专利名称：淫羊藿和丹参的活性提取组合物及其医药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种淫羊藿和丹参的活性提取组合物及其医药用途。该提取组合物分别为淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸。该组合物可用于制成治疗骨质疏松症和冠心病的药物。
背景技术：
骨质疏松症是一种以骨量减少、骨组织显微结构异常和骨折危险性增加为特征的一类疾病，常见于老年人特别是绝经后妇女，其发病率高，危害大。据统计，1997年中国骨质疏松症的患者人数为8390万人，发病率占全国总人数的6.6％，到2010年约为1140万人，占8.2％，每年因骨质疏松症而并发骨折人数的百分率将在两位数以上。目前，对该病的治疗西药主要有雌激素、钙剂、降钙素、双磷酸盐及氟制剂等，这些药物常常价格昂贵，长期使用疗效不满意，副作用大。因此，人们已逐渐把目光转向中医药在治疗骨质疏松方面的发掘与研究上。
骨质疏松症属于祖国医学“骨痹”“骨痿”等范畴，系因年老体弱，脏腑虚衰，或精血不足，耗损正气，气血两虚，不能濡养筋骨而酿成本病。故肾虚与精血不足为本病之特点。本病的中药治疗重在整体调节，主要以补肾益精药为主，并随症辅以活血化瘀、益气养血、强筋壮骨等药，作用持久、副反应小，可长期使用。传统中成药如骨松宝片、骨松康合剂、骨愈灵胶囊、六味壮骨颗粒、肾骨散、仙灵骨葆等，这些药剂中有些剂型不便携带或不便服用，有些则药味多，有效成分含量少，质控标准低，在大量临床病例治疗中难以取得满意的疗效。现代中药如续断总皂苷(即将上市)、淫羊藿总黄酮(正在临床)等有效成分明确、药效确切、质量可控，但作用单一，未能体现中医整体调节的理念，因此在传统中医药理论的基础上，运用现代医药理论，开发一种有效成分明确，疗效确切，质量可控的骨质疏松症用药具有重要意义。
冠心病(coronary heart disease，CHD)是冠状动脉性心脏病的简称。是一种由于冠状动脉固定性(动脉粥样化硬化)或动力性(血管痉挛)狭窄或阻塞，发生冠状循环障碍，引起心肌氧供需之间失衡而导致心肌缺血缺氧或坏死的一种心脏病，亦称缺血性心脏病。冠心病由于其发病率高，死亡率高，严重危害着人类的身体健康，从而被称作是“人类的第一杀手”。
治疗冠心病的西药主要有三类硝酸盐类、钙离子拮抗剂类及β受体阻断剂类。但常期服用会产生耐药性，撤药综合症，肝、肾功能损伤及消化道功能紊乱等副作用。在这方面，祖国医药却有独特的优势。中医学认为胸痹心痛证(冠心病、心效痛)是由于瘀阻脉络、脑窍，致气血不通，气虚是促成血瘀的条件，故气虚血瘀是冠心病的主要病机。因而中医治疗冠心病心绞痛常施用活血通络、补气化瘀之药剂。常用中成药有冠心苏合丸、苏冰滴丸、速效救心丸、复方丹参片、丹参滴丸、冠心丹参片、冠心片、丹参片、血塞通制剂、银杏叶制剂等，这类药具有活血化瘀、宣阳通痹、开胸祛痰之效，疗效确切，且长期服用无副作用，为西药所不能及。但这些药剂中有效成分明确，质量稳定，疗效确切，作用持久，副作用少的品种尚不多，有很多亦存在工艺不合理，质量标准水平低，在大量临床病例治疗中难以取得满意的疗效。
发明内容
本发明的目的在于克服上述西药现有技术及现有中成药的不足，在传统中医药理论的基础上，运用现代医药理论，开发一种组方精简，有效成分明确，质量可控，安全有效的淫羊藿和丹参的活性提取组合物。
本发明的另一目的在于该组合物可用于制成治疗骨质疏松症和冠心病的药中的应用。
本发明的目的可以通过以下措施来达到本发明是由淫羊藿和丹参的活性提取物组成。确切地说是由淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组成，其重量比值为1∶0.05～50，其最佳重量比值为1∶0.1～20。该活性提取组合物的原药材为淫羊藿和丹参，其重量比值为1∶0.1～10，其最佳重量比值为1∶0.2～5。
淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimedium wushannense T.S.Ying或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai.的干燥地上部分。具补肾阳，强筋骨，祛风湿之功效。临床用阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛等症。现代研究表明，淫羊藿总黄酮是淫羊藿主要有效成分，在心血管系统、中枢神经系统、血液系统、免疫系统、抗炎、抗骨质疏松、抗衰老、抗肿瘤等方面具有重要的药理活性。丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根。具祛瘀止痛，活血通经，清心除烦之功效。丹参酚酸类成分是丹参中主要活性成分，具有止痛抗炎、抗氧化、改善微循环、抗血小板聚集和血栓形成的药理作用。综上，淫羊藿长于补肾壮骨，其有效成分为淫羊藿总黄酮；丹参长于活血祛瘀止痛，其主要有效成分为丹参酚酸类成分。二药合用，特别是二药的有效成分合用，可达补肾壮骨，活血化瘀止痛之功效，且该组方精简，有效成分明确，互补单味药之不足。
本发明具有补肾壮骨，活血化瘀止痛之功效，可用于制成治疗骨质疏松症及冠心病的药物。
