专利名称：植物组织培养生产驱蚊草的技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种通过细胞工程技术快速繁殖香草植物驱蚊草的方法，具体讲是以植物细胞工程技术为手段，通过在一定培养基上离体培养驱蚊草鲜嫩叶片等幼嫩组织作为外植体，通过愈伤组织诱导、分化、继代、生根等环节，获得大量再生驱蚊草苗的方法。本发明属于生物农业技术领域。
背景技术：
驱蚊草(Cymbopogon citrates)是澳大利亚植物学家迪克经十多年通过生物工程技术，改变天竺葵植物的染色体结构，从而获得具有新的遗传结构的芳香类天竺属多年生观叶植物。该植物兼具澳洲天竺葵独特的释放功能和另一类植物中内含的香茅醛物质，它生长所散发的香茅醛气体不仅芳香益人，还具有净化室内空气、消除有害气体等功效，而且是蚊虫的克星，尤其在炎热的夏季，温度越高，散发的香味越浓，驱蚊效果就越好。驱蚊草香味还具有治疗疾病和预防保健的功能，能增强人的免疫力和体力，有效地预防疾病。另外，驱蚊草散发柠檬香味，吸收二氧化碳，释放氧气，改善空气质量，让人生活在香氛里，却悄悄驱蚊，且不费一分钱！不论是家庭、酒店、办公室、宾馆、养殖场地等。必然受到人们普遍欢迎！蚊子是为人类的天敌，驱之不尽，灭之不绝，是传染疾病的罪魁祸首，可传染肝炎，疟疾，流感等多种疾病，实属一大虫害。几千年来，人们想尽各种办法灭蚊驱蚊，从传统的燃烧艾蒿到现代的蚊香、灭蚊剂、灭蚊灯、纱窗等，均不能有效地驱蚊、灭蚊，而且蚊香、灭蚊剂等灭蚊药品均对人体有一定的毒副作用，容易导致呼吸道感染等多种疾病，少年儿童尤其不宜使用。纱窗一是不能有效的阻止蚊子入侵(尤其是幼蚊)，二是蚊子在室内可快速地繁殖，人们常常被少量蚊子弄得彻夜难眠苦不堪言，有儿童的家庭更是对蚊子深感痛绝、束手无策。可见，既有良好的驱蚊效果，又对人体无害的驱蚊香市场前景多么广阔。
驱蚊草一般是用无性繁殖方法繁殖，因为它开花不育，不能结实。用植物非试管快繁技术只取驱蚊草的一叶一芽或一枝作为离体材料，插后约1个月生根，一年可繁殖5-8代。但是驱蚊草是改变了天竺葵植物的染色体结构从而获得的具有新的遗传结构的芳香类天竺属多年生观叶植物，长期采用扦插方式繁殖，品种易退化。运用细胞工程手段，通过植物组织培养方法快速繁殖驱蚊草，固定品种优势，保持品种特异性，实践证明是可行的。利用驱蚊草在合适的培养基上进行离体繁殖，可加快品种繁殖速度，扩大种源生产，保持优良品种的性状，用较小空间，较少个体和较少时间可获得大量再生无毒苗。总之，植物试管快繁技术打破了传统育苗的季节限制；打破国外进口种子的一次性限制的垄断，它投资省、见效快、利润高、简单易操作、育苗速度快。这种繁殖方式为驱蚊草的产业化发展开拓了一条有效途径，其社会效益和经济效益是巨大的。
我们经过一年多的时间，系统地研究了植物组织培养技术应用到驱蚊草苗生产的理论、工艺及可行性，包括材料选择、外植体诱导、高频再生和定植等过程，完成了实验室研究，使下一步产业化更具有实际意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高植物组织培养驱蚊草苗生产率，使其达到产业化水平。本项实验经一年多研究，根据植物叶片再生原理，以叶片为外植体，建立高频稳定再生体系。为实现本发明目的，采用以下技术方案A外植体的选择消毒选用驱蚊草鲜嫩叶片等幼嫩组织作为外植体，用自来水冲洗干净，在无菌操作台上用法75％酒精消毒30秒，再用1～5％的次氯酸钠消毒10～15分钟，最后用无菌水冲洗4～6次备用。
