专利名称：一种治疗脉管炎的白花丹参提取物、制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物，更具体地说是由白花丹参提取而成的一种白花丹参总菲醌和总酚酸组成的提取物、制备方法及其在治疗脉管炎的药物组合物方面的用途。
背景技术：
血栓闭塞性脉管炎(Thromboangitis Obliterans, TA0) 一种以中小动静脉节段性、非化脓性炎症和动脉腔内血栓形成为特征的慢性闭塞性疾病，好发于下肢，病程长，多呈缓进性并逐渐加重，常致肢体发生缺血或瘀血病损，甚者肢体溃烂脱落，是一种慢性周围血管疾病。中医则称之为“脱疽”，《黄帝内经》中《灵枢 痈疽》和汉代《华佗神医秘传》中均有论述。
白花丹参(Salviamiltiorrhiza Bunge var alba)是唇形科植物丹参(Salviamiltiorrhiza Bunge)的变型,主产于山东章丘、莱芜、泰安等丘陵地区。2002年白花丹参作为一个新品种被收入《山东省中药材标准》。《全国中草药汇编》中记载白花丹参形似丹参(也称紫丹参，2010版药典所收载)，惟花白色，有的可略带紫晕，亦以根入药，产于山东，当地有用白花丹参酒治疗血栓闭塞性脉管炎者，参见全国中草药汇编[上册]，人民卫生出版社，1975。白花丹参根用于治疗脉管炎已有80余年的历史，参见许青峰，治疗与保健药酒，1988，pll7。山东省章丘县医院从1967年开始应用白花丹参治疗TA0，自1971年10月至1975年12月应用白花丹参治疗脉管炎147例，临床治愈率27. 2%，显著好转率45. 6%，总有效率93. 2%，经过治疗，且临床分组对比观察，白花丹参的疗效高于丹参的，参见中医杂志，1976，(11) :23-24。原山东中医学院附属医院(现山东中医药大学附属医院)尚德俊教授等在治疗TAO过程中，发现I例III期I级(湿热下注型)病人，右足拇趾慢性溃疡2年9个月不愈合，给予白花丹参注射液静脉滴注15天后，患肢血运改善，溃疡愈合，参见尚德俊等，山东中医杂志，1986(2) : 14-16。CN1899371A (CN200610045270. X)提供一种白花丹参在制药领域中的应用及白花丹参药物的制备方法。白花丹参的丹参素含量是紫花丹参的两倍，该物质用于治疗心脑血管疾病及其他相关疾病，具有祛淤止痛、活血通经、清心除烦的功效。所述白花丹参药物的制备方法是①取白花丹参置入提取罐内，加入4 10倍重量份的水进行水提取，过滤得水提液；或将白花丹参超微粉碎后进行超声提取，过滤得超微提取粉；②取①工序的超微提取粉或经浓缩至相对密度为I. 0 I. 4的水提液，加入50% 90%的乙醇进行醇沉淀，过滤后用20% 40%的强碱,溶液调pH = 6. 5 8. 5,冷放后过滤,重复醇沉淀，得滤液！③将②工序的滤液浓缩至相对密度为I. 0 I. 4，加入0. 5% 2%活性炭，加热煮沸，得液体剂。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种白花丹参提取物、制备方法及其在制备治疗脉管炎药物方面的用途。本发明中的白花丹参提取物同时含有白花丹参中总菲醌和总酚酸两大类有效组分，能够充分体现白花丹参原药材对脉管炎的治疗作用。本发明还提供白花丹参提取物的药物组合物及制剂。术语说明白花丹参提取物，是由白花丹参中所含的丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I、次丹参酮等多种菲醌类以及丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草素等多种酚酸类化合物组成的混合物。本发明技术方案如下 一种治疗脉管炎的白花丹参提取物，以白花丹参的根为原料，通过溶剂提取、溶剂萃取、醇沉、柱层析纯化制备而成，同时含有白花丹参中总菲醌和总酚酸两大类有效组分，是主要含有丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I等菲醌类成分以及丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草素等酚酸类成分的混合物，其中丹参酮IIA、隐丹参酮和丹酚酸B的质量含量总和不低于60%。