然后再加入等体积的混合溶剂萃取两次，混合溶剂为正庚烷与丙酮，其中正庚烷与丙酮的体积比为(10?20):1。
【专利摘要】本发明提供了一种米尔贝肟的制备方法，包括以下步骤：米尔贝霉素提取：以发酵所得的米尔贝菌丝体为原料，经提取、浓缩、萃取、浓缩、再萃取、再浓缩后得到米尔贝霉素；米尔贝酮制备：以米尔贝霉素为原料，建立氧化反应体系，反应完成后将反应体系过滤、浓缩、萃取、浓缩后得到中间产物米尔贝酮；米尔贝肟合成：将米尔贝酮用甲醇、二氧六环溶解，滴加盐酸羟胺溶液反应，将反应体系浓缩，萃取、干燥、浓缩得米尔贝肟粗品；米尔贝肟纯化：将米尔贝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶剂结晶，结晶品用乙醇溶解，在搅拌下滴加到水中析晶，过滤、干燥得米尔贝肟成品。该制备方法产能大幅提高，成本明显下降，明显优于现有的制备方法。
【IPC分类】C07D493/22
【公开号】CN105254644
【申请号】CN201510742723
【发明人】付光明, 何福彪, 张文凯, 余翔
【申请人】湖北宏中药业股份有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月4日