B外植体接种将消毒后备用的外植体切成1平方厘米大小，接种在MS+6-BA0.5mg/L+2，4-D1.5mg/L+NAA1.0mg/L愈伤组织诱导培养基上，接种瓶内每瓶平放3～5片，叶面向上，在培养室内暗培养，保持温度24±2℃，20天后，叶片伤口发生愈伤组织。
C驱蚊草组培苗的分化当愈伤组织达到要求数量后，转接到MS+KT1.0～2.0mg/L+NAA0.05mg/L的上，25天后可得到大量分化的组培苗。
D驱蚊草组培苗的继代将长至2～3厘米高苗的转入生根培养基，愈伤组织继续接种在新配制的分化培养基上，15～20天转接一代，以保持高速度递增。
E生根培养以1/2MS+NAA0.5mg/L为培养基，对组培苗进行生根培养。
F驱蚊草再生植株生根培养后可进行炼苗，炼苗以椰糠∶泥炭土∶珍珠岩＝2∶1.5∶1.0为基质。
本发明提出的驱蚊草植株组织培养技术，利用驱蚊草鲜嫩叶片等幼嫩组织为外植体，使得外植体取材容易，数量大，并且操作简单，本培养技术可形成小植株，成活率高，可批量生产。
下面结合实施例对本发明进一步详述，我们利用驱蚊草叶片作为外植体，这是因为消毒比较容易，数量大，相对茎尖取材容易。选用驱蚊草鲜嫩叶片等幼嫩组织作为外植体，用自来水冲洗干净，在无菌操作台上用75％的酒精消毒30秒，再用1～5％的次氯酸钠消毒10～15分钟，最后用无菌水冲洗4～6次备用。将消毒后备用的外植体切成1厘米大小，接种在MS+6BA0.5mg/L+2，4D1.5mg/L+NAA1.0mg/L愈伤组织诱导培养基上，接种瓶内每瓶平放3-5片，叶面向上，在培养室内暗培养，保持温度24±2℃，约20天后，叶片伤口发生愈伤组织。当愈伤组织达到要求大小后，转接到MS+KT1.0～2.0mg/L+NAA0.05mg/L的上，约25天后，分化出苗。然后转接到新配制的分化培养基上，约20天后，分化出大量的组培苗。一般15～20天转接一代，以保持高速度递增。将高达3厘米左右的苗转入1/2MS+NAA0.5mg/L生根培养基上，对组培苗进行生根培养。生根培养后10～15天可进行炼苗，基质以排水性、通透性为第一考虑，其次是考虑盆土轻便卫生，方便携带和摆放。故以椰糠∶泥炭土∶珍珠岩＝2∶1.5∶1.0配方为介质，起到物美价廉，携带、摆放都方便的效果。
实施例一剪取驱蚊草嫩叶20片，先用自来水冲洗干净，然后用无菌水浸泡10分钟，送入接种室放在超净工作台备用。
将洗净的叶片放入无菌瓶，用75％酒精消毒30秒，再用5％的次氯酸钠浸泡并不断振荡，注意叶片不能浮出次氯酸钠表面，15分钟后，将次氯酸钠倒出，并即时倒入无菌水，振荡约2分钟倒出无菌水，同时倒入新的无菌水，如此循环5次。
将经过消毒的叶片取出，放入经过消毒的滤纸吸干叶片表面水珠，然后用消毒过的镊子、刀子将叶片切成1厘米的正方形小块，一共接种98瓶，进行暗培养。1周后观察污染情况，细菌污染3瓶，霉菌污染5瓶，污染率为8.16％，90瓶继续暗培养。20天检查愈伤组织发生情况，结果90瓶都产生了愈伤组织，愈伤组织发生率为100％。愈伤组织转接到分化培养基上，25天分化出苗，再转入到新配制的分化培养基上，20天左右分化出大量再生植株。将2～3高的苗转入生根培养基上，10天后全部生根，并开始炼苗，形成工厂化生产。
