丹参提取物、其制剂及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药天然药物领域，具体地说，本发明涉及丹参提取物、其制剂及用 途。
【背景技术】
[0002] 中药丹参来源于唇形科鼠尾草属植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥 根及根茎。具有巧癒止痛、活血通经、清必除烦的功效，主要用于必脑血管疾病的治疗。研 究表明，其中的活性成分具有抗血栓、抗血小板凝集、抗氧化、抗肿瘤等药理活性。
[0003] 丹参的活性成分可W分为水溶性和脂溶性两部分，其中水溶性部分W酪酸类化合 物为主；脂溶性活性成分W二聰菲酿类化合物为主。丹参水溶性成分的分离纯化工艺虽起 步较晚，但发展迅速。主要方法有水提醇沉法、高速逆流色谱法、C〇2超临界萃取法等。送些 方法工艺复杂，设备要求高，难W满足丹酪酸B药物开发的需求。
[0004] 中国专利化200810041104. 1，采用了生物转化步骤，虽然可W将丹酪酸B纯度提 高至99% W上，但工艺过程繁琐，同时纯化中用到的反相树脂价格昂贵，不利于工业化生 产。本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中得到含有高纯度丹酪酸B的丹参提取 物，步骤繁琐的缺陷，开发一种工艺简单、稳定，有利于实现工业化生产，制备成本低的含有 高纯度丹酪酸B的丹参提取物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种丹参提取物其制剂及用途。
[0006] 本发明的第一方面，提供了一种丹参提取物，所述丹参提取物中含有丹酪酸B和 杂质，所述杂质的HPLC含量> 0,并且所述杂质包括HPLC相对保留时间约为1. 51的杂质 I，所述杂质I的HPLC含量《0. 5%;优选地，所述杂质I的HPLC含量《0. 10%;更优选地， 所述杂质I的HPLC含量《0. 05% ;最优选地，所述杂质I的HPLC含量《0.0 l %。
[0007] 在另一优选例中，所述杂质的HPLC含量《1. 0%。
[0008] 在另一优选例中，所述杂质I的HPLC含量大于或等于0。
[0009] 在另一优选例中，所述丹酪酸B的HPLC含量> 98. 0%;优选地，> 99. 0%;更优选 地> 99. 5%。
[0010] 在另一优选例中，所述杂质还包括HPLC相对保留时间约为1. 48的杂质II，所述杂 质II的HPLC含量《0. 25%;优选地，所述杂质II的HPLC含量《0. 1 %;更优选地，所述杂 质II的HPLC含量《0.05% ;更优选地，所述杂质II的HPLC含量《0.01%。
[0011] 在另一优选例中，所述杂质还包括HPLC相对保留时间约为0. 55的杂质III，所述 杂质III的HPLC含量>0并且《0. 15%，优选地，所述杂质III的HPLC含量《0. 1%，更优 选地，所述杂质III的HPLC含量《0. 05%;更优选地，所述杂质III的HPLC含量《0.0 l %。
[0012] 在另一优选例中，所述杂质还包括HPLC相对保留时间约为0. 70的杂质IV，所述 杂质IV的HPLC含量> 0并且《0. 2 %，优选地，所述杂质IV的HPLC含量《0. 1 %;更优选 地，所述杂质IV的HPLC含量《0. 05% ;更优选地，所述杂质IV的HPLC含量《0.0 l %。
[0013] 在另一优选例中，所述杂质还包括HPLC相对保留时间约为0. 26的杂质V，所述杂 质V的HPLC含量> 0并且《0. 3%，优选地，所述杂质V的HPLC含量《0. 2% ;更优选地， 所述杂质V的HPLC含量《0. 1 % ;更优选地，所述杂质V的HPLC含量《0. 05%。
[0014] 在另一优选例中，所述杂质还包括HPLC相对保留时间约为1. 1的杂质VI，所述杂 质VI的HPLC含量> 0并且《0. 2%，优选地，所述杂质VI的HPLC含量《0. 1% ;更优选 地，所述杂质V的HPLC含量《0. 05% ;更优选地，所述杂质V的HPLC含量《0.0 l %。
[0015] 在另一优选例中，所述HPLC的检测条件为：
[001 引 Welchrom@ C18 柱（4. 6巧50mm，5 U m);流动相 A，0. 5% (v/v)甲酸溶液；流动相 B，0. 5% (v/v)甲酸溶液-己腊巧0:50);柱温35°C ;流速Iml/min ;进样量=IOiil ;检测波 长286nm ;梯度洗脱，流动相梯度比例如下：
[0017] 0-30min，流动相 A:流动相 B = 59:41 ;
[001 引 30-45min，流动相 A:59 - 10%，流动相 B ;41 - 90 ;
[0019] 45-50min，流动相 A:10 - 59%，流动相 B;90 - 41 ;
[0020] 5〇-55min,流动相 A:流动相 B = 59:41。
[0021] 本发明的第二方面，提供了如本发明第一方面所述的丹参提取物的用途，其特征 在于，所述丹参提取物用于制备药物，所述药物用于治疗或预防必脑血管疾病。
[0022] 在另一优选例中，所述必脑血管疾病包括：
