一种含千金子素的千金子脂肪油‑胆盐混合胶束及其制备方法和应用与流程

本发明涉及一种含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束及其制备方法和应用，属于抗肿瘤药物制备技术领域。

背景技术：

千金子二萜醇酯类化合物，又称千金子素，具有泻下、抗肿瘤、抗白血病等药理作用，现代研究证实该类化合物主要通过对癌细胞的细胞毒作用或增加多药耐药性细胞对常规抗肿瘤药物的敏感性来发挥抗肿瘤作用。

千金子素对癌细胞的细胞毒作用：张建业等（zhangjy,liangyj,chenhb,etal.structureidentificationofeuphorbiafactorl3anditsinductionofapoptosisthroughthemitochondrialpathway[j].molecules,2011,16(4):3222-3231）用mtt法检测出千金子素l1对人肺癌a549细胞的ic50为51.34±3.28µm；千金子素l3对人肺癌a549细胞、人结肠癌lovo细胞和人乳腺癌mcf-7细胞的ic50分别为34.04±3.99，41.67±3.02和45.28±2.56µm。luj等（luj,lig,huangj,etal.lathyrane-typediterpenoidsfromtheseedsofeuphorbialathyris[j].phytochemistry,2014,104(8):79-88）研究表明千金子素l2人乳腺癌mcf-7细胞显示出细胞毒性（ic50=12.4-23.1µm），对大鼠神经胶质瘤c6细胞也有一定毒性作用。

千金子素抗肿瘤多药耐药作用：jiaow等（jiaow,dongw,liz,etal.lathyranediterpenesfromeuphorbialathyrisasmodulatorsofmultidrugresistanceandtheircrystalstructures[j].bioorgmedchem,2009,17(13):4786-4792）研究发现千金子素的耐药逆转倍数与阳性对照逆转倍数（rf=2.95）比较，千金子素l2（rf=12.84）>千金子素l8（rf=8.03）>千金子素l3（rf=6.57）>千金子素l1（rf=4.40）。张建业等（zhangjy,zhangc,chenhb,etal.assignmentsof1hand13cnmrsignalsofeuphorbiafactorl1andinvestigationofitsanticanceractivityinvitro[j].jmedplantres,2010,4(4):335-338.zhangjy,miyj,chensp,etal.euphorbiafactorl1reversesabcb1-mediatedmultidrugresistanceinvolvinginteractionwithabcb1independentofabcb1downregualtion[j].jcellbiochem,2011,112(4):1076-1083）发现千金子素l1可显著增加多药耐药性kbv200和mcf-7/adr细胞对常规抗肿瘤药物长春新碱和阿霉素的敏感性，且证实千金子素l1可浓度依赖性的逆转abcb1（p-糖蛋白）介导的肿瘤多药耐药，最多逆转倍数高达25倍。choijs等（choijs,kangns,minyk,etal.euphorbiasteroidreversesp-glycoproteinmediatedmulti-drugresistanceinhumansarcomacelllinemes-sa/dx5[j].phytotherres,2010,24(7):1042-1046）证实千金子素l1即使在低浓度（1-3µm）亦可恢复长春花碱、紫杉醇和阿霉素抗癌药物对mes-sa/dx5细胞的毒性。

但是千金子素极性小，属难溶性成分，在水中溶解度小。李凤英等（李凤英,王英姿,李韶菁,等.千金子制霜前后提取物中主要二萜醇酯类成分的大鼠肠吸收特性研究[j].辽宁中医药大学学报,2017,19(5):17-19）研究表明千金子素的溶解性差，不能直接溶于k-r液中，在供试液配置时加入少量吐温80，结果增溶效果明显。吴瑞环等（吴瑞环,张振凌,王瑞生,等.千金子水煎液中4种有效成分含量测定[j].中国中医药信息杂志,2015,22(7):89-92）发现千金子中含有的3种二萜醇酯类成分极性较小，用水煎煮难以溶出，所以千金子（打碎）水煎液中3种二萜醇酯类成分含量较低，未打碎的千金子入煎剂则未检出。段飞鹏等（段飞鹏,王英姿,李韶菁,等.千金子甾醇在caco-2细胞单层模型中的吸收研究[j].中草药,2014,45(21):3136-3140）研究发现不同浓度千金子素l1的papp均介于1×10^-5-1×10^-6，表明其在肠道中的吸收为中等吸收。可见，千金子素水溶性差，胃肠吸收效果不理想，使潜在的活性不能充分发挥，进而影响了该类化合物在临床中的开发与使用。

技术实现要素：

针对千金子素水溶性差，胃肠吸收效果不理想，使潜在的活性不能充分发挥等问题，本发明提供一种含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束。

本发明的另一目的是提供一种简便可行的上述混合胶束的制备方法。

本发明的再一目的是提供一种含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束在制备抗肿瘤药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束，包括以下成分：千金子素，千金子脂肪油和脱氧胆酸盐，所述千金子素、千金子脂肪油与脱氧胆酸盐的质量比为1-3:20-200:8-16。

