本发明涉及一种丹参组织培养过程中丛芽壮苗的培养工艺。
背景技术：
丹参(salviamiltiorrhizabunge)，唇形科鼠尾草属多年生草本植物，为我国传统药材，又名大红袍，血参根，紫丹参等。春、秋二季采挖，全国大部分地区都有分布。具有活血祛瘀，消炎止痛、扩张冠状动脉、改善心肌缺血状况、降低血压、安神静心、降血糖和抗菌等功效；对月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠，肝脾肿大，心绞痛等病症有一定的疗效。其活性成分主要有两大类：脂溶性二萜类化合物和二为水溶性的多聚酚酸类成分。
近年来丹参的市场需求量日益增加，而传统的种子繁殖和分根繁殖繁殖方式来种植丹参，丹参产量较低，品质退化。因此现有的丹参繁殖方式已远远不能满足人们的要求。而近年来兴起的植物组织培养技术，不仅可以批量培育丹参苗，且可以保持母株的优良性状。丹参植物组织培养技术是指从丹参植物体分离出符合需要的组织、器官、细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整植株。
随着丹参组培技术的深入研究，为达到最好的成苗效果，优化丹参组织培养过程中丛芽壮苗培养条件具有重要意义。
技术实现要素：
针对上述存在的问题，本发明旨在提供丹参组织培养过程中丛芽壮苗的培养工艺，该工艺主要对丹参丛生苗培养过程中的培养基进成分进行优化改进，不仅可使丹参丛芽长成粗壮的丹参苗，长势良好，生长速度快，而且通常与其他激素配用，才会有利于形成壮苗。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
丹参组织培养过程中丛芽壮苗的培养工艺，包括以下步骤：
1)培养基的配制
a、激素母液配制：称取6-ba0.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用纯水定容至100ml，即为浓度为1.0mg/ml的6-ba母液；称取ga30.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用纯水定容至100ml，即为浓度为1.0mg/ml的ga3母液；
b、激素抽滤灭菌：将滤膜放进抽滤头，高压灭菌，带进超净台，将6-ba、ga3抽滤灭菌，备用；
c、配制培养基基本成分：ms+30g/l蔗糖+5.26g/l琼脂，ph5.8；高压灭菌；带入超净台备用；
d、添加激素：在超净台上用无菌的移液抢吸取6-ba加入到基本培养基里，使其浓度为1.0mg/l，换取枪头继续吸取ga3入到基本培养基里，使其浓度为0.2mg/l，混匀；
e、分装：将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中，每瓶30～40ml，成分为：ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lga3+30g/l蔗糖+5.26g/l琼脂，ph5.8；
2)丛生芽的选择；
3)丛生芽的处理：采用无菌处理法进行处理；
4)丛生芽的接种；
5)丛生芽的培养：接种后的丛芽放置于组培室的组培架上进行丛芽的诱导，培养条件：培养温度27±0.5℃，光照时间12h，光强3000lx，t5植物培养灯管。
作为优选，所述步骤(2)“丛生芽的选择”是指愈伤置于继代培养基诱导丛生芽1个月后，选择无污染，生长良好的的丛生芽带入超净台备用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口处。
作为优选，所述步骤(3)“丛生芽的处理”是用无菌的镊子将生长良好的丛生芽镊起，置于无菌的接种盘上，用无菌的剪刀减去底部黑色或褐色的部分，用剪刀和镊子将丛芽分开，备用。
作为优选，所述步骤(4)“丛生芽的接种”用无菌的镊子将丛芽镊起，插入到所述e步骤的固体培养基上。
本发明的有益效果是：本发明添加在一定含量6-ba的基础上，添加少量的ga3，可使丹参丛芽长成粗壮的丹参苗，长势良好，生长速度快。ga3作为生长促进剂，通常与其他激素配用，才会有利于形成壮苗，而单用或者用量过大会产生植株细长、瘦弱等副作用。
具体实施方式
为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。
实施例：丹参组织培养过程中丛芽壮苗的培养工艺，包括以下步骤：
1)培养基的配制
a、激素母液配制：称取6-ba0.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用纯水定容至100ml，即为浓度为1.0mg/ml的6-ba母液；称取ga30.1g，用5ml1mnaoh引溶，再用纯水定容至100ml，即为浓度为1.0mg/ml的ga3母液；
b、激素抽滤灭菌：将滤膜放进抽滤头，高压灭菌，带进超净台，将6-ba、ga3抽滤灭菌，备用；
c、配制培养基基本成分：ms+30g/l蔗糖+5.26g/l琼脂，ph5.8；高压灭菌；带入超净台备用；
d、添加激素：在超净台上用无菌的移液抢吸取6-ba加入到基本培养基里，使其浓度为1.0mg/l，换取枪头继续吸取ga3入到基本培养基里，使其浓度为0.2mg/l，混匀；
e、分装：将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中，每瓶30～40ml，成分为：ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lga3+30g/l蔗糖+5.26g/l琼脂，ph5.8；
2)丛生芽的选择：愈伤置于继代培养基诱导丛生芽1个月后，选择无污染，生长良好的的丛生芽带入超净台备用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口处；
3)丛生芽的处理：用无菌的镊子将生长良好的丛生芽镊起，置于无菌的接种盘上，用无菌的剪刀减去底部黑色或褐色的部分。用剪刀和镊子将丛芽分开，备用；
4)丛生芽的接种：用无菌的镊子将丛芽镊起，插入到ms固体培养基上，培养基成分为ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lga3+30g/l蔗糖+5.26g/l琼脂，ph5.8；
5)丛生芽的培养：接种后的丛芽放置于组培室的组培架上进行丛芽的诱导，培养条件：培养温度27±0.5℃，光照时间12h，光强3000lx，t5植物培养灯管。
6-ba作为一种使用广泛的植物生长调节剂，具有多种生理作用，丹参丛芽壮苗是利用其促分化、打破顶端优势，促进植物侧芽生长、促进或抑制叶的伸长生长等作用；而ga3具有加速植物茎的伸长的功能。因此，当单用或者过量使用ga3时，植物侧芽还未长出时，茎部已经快速长高，从而产生的植株细长、瘦弱。而当适当浓度的6-ba与ga3配合使用时，6-ba促分化、打破顶端优势，促进侧芽生长的功能可以与ga3加速植物茎部伸长生长的功能相互补，且加入少量的ga3，可以加快植物伸长生长，缩短实验周期，在短时间内可以达到丛芽壮苗的效果。
在具体实验中本发明以无菌的丹参丛芽为实验材料，以ms为基本培养基，首先单独使用6-ba，30天后比较不同浓度梯度下丛芽生长情况。结果发现低浓度的6-ba丛芽生长速度慢，且部分丛芽从不能形成完整植株，而浓度过高时，部分丛芽出现黄褐色褐色，不能形成整株丹参苗。而浓度在1.0mg/l时，丹参茎部粗壮，叶片为绿色，长势旺盛。
表1：不同浓度6-ba对丹参丛芽壮苗生长的影响
为达到更好的效果，ms培养基添加1.0mg/l6-ba的基础上，添加了少量的ga3，并通过实验来确定ga3的最佳使用浓度。结果表明，低浓度的ga3有利于壮苗，浓度在0.2mg/l时效果最好，丹参成苗率为100％，且生长旺盛，茎部粗壮，浓度较高时，植株长势纤弱，茎部细长。
表2：不同浓度激素组合对丹参丛芽壮苗生长的影响
表3为本发明丹参丛芽壮苗培养结果
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。