本发明治疗脉管炎的白花丹参提取物，是按包括下列步骤的方法制备的以白花丹参的根为原料，粉碎后，甲醇或95wt%乙醇为提取溶剂进行提取，所述溶剂量与原料的重量比为5 20 1，重复提取2 3次，合并滤液，得提取液A;原料药渣再以10^50wt%乙醇、l(T50wt%甲醇水溶液或水进行提取，得提取液B。所得提取液按以下方法处理i.提取液A减压浓缩至无乙醇或无甲醇，以水悬浮，以等体积的二氯甲烷萃取，重复萃取2 3次，得二氯甲烷萃取液和萃取后的水溶液C。其中二氯甲烷萃取液减压蒸去溶齐U，得固体残余物，再将该固体残余物进行硅胶柱层析，分别以50 I体积比和I : I体积比的石油醚-乙酸乙酯进行洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯I : I体积比的洗脱液，减压蒸去溶剂，得红色的固体物I。
ii提取液B减压浓缩，加入乙醇使乙醇含量为7(T75wt%，醇沉，弃去沉淀，滤液减压浓缩至无乙醇，将浓缩物与i中的水溶液C混合，搅拌混匀，以盐酸调pH=2 3，再以等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取2 3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸去乙酸乙酯，即得固体物II。将以上固体物I和固体物II合并，研细，混匀，即得白花丹参提取物。上述ii提取液B减压浓缩至原料洛重量的I倍为宜。根据本发明，一种治疗脉管炎的白花丹参提取物的制备方法，详细步骤如下(I)溶剂提取原料白花丹参的根经过粉碎后，以甲醇、95wt%乙醇为提取溶剂进行提取，所用溶剂量与原料的重量比为5 20 1，重复提取2 3次，合并滤液，得提取液A ;原料渣再以10^50wt%乙醇、l(T50wt%甲醇水溶液或水进行提取，得提取液B。优选的，所述的提取方法是用加热提取法、超声提取法、渗滤提取法或植物组织破碎提取法。优选的，加热提取法、超声提取法和植物组织破碎提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的5 10倍，渗滤提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的20倍。(2)提取液A的萃取、柱层析纯化
提取液A在50°C条件下减压浓缩至无乙醇，加入原料药4飞重量倍的水，悬浮，以等体积的二氯甲烷萃取，重复萃取2 3次，得二氯甲烷萃取液和萃取后的水溶液C。其中二氯甲烷萃取液50°C条件下减压蒸去溶剂，得固体残余物，再将该固体残余物进行硅胶柱层析纯化，先以石油醚-乙酸乙酯50 I体积比洗脱51个保留体积，再以石油醚-乙酸乙酯I : I体积比洗脱，洗脱12 18个保留体积，收集石油醚-乙酸乙酯I : I体积比的洗脱液， 50°C条件下减压蒸去溶剂，得红色的固体物I。(3)提取液B的醇沉、酸化、萃取提取液B在50°C条件下减压浓缩至原料渣重量的I倍重量，加入95wt%的乙醇，使溶液中乙醇含量为7(T78wt%，放置过夜，滤除沉淀，将滤液在50°C条件下减压浓缩至无乙醇，所得的浓缩物与步骤(2)中所得萃取后的水溶液C混合，搅拌，然后以2N盐酸将溶液调pH=2 3，再以等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取2 3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸去乙酸乙酯，即得固体物II。( 4 )合并固体物I和固体物II，研细，混匀，即得白花丹参提取物。本发明方法所得白花丹参提取物的丹参酮IIA、隐丹参酮和和丹酚酸B的质量总含量不低于60%。