一种用于治疗骨破坏性疾病的二萜化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从干燥的款冬花中分离得到的一种具有治疗 骨破坏性疾病作用的二祗类化合物及其制备方法。
【背景技术】 阳00引款冬花别名冬花、蜂斗菜或款冬蒲公英，系菊科款冬属植物款冬CTussilagofarfaru L.)的花蕾，分布于我国河北、新疆等省区。款冬的花先叶开放，花亭数 个，有鱗片状巷叶10多片，花雌性，花期2-3月份。款冬的入药部位为其干燥花蕾，呈不整 齐棍棒状分布，花头外面长有许多鱼鱗状巷片，通常在10月下旬至12月下旬花尚未出±时 采挖。药材气味清香，味道微微发苦。款冬花性溫，味辛，微苦，润肺下气、止咳化疲，主治喘 咳疲多、劳嗽咯血、急慢性气管炎等症。在《本经》中记载：对"寒束肺经之饮邪喘、嗽最宜"。
[0003] 国内外现已报道款冬花的化学成分类型主要包括黄酬、祗类、酪类、生物碱类和挥 发油类。款冬花具有止咳、平喘、升压、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等药理活性。款冬止嗽颗粒能明 显延长浓氨水引咳后小鼠咳嗽的潜伏期，减少咳嗽次数，增加小鼠气管段酪红排泌量。款冬 花素、甲基下酸款冬花醋和14-去乙酷氧基-3, 14-去氨-2-甲基下酸款冬花醋对血小板活 化因子引起的血小板聚集有抑制作用。款冬花黄酬对〇2 ·、·0Η、Η2033种自由基有较好的 清除能力，且在0. 38~47. 65mg/L1范围内呈现一定量效关系，对3种自由基的清除能力大 小化〇3>〇2 ·> -0H。款冬花乙醇提取物可W明显减少二甲苯致小鼠耳肿及角叉菜胶所致 小鼠足巧肿；款冬花乙醇提取物能明显减少藍麻油、番泻叶所致小鼠腹泻，降低水浸应激溃 瘍、盐酸所致溃瘍及吗I噪美辛-乙醇所致溃瘍。款冬花提取物1，2-di-(3'，4'-dihy化oxyc innamo^)-巧chopenta-3-ol，山奈酪和搬皮素对小鼠肺癌细胞LA795的增值均显示出一 定的抑制作用，其中搬皮素对肺癌细胞LA795的抑制作用最显著。有文献表明，搬皮素亦可 抑制肺腺癌细胞A549细胞的增长，并使其调亡。搬皮素对其他肿瘤也显示出较强的抑制作 用。
[0004] 破骨细胞是具有蚀骨功能的细胞，其形态多样，通常呈油煎蛋状，长条形等，并可 见到伪足，较一般细胞大，多含有几个至几十个细胞核。破骨细胞与成骨细胞在骨的新陈代 谢中起着主要的作用，两者间靠未知的机理维持着动态平衡。当破骨细胞活性增强时，则W 骨吸收为主，有可能发生W骨吸收为主要特征的疾病如牙周炎，骨质疏松症等疾病；当破骨 细胞活性受到抑制时也就是成骨细胞活性增强时，则W骨形成为主，有可能发生W骨过量 形成为主的疾病如石骨症等疾病。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥的款冬花中分离得到的一种具有治疗骨破坏性 疾病作用的二祗类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007]具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)将干燥的款冬花粉碎， 用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱 和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步骤（a) 中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用75%乙醇洗脱10 个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤化）中75% 乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲 烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体 积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分 2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱， 收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为85 %。
[0012] 一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
[0015]本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】 阳〇1引图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。本发明所使用的不同浓 度的乙醇均为体积百分浓度。干燥的款冬花购于安徽毫州中药材市场，经鉴定确认为菊科 款冬属植物款冬灯ussilagofarfaruL.)的干燥花蕾。
[0023] 制备方法：（a)将干燥的款冬花（8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（2化X3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸0LX3次）、乙酸乙醋0LX3次）和水饱 和的正下醇0LX3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（355g)和正下醇萃 取物；化）步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱 体积，再用75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物 浸膏（136g) ;(c)步骤化）中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8 个柱体积）、55:1 (8个柱体积）、30:1化个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和1:1巧个柱体积） 的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4 (31g)用正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为20:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和10:U6个柱体积）的二氯 甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (llg)用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（IH68mg)。
[0024]结构确证出R-ESIMS显示[M+Na]+为m/z411. 1102,结合核磁特征可得分子式为 C20H2A，不饱和度为11。核磁共振氨谱数据(卵m，DMS0-de，500MHz) 29,山J= 3. 5)，H-2 (3. 52,m)，H-3 (2. 35,ddd，J= 15. 0, 5. 0,1. 5)，H-3 (1. 83,ddd，J= 15. 5,12. 5， 2. 5)，H-4(2. 60,dd，J= 12. 5,5. 0)，H-6(l. 28,ddd，J= 11. 0,3. 0，1. 0)，H-6(l. 58,m)， H-7 (2. 05,m)，H-7 (1. 61，m)，H-8 (2. 59,m)，H-12 化 79,s)，H-14 化.28,m)，H-15 (7. 39,t，J =1.5)，H-16(7. 26，m)，H-19(4. 13，d，J= 8. 5)，H-19(4. 18，dd，J= 8. 5,2. 0)，H-20(1. 17， s)，2-OH巧.42,s);核磁共振碳谱数据δc(卵m，DMSO-de，150MHz) :55. 6 (CH，1-C)，58. 1 (CH， 2-C)，19. 1 (細2, 3-C)，35. 2 (CH，4-C)，46. 7 (C，5-C)，20. 6 (細2, 6-C)，15. 9 (細2, 7-C)， 42. 7(CH，8-C)，44. 8(C，9-C)，72. 9(C，10-C)，212. 4(C，11-C)，84. 7(CH，12-C)，125. 2(C， 13-C)，107. 8(CH，14-C)，143. 7(CH，15-C)，138. 1(CH，16-C)，172. 4(C，17-C)，174.6 (C， 18-0,69. 8(CH2，19-C)，20. 2(CH3,20-C);碳原子标记参见图1。IR光谱表明该化合物含有 径基（3472cm1)，丫-和δ-内醋（1763和1734cm1)和巧喃环（879cm1)基团。1?NMR谱 显示有20个信号，含有一个甲基，四个亚甲基（一个含氧亚甲基），八个次甲基（Ξ个含氧 次甲基，Ξ个締控碳）和屯个季碳（Ξ个幾基碳，一个締控碳，一个含氧季碳）。核磁共振数 据表明该化合物含有环氧基（δ册.29,δ巧5. 6，CH-1和5C72. 9，C-10)，叔甲基（δ化.17，S，δC20. 2,CH3-2O)W及巧喃环（δ册.28,H-14 ;δH7. 39,H-15 ;δH7. 26,H-16)。通过对 上述数据分析可知该化合物为二祗类化合物。此外，从氨谱和碳谱数据可得知该化合物含 有一个 12, 17