一种米尔贝肟的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于化学品的合成及纯化领域，具体涉及一种半合成大环内酯类驱虫药的合成及纯化方法。
【背景技术】
[0002]米尔贝西(Milbemycin Oxime)是大环内酯类抗体内外寄生虫药物，是米尔贝霉素A3和A4的肟衍生物。米尔贝肟具有广谱的抗寄生虫作用，对体内、体外寄生虫特别是线虫和节肢动物有良好的驱杀作用。Lee等通过米尔贝肟对广东血圆线虫和犬恶丝虫体外活力的神经药理学机制研究显示，米尔贝肟对两种虫体的抑制和刺激效应是通过的gabergic和胆碱能机制实现的。药物与靶虫细胞上的特异性高亲合力的位点结合，影响了细胞膜对C1-的通透性，继而引起线虫的神经细胞及节肢动物的肌细胞抑制性神经递质γ_氨基丁酸(GABA)的释放量增加，打开谷氨酸控制的C1-通道，增强神经膜对C1-的通透性，GABA作用于突触前神经末梢，减少兴奋性递质的释放，使突触后膜产生兴奋性突触后电位减弱，突触后神经元因膜电位的去极化程度达不到阈值而不能进入兴奋状态，从而引起抑制，虫体麻痹、死亡。哺乳的主要外周神经传递介质是乙酰胆碱，不受影响，虽然此类药对大脑中枢神经系统内的GABA有一定影响，但其不易通过血一脑屏障，因此在推荐使用剂量下使用对脊椎动物无毒副作用。本类药物进入到体内后极少分布到哺乳动物脑组织，因此可以选择性地作用于宿主的体内外寄生虫，而对动物宿主本身不表现作用。
[0003]目前已经报道的米尔贝肟的制备方法均采用了硅胶层析或制备色谱等工艺。CN101037442Α公开了一种利用冰城链霉菌制备α _型米尔贝霉素的方法。该方法采用甲醇提取，乙酸乙酯萃取，硅胶层析及C18制备色谱纯化得到α-型米尔贝霉素。CN 104327094Α公开了一种米尔贝肟的分离纯化方法。该方法以提取的米尔贝霉素浸膏进行合成得到米尔贝肟粗品，然后采用硅胶柱层析进行初步纯化，再采用反相高效液相色谱进行精纯，最后经结晶、转晶、干燥得到米尔贝肟成品。上述米尔贝肟的制备方法的主要问题是硅胶层析或制备色谱不仅设备投入大，溶剂消耗大，成本高，而且较难放大，难以实现工业化生产。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种米尔贝肟的制备方法，解决了【背景技术】中的不足，该制备方法产能大幅提高，成本明显下降，明显优于现有的制备方法。
[0005]实现本发明上述目的所采用的技术方案为:
[0006]—种米尔贝肟的制备方法，包括以下步骤:(1)、米尔贝霉素提取:以发酵所得的米尔贝菌丝体为原料，经正庚烷与乙醇的混合溶剂搅拌提取后，将提取液减压浓缩，得到浓缩液Α，将浓缩液Α用乙醇水溶液萃取后，萃取液加压浓缩，得到浓缩液B ;调节浓缩液B的pH至8?11，加入正庚烷与丙酮的混合溶剂萃取，得到正庚烷相，将正庚烷相过滤后，再减压浓缩后得到米尔贝霉素；
[0007](2)、米尔贝酮制备:以米尔贝霉素为原料，建立氧化反应体系，反应完成后将反应体系过滤、浓缩、萃取、浓缩后得到中间产物米尔贝酮；
[0008](3)、米尔贝肟合成:将米尔贝酮用甲醇、二氧六环溶解，滴加盐酸羟胺溶液，25?35°C反应12?20小时，将反应体系浓缩，用二氯甲烷-水体系萃取，二氯甲烷相经干燥、浓缩得米尔贝肟粗品；
[0009](4)、米尔贝肟纯化:将米尔贝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶剂结晶，结晶品用乙醇溶解，在搅拌下滴加到水中析晶，过滤、干燥得米尔贝肟成品。
[0010]步骤(1)中正庚烷与乙醇的混合溶剂中两者的体积比为(4?8):1，提取时的固液比为1: (5?10)，提取次数2?5次，提取液在50?60°C下减压浓缩至原体积的1/10?1/4，得到浓缩液A。
[0011]步骤(1)中浓缩液A萃取所用乙醇水溶液的浓度为75%?90%，分两次萃取，每次的溶剂用量为浓缩液A体积的0.7?1倍，合并两次萃取的乙醇相，加压浓缩至原体积的1/10?1/4，制得浓缩液B。