所述含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束，采用以下方法制备获得：

将千金子素、千金子脂肪油、脱氧胆酸盐分别溶于适当溶剂中；千金子素溶液与千金子脂肪油溶液混合，脱溶剂制成脂膜；脱氧胆酸盐溶液与脂膜混合后超声，离心，取上清液过滤，滤液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液，冷冻干燥即得含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束制剂。

所述含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的平均粒径为100-200nm。

所述千金子素为千金子素l1，l2，l3和l8中的至少一种，其结构式如下式（i）-式（iv）所示：

式（i）式（ii）

式（iii）式（iv）

所述千金子脂肪油，不含千金子素。

所述千金子脂肪油，采用千金子粉碎后醇提经柱层析获得。

一种上述含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的制备方法，包括以下步骤：

（1）将千金子素、千金子脂肪油、脱氧胆酸盐分别溶于适当溶剂中，制成溶液；

（2）将千金子素溶液与千金子脂肪油溶液混合，脱溶剂制成脂膜；

（3）脱氧胆酸盐溶液与脂膜混合后超声，离心，取上清液过滤，滤液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液；

（4）将含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液冷冻干燥，即得。

步骤（1）中千金子素与千金子脂肪油的溶剂为乙酸乙酯；脱氧胆酸盐的溶剂为0.01mol/lph7.0-7.4的磷酸缓冲液；

所述千金子素的浓度为1-3mg/ml；千金子脂肪油的浓度优选为10-100mg/ml；脱氧胆酸盐的浓度为0.1-2mg/ml；

所述脱氧胆酸盐为脱氧胆酸钠。

步骤（2）千金子素溶液与千金子脂肪油溶液的体积比为1:1。

步骤（3）超声温度为35-65℃，超声时间为20-60min；

离心速度为5000-18000r/min，离心时间为2-30min；

过滤方式为滤膜过滤，滤膜孔径为0.22µm。

步骤（4）冷冻干燥前加入甘露醇，用量为溶液体积的5%。

一种上述千金子脂肪油的制备方法，采用以下步骤：

（1）将千金子粉碎为千金子粉；

（2）将千金子粉醇提，得醇提液；

（3）将醇提液脱溶剂后过柱层析，洗脱物即为千金子脂肪油。

所述千金子粉的粒度小于20目；

所述千金子粉与低级脂肪醇的质量比为1:8-20；

所述醇为低级脂肪醇，选自甲醇、乙醇、异丙醇中的至少一种，优选为乙醇；

所述醇提次数为1-3次；

所述柱层析填料为硅胶，粒度为100-200目；

所述柱层析的洗脱溶剂选自石油醚或正己烷，所述石油醚为60-90℃沸程。

一种上述含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明具有以下优点：

本发明利用千金子自身所含的脂肪油和外加脱氧胆酸盐的自组装胶束能力，将千金子二萜醇酯类化合物包裹或荷载，制得了均匀、稳定地纳米级混合胶束。改变了药物的存在形态，不仅显著提高了千金子二萜醇酯化合物在水中的溶解度，还有利于被动跨膜转运过程，使得该类化合物的肠吸收效果显著提高。

附图说明

图1为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的显微图片；

图2为不含千金子脂肪油的千金子素-胆盐胶束的显微图片；

图3为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的粒径分布图；

图4为不含千金子脂肪油的千金子素-胆盐胶束的粒径分布图；

图5为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束对千金子素的增溶效果图；

图6为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束中千金子素在全肠段的ka变化图；

图7为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束中千金子素在全肠段的peff变化图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。

实施例1千金子脂肪油的制备。

（1）将千金子粉碎为通过20目筛的千金子粉；

（2）将1000g千金子粉以20000g乙醇提取3次，合并得醇提液；

（3）将醇提液回收除去乙醇后使通过粒度为100-200目的硅胶柱层析，以石油醚（60-90℃）为洗脱溶剂进行洗脱，洗脱物即为千金子脂肪油。

实施例2含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的制备。

（1）200mg脱氧胆酸钠溶于ph=7.4的0.01m磷酸缓冲液（pbs）中，得0.2mg/ml的脱氧胆酸钠溶液；

称取5mg的千金子素l1、l2、l3和l8于乙酸乙酯中溶解，得各单体浓度分别为1mg/ml的千金子素混合溶液；

称取实施例1中获得的千金子脂肪油2g于乙酸乙酯中溶解，得20mg/ml的脂肪油溶液。

（2）分别将上述千金子素混合溶液和千金子脂肪油溶液各取1ml，置同一圆底烧瓶中，于40℃水浴旋转蒸发，挥尽乙酸乙酯，将圆底烧瓶置真空干燥箱，常温抽真空过夜以除去残存的乙酸乙酯，制成脂膜。

（3）取80ml脱氧胆酸钠溶液加入上述脂膜的圆底烧瓶中，将脂膜与胆盐溶液在35℃水浴中超声混合60min，转移至离心管中，常温5000r/min离心30min，吸取上清液，0.22µm滤膜过滤，得到澄清的溶液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液s1。