[002引 （1)急性脑缺血；和/或
[0024] 似脑部缺血性坏死。
[0025] 在另一优选例中，本发明第二方面所述的丹参提取物的用途，其中所述丹参提取 物通过如下方法制备：
[002引 （1)巧[|备丹参提取物中间体
[0027] 丹参药材的提取液上第一树脂层析柱，洗脱液经己酸己醋萃取后，去除己酸己醋 得丹参提取物中间体作为下一步中的上柱样品，所述丹参提取物中间体中丹酪酸BHPLC含 量为10% W上，优选地为10% -70% ;
[0028] (2)纯化制得丹参提取物
[0029] (2. 1)将上柱样品加水溶解，上第二树脂层析柱，水洗脱，收集洗脱液，洗脱液经己 酸己醋萃取后去除己酸己醋；
[0030] (2. 2)重复步骤化1)至少一次，得到所述丹参提取物，所述丹参提取物中丹酪酸 BHPLC含量为95% W上，优选地为98% -100%。
[0031] 在另一优选例中，所述第一树脂层析柱为大孔吸附树脂层析柱。
[0032] 在另一优选例中，所述第二树脂层析柱为微球树脂层析柱、反相树脂层析柱或大 孔吸附树脂层析柱。
[0033] 在另一优选例中，所述步骤（1)中，所述所述丹参药材的提取液的制备方法包括：
[0034] 将丹参干药材粉碎，加入3-10倍水浸泡0. 5-地，于20-9(TC提取0. 5-化，过滤药渣 取水提液，药渣重复提取1-4次，合并水提液，得所述丹参药材的提取液。
[0035] 在另一优选例中，所述步骤（1)中，上柱流速为0. 5-她VA，然后用0. 5-2BV水洗 脱，再用4-12BV的5 % -60 %的己醇洗脱，洗脱流速0. 5-6BVA，合并醇洗脱部分减压浓缩至 无醇味。
[0036] 在另一优选例中，所述步骤化1)中，取上柱样品加水溶解，W丹酪酸B计浓度 为50-300g/L，调节抑1-7,上微球树脂层析柱，用2-10BV纯水洗脱，流速0. 5-她VA，再用 1-4BV的5% -60%己醇洗脱，流速0. 5-她VA，HPLC检测各洗脱部分丹酪酸B纯度。
[0037] 在另一优选例中，所述步骤化2)中，将上一步中制得的丹酪酸B的HPLC纯度在 60%W上的样品，作为上柱样品，重复步骤（2. 1)，得到所述丹参提取物，所述丹参提取物中 丹酪酸BHPLC含量为98 % W上，优选地为99 % W上。
[0038] 在另一优选例中，制备所述丹参提取物的方法还包括步骤：
[0039] (3)将所得丹酪酸B提取物溶于水中，冷冻干燥得粉末状丹酪酸B提取物。
[0040] 本发明的第H方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本发明第一方 面所述的丹参提取物和药学上可接受的载体。
[0041] 在另一优选例中，所述药物组合物的剂型选自下组；胶囊剂、片剂、颗粒剂、混悬 剂、微囊制剂、注射剂、栓剂、粉剂、喷雾剂、贴片或软膏剂。
[0042] 本发明的第四方面，提供了一种制备丹参提取物的方法，包括如下步骤：
[004引 （1)巧[|备丹参提取物中间体
[0044] 丹参药材的提取液上第一树脂层析柱，洗脱液经己酸己醋萃取后，去除己酸己醋， 得丹参提取物中间体作为下一步中的上柱样品，所述丹参提取物中间体中丹酪酸B HPLC含 量为10% W上，优选地为10% -70% ;
[0045] (2)纯化制得丹参提取物
[004引 （2. 1)将上柱样品加水溶解，上第二树脂层析柱，水洗脱，收集洗脱液，洗脱液经己 酸己醋萃取后去除己酸己醋；
[0047] (2. 2)重复步骤化1)至少一次，得到所述丹参提取物。所述丹参提取物中丹酪酸 B的HPLC含量为95% W上，优选地为98% W上。
[0048] 在另一优选例中，所述第一树脂层析柱为大孔吸附树脂层析柱。
[0049] 在另一优选例中，所述第二树脂层析柱为微球树脂层析柱、反相树脂层析柱或大 孔吸附树脂层析柱。
[0050] 在另一优选例中，所述第一树脂层析柱中的大孔吸附树脂选自下组；HPD300、 HPD400、HPD700、HPD-722、监-803、监-806、监-816、H103、AB-8。
[0051] 在另一优选例中，所述微球树脂层析柱中的微球树脂平均粒径为1-500 U m。
[0052] 在另一优选例中，所述第二树脂层析柱中的吸附树脂选自下组；HP-21、HP20SS、 乂八0-4^40-16、乂40-118(^^40-1600、微球一号、微球二号、监-803、监-816。
[0053] 在另一优选例中，所述步骤（1)中，所述丹参药材的提取液的制备方法包括：
[0054] 将丹参干药材粉碎，加入3-10倍水浸泡0. 5-地，于20-9(TC提取0. 5-化，过滤药渣 取水提液，药渣重复提取1-4次，合并水提液，得所述丹参药材的提取液。
[00巧]在另一优选例中，所述步骤（1)中，上柱流速为0. 5-她VA，然后用0. 5-2BV水洗 脱，再用4-12BV的5% -60% (v/v)的己醇洗脱，洗脱流速0. 5-6BVA，合并醇洗脱部分减压 浓缩至无醇味；优选地，在所述步骤（1)中，合并醇洗脱部分后先调节合并液中己醇浓度至 70% - 80% (v/v)，去除沉淀，然后再减压浓缩至无醇味。
[0056] 在另一优选例中，所述步骤化1)中，