本发明的药效学研究如下实验1.对维甲酸(Retinoic Acid，RA)致大鼠骨质疏松的防治作用雄性3月龄SD大鼠55只，随机分为空白对照组(10只)，阴性对照组(15只)，阳性对照组(15只)及活性组合物组(15只)。各药均用0.8％CMC-Na混悬液配制成相应浓度，给予大鼠灌胃。除空白组外，其余各组动物每日给予维甲酸混悬液80mg/kg造模型，同时空白对照组灌胃相应体积0.8％CMC-Na混悬液，阳性对照组给予龙牡壮骨冲剂4g/kg，给药组给予活性组合物300mg/kg。14天后停止给予维甲酸，阴性对照组改为每日灌胃相应体积0.8％CMC-Na混悬液，其余操作不变，至28天末次给药后各组动物禁食，16小时后(29天)处死大鼠，取股骨，供骨密度(BMD)测定用。用药组与空白对照组的骨密度值统计比较，采用组间t检验。结果见表1。
表1.对维甲酸所致大鼠骨密度(BMD)降低的影响(n＝10)
*P＜0.05，**P＜0.01，与阴性对照组比较维甲酸(RA)具有肝损伤作用，长期使用可引起骨钙丢失，表现为骨密度降低。骨密度是评价骨质疏松和药物疗效的重要指标，由表1可见，活性组合物每日给予大鼠灌胃可有效防止维甲酸所致骨密度降低。
实验2.对小鼠皮下血肿吸收的促进作用本实验采用给小鼠颈部皮下注射定量自身血液，造成皮下血肿模型，通过称量血肿块的重量来判断血肿的消除吸收情况，从而反映药物的活血化瘀作用。取昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重20±2g。按性别体重随机分成3组，每组10只，分别为空白对照组(0.8％CMC-Na)、阳性药对照组(复方丹参滴丸3粒/kg)、给药组(活性组合物400mg/kg)。实验前先造成自身血肿模型，即分别自眼眶取血，滴入事先放置有0.1ml CaCl2溶液(每ml含青霉素10万单位的0.1M CaCl2溶液)的小试管中至0.5ml刻度，振摇均匀，迅速用注射器抽取后自皮下给予小鼠注射，形成皮下血肿。造成模型后第二天开始给药，各药均用0.8％CMC-Na混悬液配制成相应浓度，给予小鼠灌胃。给药7天，于末次给药1小时后将小鼠颈椎脱位处死，将小鼠颈背处皮下的残留血肿块分离出来，用电子称称重，根据残留血肿块重量来反映药物活血化瘀作用，用药组与空白对照组统计比较，采用组间t检验。结果见表2。
表2.对小鼠皮下血肿吸收的影响(n＝10)
**P＜0.01，与空白对照组比较骨质疏松症常见的骨与关节疼痛症状与血瘀有着密切的关系。由表2可见，本活性组合物可显著降低小鼠实验性皮下血肿重量，效果与复方丹参滴丸相当，具有明显活血化瘀功效，对骨质疏松症的防治有很好的辅助作用。
实验1和2结果表明，淫羊藿和丹参的活性提取组合物能有效防止维甲酸所致大鼠骨密度降低，同时具有显著的活血化瘀作用，说明本品具有显著防治骨质疏松作用及改善骨质疏松症的血瘀症状，可用于制成防治骨质疏松症的药物。
实验3.对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用随机法将大鼠分组，体重180g左右，随机均分为5组，即正常组、模型组、阳性药即倍他乐克组(9mg/kg)、本组合物高(275mg/kg)、低剂量组(137.5mg/kg)，每组8只。于分组前先测定各鼠心电图，排除心电图异常者。除正常对照及模型组灌胃给予等体积的蒸馏水外，其余各组均每日灌胃给予相应剂量的药液，每日一次，连续7日，于第6日除正常对照组外，其余各组于灌胃给予药液或水的同时，一次皮下注射异丙肾上腺素30mg/kg，并于注射异丙肾上腺素24小时后测定心电图，并采血测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)水平，取心脏制备心肌匀浆，测定心肌组织内超氧化物歧化酶(SOD)活力和脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量。各组在给药前描记心电图，给予异丙肾上腺素或生理盐水24小时后，重复测定心电图，然后股动脉采血并摘取心脏制备匀浆。
心电图测定各组动物记录正常II导联心电图，测定给予异丙肾上腺素后ST段偏移数，每组出现ST段异常偏移的动物数及ST段偏移均值，作为心肌缺血程度和评价药物疗效的指标。
心肌匀浆的制备及生化指标的测定摘取心脏后迅速清除残余血液，称质量，移入冰冷生理盐水中，4℃下研磨制成10％匀浆。血清中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)水平采用全自动生化分析仪测定。心肌匀浆SOD及脂质过氧化物丙二醛(MDA)采用分光光度法测定。
统计学方法数据以均数±标准差表示，组间比较用t检验处理。
结果对急性心肌缺血大鼠心电图ST段的影响本品对急性心肌缺血大鼠的心电图ST段偏移的影响见表3。表3显示缺血模型组大鼠与正常对照组相比较，ST段偏移明显高于正常对照组(P＜0.05)；而本品高、低剂量组和倍他乐克阳性对照组均可显著降低异丙肾上腺素所致的ST段的异常升高(P＜0.05～0.01)，这3组的ST段与正常对照组相比较无显著性差异(P＞0.05)。
表3 对急性心肌缺血大鼠心电图ST段的影响(x±s，n＝8)
注与模型组比(t-检验)，*P＜0.05，**P＜0.01。
对急性心肌缺血大鼠血清LDH及CK-MB的影响本品对急性心肌缺血大鼠血清LDH及CK-MB的影响见表4。由表4可见缺血模型组大鼠血清LDH及CK-MB活性比正常组明显增高(P＜0.01～0.001)，而本品高剂量组的血清LDH及CK-MB活性明显低于缺血模型组(P＜0.05)。
表4 对急性心肌缺血大鼠血清LDH及CK-MB的影响(x±s，n＝8)