本发明的白花丹参提取物的制药用途，用于制备治疗脉管炎的药物，特别是用于制备治疗血栓闭塞性脉管炎的药物。本发明的白花丹参提取物与药用辅料组合制成不同剂型的药物制剂，用于治疗脉管炎。一种治疗脉管炎的白花丹参提取物的药物组合物，包括本发明的白花丹参提取物和药学上可接受的载体、赋形剂、抗氧化剂之一或组合。优选的，所述的抗氧化剂选自抗坏血酸钠、抗坏血酸、枸橼酸或焦亚硫酸钠。优选的，所述的药物组合物为白花丹参提取物的片剂、胶囊剂、冲剂、软胶囊制剂、滴丸、泡腾片之一，可按照药剂学常规生产工艺制备。所述药物组合物不同剂型的药物制剂详细说明如下I、白花丹参提取物片剂、胶囊剂或冲剂的制备，均按白花丹参提取物总量的重量百分比取所述的白花丹参提取物，加入2飞重量倍的稀释剂I，4 15Wt%的湿润剂，5^15wt%的崩解剂，按常规湿法制粒，干燥，整粒，装袋，得冲剂；或者将整粒后的颗粒再加A 0. 5^3wt%的润滑剂，混匀，装入胶囊壳得胶囊剂或压片得片剂。上述稀释剂I选自淀粉、糖粉、糊精或微晶纤维；上述湿润剂选自水或乙醇；上述崩解剂为羧甲基淀粉钠；上述润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉。2、白花丹参提取物软胶囊剂的制备取所述的白花丹参提取物，加入稀释剂II，混匀，再加入抗氧化剂、助悬剂，搅拌均匀，室温静置，即得白花丹参菲醌提取物软胶囊内容物的药液；通过模具将其与事先用明胶、甘油、防腐剂制备的软胶囊壳材料一起压制成软胶囊。上述稀释剂II选自植物油；
上述抗氧化剂选自抗坏血酸钠、枸橼酸或焦亚硫酸钠；上述助悬剂选自蜂蜡、甲壳素甲基纤维素或琼脂。3、白花丹参提取物滴丸的制备取所述的白花丹参提取物，加入适量无水乙醇，然后加入聚乙二醇4000或聚乙二醇6000熔融液中，60°C水浴恒温搅拌，直至乙醇挥尽为止；然后将该熔融液转入滴丸机的贮液筒内，在保温80 85°C的条件下滴入冷凝液中，收集滴丸。优选的，所述的白花丹参提取物与聚乙二醇4000的重量比为I : 4飞。4、白花丹参提取物泡腾片的制备将白花丹参提取物均分为两个部分，即A部分和B部分，先将A部分以P -环糊精包合，A部分与￠-环糊精的质量比0.4、. 8 1，与8 10被％的碳酸氢钠或碳酸钠、填充剂，以f 3%PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)无水乙醇液为润湿剂制成碱性颗粒；将B部分与1(T12%酸源、填充剂、矫味剂菊糖，混匀，以1 3%PVP无水乙醇液为润湿剂制成酸性颗粒。然后将两种颗粒混合，再加入润滑剂，压片，。优选的，所述的填充剂为淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖之一或组合；；优选的，所述的酸源选自柠檬酸、酒石酸、富马酸、己二酸、苹果酸之一或组合；；优选的，所述的润滑剂有水溶性润滑剂如聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、十二烷基硫酸钠和水不溶性润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶，选择它们中的一种或2 3种组
八
口 o本发明的白花丹参提取物及其药物组合物制剂用于治疗血栓闭塞性脉管炎，改善肢体缺血所引起的慢性溃疡、疼痛、发冷及间歇跛行，促进溃疡愈合。本发明的治疗脉管炎的白花丹参提取物的药效学研究。动物Wistar雄性大鼠56只，体重28(T300g，由山东大学实验动物中心提供。试剂与仪器通塞脉片(江苏南星药业有限责任公司)，批号Z32020535、月桂酸(国药集团化学试剂有限公司)，批号F200909284 ;血栓素B2、6_酮-前列腺素Fla、ET酶免试剂盒(RD公司)，批号均为201203。药物将按照实施例I方法制备白花丹参提取物，用0. 5%羧甲基纤维素钠水溶液配制成0. lg/ml、0. 05g/ml和0. 025g/ml的混悬液。以目前临床上治疗血栓闭塞性脉管炎的常用口服药通塞脉片(江苏南星药业有限责任公司生产)为阳性对照，将其研细，过80目筛，用0. 5%羧甲基纤维素钠水溶液配制成0. 132g/ml的混悬液。造模与分组采用股动脉注射月桂酸法，制备血栓闭塞性脉管炎大鼠模型。将56只大鼠随机为假手术组、模型组、通塞脉片组、白花丹参提取物高剂量组、中剂量组和低剂量组。给药采用灌胃法给药。白花丹参提取物高剂量组、中剂量组和低剂量组分别按照