[0012]步骤(1)中用氨水调节浓缩液B的pH至8?11，加入的正庚烷与丙酮的混合溶剂中正庚烷与丙酮的体积比为(10?20):1，分两次萃取，每次溶剂的用量为浓缩液B体积的
0.8?1.2倍，合并正庚烷相，加入无水硫酸镁后搅拌、过滤。
[0013]步骤(2)的氧化反应体系中以氯化铁为氧化剂，以哌啶类氮氧自由基为催化剂，NaN02S铁离子螯合剂，在二氯甲烷溶剂中于25?40 °C下反应2?5h，米尔贝霉素、催化剂、FeCl3、NaN02&及二氯甲烷之间的摩尔比为 1: (0.02 ?0.08): (1.2 ?1.5): (1.2 ?1.5):(100 ?160)。
[0014]步骤(2)中将反应体系过滤后35°C减压蒸干进行浓缩，再用浓度50%?80%的乙醇水溶液溶解，其中每千克浓缩物用15?30L的溶液溶解，然后再加入等体积的混合溶剂萃取两次，混合溶剂为正庚烷与丙酮，其中正庚烷与丙酮的体积比为(10?20):1。
[0015]与现有技术相比，本发明具有以下优点:本发明先用正庚烷和乙醇体系对米尔贝霉素提取物进行萃取，去除极性较小的杂质(正庚烷相中)。米尔贝霉素经氧化反应转化为米尔贝酮，再次采用正庚烷与乙醇体系进行萃取，由于米尔贝酮极性更小，在萃取过程中米尔贝酮分配在正庚烷相中，因此通过对米尔贝酮的萃取又能去除分配在乙醇中的极性较大的杂质。米尔贝酮经肟化反应生成米尔贝肟后直接经结晶、转晶、干燥即可得到米尔贝肟成品。本发明以氧化反应前后的两次萃取替代了原有的硅胶柱层析和反相制备色谱，使得产能大幅提高，成本明显下降，明显优于前述报道的制备方法。
【具体实施方式】
[0016]下面结合具体实施例对本发明做详细具体的说明，但是本发明的保护范围并不局限于以下实施例。
[0017]实施例1
[0018]本实施例所提供的米尔贝肟的制备方法，其步骤如下:1、称取130Kg经干燥的米尔贝菌丝体，米尔贝霉素^和A 4的标定含量分别为0.55 %和2.57%，将其加入到1500L搅拌提取罐，加入体积比为6:1的正庚烷、丙酮混合溶剂750L，30rpm搅拌提取2h，过滤，滤饼再按上述条件提取2次，合并滤液。将滤液栗入浓缩釜，55°C减压浓缩至约300L，得到浓缩液A。
[0019]2、将上步的浓缩液A转移至1000L萃取釜，加入85%乙醇水溶液300L，25rpm搅拌15min，静置30min，分液，上层正庚烷相用300L 85%乙醇溶液再萃取一次，合并萃取液，55°C减压浓缩至150L，得到浓缩液B。
[0020]3、将上步的浓缩液B转移至500L萃取釜，用氨水调节pH至9.5，加入体积比为95:5的正庚烧、丙酮混合溶剂150L，30rpm搅拌15min，静置30min，分液，下层水相再萃取一次，合并萃取液，将其转入500L搅拌罐，加入15Kg无水硫酸镁，搅拌lOmin，过滤，将滤液在55°C下减压浓干得米尔贝霉素浸膏14.9Kg，米尔贝霉素A3、^标定含量分别为4.03%,20.12%，米尔贝霉素A3和A4的提取收率分别为84.0%和89.7%。
[0021]4、将上述米尔贝霉素浸膏用60L 二氯甲烷溶解转移至100L反应釜，加入Tempo (四甲基哌啶氮氧化物)52g，三氯化铁1350g，亚硝酸钠578g，35°C搅拌反应2h，取样检测，反应完全后，过滤，滤液在35 °C减压浓干得米尔贝酮。
[0022]5、将米尔贝酮用300L 65%乙醇水溶液溶解，转移至1000L萃取釜，加入体积比为95:5的正庚烷、丙酮溶液300L，搅拌15min，静置60min，分液，下层乙醇溶液再萃取一次，合并正庚烷相，45 °C减压浓干，得米尔贝酮纯化品。
[0023]6、米尔贝酮纯化品用甲醇、二氧六环溶解，滴加盐酸羟胺溶液，30°C反应16小时，将反应体系浓缩，用二氯甲烷-水体系萃取，二氯甲烷相经干燥、浓缩得米尔贝肟粗品；将米尔贝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶剂结晶，结晶品用乙醇溶解，在搅拌下滴加到水中析晶，过滤、干燥得米尔贝肟成品2.85Kg，总收率为70.3%。
[0024]实施例2
[0025]本实施例所提供的米尔贝肟的制备方法，其步骤如下:1、称取130Kg经干燥的米尔贝菌丝体，米尔贝霉素^