注与模型组比(t-检验)，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
对急性心肌缺血大鼠心肌组织SOD及MDA的影响本品对急性心肌缺血大鼠心肌SOD活性及MDA水平的影响见表5。由表5可见缺血模型组心肌组织SOD活性与正常组比较显著降低(P＜0.01)，MDA含量明显升高(P＜0.001)，本品高剂量组与缺血模型组相比，SOD活性增高(P＜0.05)，MDA含量则明显降低(P＜0.01)。
表5 对急性心肌缺血大鼠心肌组织SOD及MDA的影响(x±s，n＝8)
注与模型组比(t-检验)，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
讨论本实验采用异丙肾上腺素诱发大鼠急性心肌缺血模型，表现为心电图ST段异常升高，血清LDH及CK-MB活性明显增高，心肌组织MDA浓度增加，氧自由基清除剂SOD活性降低，与文献报道基本相似。本品可对抗异丙肾上腺素诱发大鼠所致心肌缺血，使ST段异常抬高程度降低，血清中LDH水平下降，对缺血心肌有保护作用。本实验结果表明，本组合物可以保护心肌组织的SOD活性，增强内源性氧自由基清除系统的功能，其减少氧自由基的作用与膜脂质生成的脂质过氧物MDA相关，说明本品可减轻氧自由基对心肌的损伤。同时实验2结果表明本品具显著的活血化瘀作用。实验2和实验3共同说明，本品具活血化瘀、保护心肌之功效，可用于制成治疗冠心病的药物。
具体实施例方式以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限限制。
实施例1淫羊藿总黄酮的制备取淫羊藿2000g，加入25倍药材重量的70％乙醇，回流提取3次，分别提取2、2、1小时，滤过，合并提取液，回收乙醇至无醇，并浓缩成1g生药/ml的水溶液，石油醚萃取，水层经乙酸乙酯萃取3次，减压回收乙酸乙酯至近干，干燥，粉碎，过55目筛，即得棕黄色淫羊藿总黄酮成品，重量为20.5g，淫羊藿总黄酮含量为53.3％。
实施例2丹参总酚酸的制备取丹参药材粉碎成粗粉2000g，加入8倍药材重量的水，煎煮2次，分别为2、2小时，滤过，合并提取液，减压浓缩成1g生药/ml的水溶液，水液用1N HCl调pH2，经乙酸乙酯萃取3次，减压回收乙酸乙酯，干燥，粉碎，过55目筛，即得棕褐色丹参总酚酸成品，重量为27.5g，丹参总酚酸含量为62.5％。
实施例3合煎法制备淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸的混合物取淫羊藿1000g和丹参药材粗粉1000g混合，加入25倍药材重量的70％乙醇，回流提取2次，分别提取2、2小时，滤过，合并醇提取液，回收乙醇至无醇，并浓缩成1g生药/ml的水溶液；药渣加入20倍药材重量的水，煎煮2次，分别为2、2小时，滤过，合并水提取液，减压浓缩成1g生药/ml的水溶液。合并醇及水提浓缩液，石油醚萃取，水层经乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃后水层用1N HCl调pH2，再经乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，干燥，粉碎，过55目筛，即得棕色淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸的混合物成品，重量为36.8g，淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸含量总和为56.8％。
实施例4合煎法制备淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸的混合物取淫羊藿1000g和丹参药材粗粉100g混合，加入25倍药材重量的70％乙醇，回流提取2次，分别提取2、2小时，滤过，合并醇提取液，回收乙醇至无醇，并浓缩成1g生药/ml的水溶液；药渣加入20倍药材重量的水，煎煮2次，分别为2、2小时，滤过，合并水提取液，减压浓缩成1g生药/ml的水溶液。合并醇及水提浓缩液，石油醚萃取，水层经乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃后水层用1N HCl调pH2，再经乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，干燥，粉碎，过55目筛，即得棕色淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸的混合物成品，重量为24.5g，淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸含量总和为50.8％。
实施例5合煎法制备淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸的混合物取淫羊藿400g和丹参药材粗粉4000g混合，加入25倍药材重量的70％乙醇，回流提取2次，分别提取2、2小时，滤过，合并醇提取液，回收乙醇至无醇，并浓缩成1g生药/ml的水溶液；药渣加入20倍药材重量的水，煎煮2次，分别为2、2小时，滤过，合并水提取液，减压浓缩成1g生药/ml的水溶液。合并醇及水提浓缩液，石油醚萃取，水层经乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃后水层用1N HCl调pH2，再经乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，干燥，粉碎，过55目筛，即得棕色淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸的混合物成品，重量为76.4g，淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸含量总和为60.8％。