0.8g/kg、0. 4g/kg和0. 2g/kg的给药剂量给予已配制的高、中、低三种不同浓度的白花丹参提取物混悬液。通塞脉片组按照0.66g/kg的剂量给予已配制的通塞脉片混悬溶液。各组均于手术后灌胃给药，每天给药I次，连续I周。实验结果
大鼠体征指标观察大体观察大鼠患肢皮肤颜色、温度、患肢有无肿胀、有无坏疽及坏疽的程度、跛行状况。参照王军等，中国中西医结合杂志，1996，16(7) :421-423。采用的分级标准分级，I级病变局限于趾甲部；11级病变局限于趾部；111级病变局限于足爪部;IV级:病变局限于膝关节以下;U及:病变发展到膝关节以上。实验结果见表1，模型组的病变最严重，通塞脉片组与白花丹参提取物高、中、低剂量组的病变最轻，与模型组比较，高、中剂量组有极显著性差异p〈0. 01，低剂量显著性差异p〈0. 05。表I白花丹参提取物对TAO大鼠局部体征变化的影响
权利要求
1.一种治疗脉管炎的白花丹参提取物，以白花丹参的根为原料，通过溶剂提取、溶剂萃取、醇沉、柱层析纯化制备而成，同时含有白花丹参中总菲醌和总酚酸两大类有效组分，是主要含有丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I菲醌类成分以及丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草素酚酸类成分的混合物，其中丹参酮IIA、隐丹参酮和丹酚酸B的质量含量总和不低于.60%。
2.如权利要求I所述的白花丹参提取物，其特征在于是按以下方法制备的 以白花丹参的根为原料，粉碎后，甲醇或95wt%乙醇为提取溶剂进行提取，所述溶剂量与原料的重量比为5 20 1，重复提取2 3次，合并滤液，得提取液A;原料药渣再以.l(T50wt%乙醇、l(T50wt%甲醇水溶液或水进行提取，得提取液B ;所得提取液按以下方法处理 i.提取液A减压浓缩至无乙醇或无甲醇，以水悬浮，以等体积的二氯甲烷萃取，重复萃取2 3次，得二氯甲烷萃取液和萃取后的水溶液C ;其中二氯甲烷萃取液减压蒸去溶剂，得固体残余物，再将该固体残余物进行硅胶柱层析，分别以50 I体积比和I : I体积比的石油醚-乙酸乙酯进行洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯I : I体积比的洗脱液，减压蒸去溶剂，得固体物I; 将提取液B减压浓缩，加入乙醇使乙醇含量为7(T75wt%，醇沉，弃去沉淀，上清液减压浓缩至无乙醇，将浓缩物与i中的水溶液C混合，搅拌混匀，以盐酸调pH=2 3，再以等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取2 3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸去乙酸乙酯，即得固体物II； 合并上述固体物I和固体物II，研细，混匀，即得白花丹参提取物。