实施例二剪取驱蚊草嫩叶20片，先用自来水冲洗干净，送入接种室放在超净工作台备用。
将洗净的叶片放入无菌瓶，用75％酒精消毒30秒，再用0.1％升汞浸泡并不断振荡，注意叶片不能浮出升汞表面，10分钟后，将升汞溶液倒出，并即时倒入无菌水，振荡约2分钟倒出无菌水，同时倒入新的无菌水，如此循环5次。
将经过消毒的叶片取出，放入经过消毒的滤纸吸干叶片表面水珠，然后用消毒过的镊子、刀子将叶片切成1厘米的正方形小块，一共接种95瓶，进行暗培养。1周后观察污染情况，细菌污染8瓶，霉菌污染10瓶，污染率为在18.94％，77瓶继续暗培养。30天检查愈伤组织发生情况，结果部分外植体变褐死亡，50瓶产生愈伤组织，愈伤组织发生率为64.9％。愈伤组织转接到分化培养基上，30天分化出苗。再转入到新配制的分化培养基上，20天分化出大量再生植株。将2～3高的苗转入生根培养基上，10天后全部生根，并可形成规模化育苗生产。
权利要求
一种香草植物驱蚊草的离体组织培养技术，其特征在于该方法包括在MS培养基上进行叶片等外植体培养，并在MS培养基上进行分化、继代和生根培养，获得驱蚊草的再生植株。所述驱蚊草离体组织培养技术是按以下步骤和方法进行A外植体的选择消毒选用驱蚊草鲜嫩叶片等幼嫩组织作为外植体，用自来水冲洗干净，在无菌操作台上用75％酒精消毒30秒，再用1～5％的次氯酸钠消毒10～15分钟，最后用无菌水冲洗4～6次备用。B外植体接种将消毒后备用的外植体切成1平方厘米大小，接种在MS+6-BA 0.5mg/L+2，4-D1.5mg/L+NAA 1.0mg/L愈伤组织诱导培养基上，接种瓶内每瓶平放3～5片，叶面向上，在培养室内暗培养，保持温度24±2℃，20天后，叶片伤口发生愈伤组织。C驱蚊草组培苗的分化当愈伤组织达到要求数量后，转接到MS+KT 1.0～2.0mg/L+NAA0.05mg/L的上，25天后可得到大量分化的组培苗。D驱蚊草组培苗的继代将长至2～3厘米高苗的转入生根培养基，愈伤组织继续接种在新配制的分化培养基上，15～20天转接一代，以保持高速度递增。E生根培养以1/2 MS+NAA0.5mg/L为培养基，对组培苗进行生根培养。F驱蚊草再生植株生根培养后可进行炼苗，炼苗以椰糠∶泥炭土∶珍珠岩＝2∶1.5∶1.0为基质。
全文摘要
本发明提供了一种采用植物组织培养生产驱蚊草苗的方法。该方法是在MS培养基上培养驱蚊草鲜嫩叶片等幼嫩组织，先接种在MS+6－BA0.5mg/L+2，4－D 1.5mg/L+NAA 1.0mg/L培养基上，愈伤组织诱导率达100％；然后转移至MS+KT 1.0～2.0mg/L+NAA 0.05mg/L分化培养基上，20天可分化出苗；将高达2～3厘米的苗转入生根培养基，10天左右生根，生根率达100％。本发明方法具有稳定好、操作简便、繁殖速度快、生产成本低、达到产业化水平等优点。
文档编号A01H4/00GK1739340SQ200410046690
公开日2006年3月1日 申请日期2004年8月24日 优先权日2004年8月24日
发明者易自力, 黄丽芳, 蒋建雄, 蔡能 申请人:易自力, 黄丽芳, 蔡能