实施例6淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂将淫羊藿总黄酮成品1g和丹参总酚酸成品50g，加淀粉49g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例7
淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂将淫羊藿总黄酮成品1g和丹参总酚酸成品25g，加淀粉74g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例8淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂将淫羊藿总黄酮成品2g和丹参总酚酸成品20g，加淀粉78g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例9淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂将淫羊藿总黄酮成品15g和丹参总酚酸成品15g，加淀粉70g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例10淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂将淫羊藿总黄酮成品20g和丹参总酚酸成品10g，加淀粉70g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例11淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂将淫羊藿总黄酮成品20g和丹参总酚酸成品2g，加淀粉78g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例12淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂将淫羊藿总黄酮成品20g和丹参总酚酸成品1g，加淀粉79g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例13淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂按实施例3所制得的淫羊藿和丹参活性组合物25g，加淀粉75g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例14淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂按实施例4所制得的淫羊藿和丹参活性组合物25g，加淀粉75g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例15淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组合物的制剂按实施例5所制得的淫羊藿和丹参活性组合物25g，加淀粉75g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
权利要求
1.一种淫羊藿和丹参的活性提取组合物，其特征是该组合物由淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组成，其重量比值为1∶0.05～50。
2.根据权利要求1所述的淫羊藿和丹参的活性提取组合物，其特征是该组合物中淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸的重量比值为1∶0.1～20。
3.根据权利要求1所述的淫羊藿和丹参的活性提取组合物，其特征是该活性提取组合物的原药材为淫羊藿和丹参，原药材重量比值为1∶0.1～10。
4.根据权利要求3所述的淫羊藿和丹参的活性提取组合物，其特征是该活性提取组合物的原药材为淫羊藿和丹参，原药材重量比值为1∶0.2～5。
5.权利要求1～4任何一项限定的淫羊藿和丹参的活性提取组合物在制备治疗骨质疏松症的药中的应用。
6.权利要求1～4任何一项限定的淫羊藿和丹参的活性提取组合物在制备治疗冠心病的药中的应用。
全文摘要
本发明在传统中医药理论的基础上，运用现代医药理论，开发一种组方精简，有效成分明确，质量可控，安全有效的淫羊藿和丹参的活性提取组合物及其在制成治疗骨质疏松症及冠心病的药中的应用。该活性提取组合物是由淫羊藿总黄酮和丹参总酚酸组成，其重量比值为1∶0.05～50；该活性提取组合物的原药材为淫羊藿和丹参，其重量比值为1∶0.1～10。
文档编号A61P19/00GK1739606SQ200510094059
公开日2006年3月1日 申请日期2005年8月26日 优先权日2005年8月26日
发明者韦英杰, 舒斌, 石金城 申请人:江苏省药物研究所