3.权利要求I所述的白花丹参提取物制备方法，步骤如下 (1)溶剂提取 原料白花丹参的根经过粉碎后，以甲醇、95wt%乙醇为提取溶剂进行提取，所用溶剂量与原料的重量比为5 20 1，重复提取2 3次，合并滤液，得提取液A;原料渣再以l(T50wt%乙醇、l(T50wt%甲醇水溶液或水进行提取，得提取液B ; (2)提取液A的萃取、柱层析纯化 提取液A在50°C条件下减压浓缩至无乙醇，加入原料药4飞重量倍的水，悬浮，以等体积的二氯甲烷萃取，重复萃取2 3次，得二氯甲烷萃取液和萃取后的水溶液C ;其中二氯甲烷萃取液50°C条件下减压蒸去溶剂，得固体残余物，再将该固体残余物进行硅胶柱层析纯化，先以石油醚-乙酸乙酯50 I体积比洗脱51个保留体积，再以石油醚-乙酸乙酯I I体积比洗脱，洗脱12 18个保留体积，收集石油醚-乙酸乙酯I : I体积比的洗脱液，.50°C条件下减压蒸去溶剂，得固体物I ; (3)提取液B的醇沉、酸化、萃取 提取液B在50°C条件下减压浓缩至原料渣重量的I倍重量，加入95wt%的乙醇，使溶液中乙醇含量为7(T78wt%，放置过夜，滤除沉淀，将上清液在50°C条件下减压浓缩至无乙醇，所得浓缩物与步骤(2)中所得萃取后的水溶液C混合，搅拌，然后以2N盐酸将溶液调pH=2 3，再以等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取2 3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸去乙酸乙酯，即得固体物II ； (4 )合并固体物I和固体物II，研细，混匀，即得白花丹参提取物。
4.如权利要求3所述的白花丹参提取物制备方法，其特征在于步骤(I)中所述的提取方法是用加热提取法、超声提取法、渗滤提取法或植物组织破碎提取法。
5.如权利要求4所述的白花丹参提取物制备方法，其特征在于加热提取法、超声提取法和植物组织破碎提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的6 10倍，渗滤提取法中所用的提取溶剂用量为原料重量的15 20倍。
6.权利要求I或2所述的白花丹参提取物的制药用途，用于制备治疗脉管炎的药物。
7.一种治疗脉管炎的白花丹参提取物的药物组合物，包括权利要求I或2所述的白花丹参总提取物及药学上可接受的载体、赋形剂或抗氧化剂之一或组合。
8.如权利要求7所述的白花丹参提取物的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为白花丹参提取物口服制剂，选自片剂、胶囊剂、冲剂、软胶囊制剂、滴丸、泡腾片制剂之o
9.如权利要求8所述的白花丹参提取物的药物组合物，其特征在于，所述白花丹参提取物口服制剂中泡腾片的制备步骤如下 将白花丹参提取物均分为两个部分，即A部分和B部分，先将A部分以3 -环糊精包合，A部分与P -环糊精的质量比0. 4^0. 8 : 1，与8 10wt%的碳酸氢钠或碳酸钠、填充剂，以广3%聚乙烯基吡咯烷酮无水乙醇液为润湿齐IJ制成碱性颗粒JfB部分与1(T12%酸源、填充剂、矫味剂菊糖，混匀，以f 3%聚乙烯基吡咯烷酮无水乙醇液为润湿剂制成酸性颗粒；然后将两种颗粒混合，再加入润滑剂，压片； 所述的填充剂为淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖之一或组合； 所述的酸源为柠檬酸、酒石酸、富马酸、己二酸或苹果酸； 所述的润滑剂为聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁、滑石粉或微粉硅胶。
全文摘要
本发明涉及一种白花丹参提取物、制备方法及用途。所述白花丹参提取物是从白花丹参根中经溶剂提取、溶剂萃取、醇沉、柱层析纯化而得到，是由白花丹参总菲醌和总酚酸组成的混合物，其中隐丹参酮、丹参酮IIA和丹酚酸B的质量含量总和不低于60%。白花丹参提取物对血栓闭塞性脉管炎具有较好的治疗作用，能较好的体现白花丹参原药材对TAO的整体治疗作用，可按照药剂学常规生产工艺将其制成片剂、胶囊剂、软胶囊、冲剂、泡腾片或滴丸，用于治疗血栓闭塞性脉管炎的药物。
文档编号A61K36/537GK102670711SQ20121017892
公开日2012年9月19日 申请日期2012年6月1日 优先权日2012年6月1日
发明者刘双成, 孙隆儒, 季梅, 朱海林, 翟光喜 申请人:山东大学