对比例1不含千金子脂肪油的千金子素-胆盐胶束的制备。

（1）200mg脱氧胆酸钠溶于ph=7.4的0.01m磷酸缓冲液（pbs）中，得0.2mg/ml的脱氧胆酸钠溶液；

称取5mg的千金子素l1、l2、l3和l8于乙酸乙酯中溶解，得各单体浓度分别为1mg/ml的千金子素混合溶液。

（2）取上述千金子素混合溶液1ml，置圆底烧瓶中，于40℃水浴旋转蒸发，挥尽乙酸乙酯，将圆底烧瓶置真空干燥箱，常温抽真空过夜以除去残存的乙酸乙酯，制成脂膜。

（3）取80ml脱氧胆酸钠溶液加入上述脂膜的圆底烧瓶中，将脂膜与胆盐溶液在35℃水浴中超声混合60min，转移至离心管中，常温5000r/min离心30min，吸取上清液，0.22µm滤膜过滤，得到澄清的溶液即为千金子素-胆盐胶束溶液c1。

实施例3含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的表征。

3.1形态

通过高分辨率透射电子显微镜对实施例2与对比例1中的溶液进行表征，含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液的显微照片如图1所示，千金子素-胆盐胶束溶液的显微照片如图2所示。由图1和图2可见，千金子脂肪油存在的情况下，千金子二萜醇酯类化合物在脱氧胆酸钠溶液中形成的胶束形态更规则，粒径更均一，分布更均匀。

3.2粒径分布及zeta电位

zetasizer3000hsinstrument(malverninstruments,malvern,uk)在25ºc、he-ne激光测定实施例2样品溶液s1与对比例1样品溶液c1的粒径与zeta电位。样品溶液s1的平均粒径为135.8nm，zeta电位为-22.35mv，粒径分布图如图3所示；样品溶液c1的平均粒径为565.2nm，zeta电位为-1.58mv，粒径分布图如图4所示；粒径分布图中横坐标为粒径大小，纵坐标为粒径分布。由两者平均粒径数值及图3与图4可知，千金子素在脱氧胆酸钠溶液中可生成胶束，但胶束的粒径大小不一，zeta电位较小，生成胶束稳定性差；但在有适量千金子脂肪油存在的情况下，形成较均一的胶束粒径，形成的胶束粒径较均一、稳定性更好。

实施例4含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束中千金子素的含量测定

采用hplc法测定混合胶束中千金子素的含量，方法如下：

对照品溶液制备：取千金子素l1、l2、l3和l8对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含千金子素l1、l2、l3和l850μg的混合溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：精密量取10ml所制成不同千金子脂肪油含量的含千金子素的混合胶束溶液，置分液漏斗中，以乙酸乙酯提取2次，每次10ml，合并提取液，水浴蒸干，以甲醇溶解，稀释定容至2ml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。

色谱条件：inertsilods-3(5µm，250mm×4.6mm)，流动相为甲醇-水(75∶25)，流速1.0ml·min^-1，检测波长275nm，进样量20µl。

实施例5含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束对千金子素的增溶。

取不同量的千金子脂肪油置容量瓶，分别加乙酸乙酯溶解稀释至刻度，获得浓度为0、2.5、5、7.5、10、15、20、25、50、100mg/ml的脂肪油溶液。按实施例2的方法制成不同千金子脂肪油含量的千金子素混合胶束溶液。按照实施例5的方法测定混合胶束中4种千金子素的含量。

以不同千金子脂肪油浓度（不同千金子脂肪油加入量）为横坐标，以4种千金子素在该溶液中的溶解度为纵坐标作图，见图5。由图5可见，脂肪油的加入，使千金子素的溶解量增大；并且，在一定范围内，随着脂肪油浓度（即加入量）的增加，千金子素的溶解度显著提高。脂肪油浓度为10mg/ml时，千金子素的溶解度就已增加2-3倍，脂肪油浓度达到100mg/ml，千金子素的溶解度就已达平台，再增加脂肪油的用量，其增溶效果不显著，故千金子脂肪油的浓度优选为10-100mg/ml。

实施例6含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束中千金子素在肠道中的吸收效果。

6.1灌流液的制备

取不同量的千金子脂肪油置容量瓶，分别加乙酸乙酯溶解稀释至刻度，获得浓度为0、10、20、50、100mg/ml的脂肪油溶液。考虑到人与大鼠给药剂量换算，千金子素l1、l2、l3和l8于乙酸乙酯中溶解，得各单体浓度分别为20μg/ml的千金子素混合溶液。按实施例2的方法制成不同千金子脂肪油含量的千金子素混合胶束溶液，作为灌流液。

6.2在体单向肠灌流实验模型的建立

雌性wistar大鼠适应性饲养一周，在灌流实验前禁食12h，自由饮水。腹腔注射10%水合氯醛（3ml·kg^-1）麻醉，背位固定于手术台上，沿大鼠腹中线剑突下2cm，打开腹腔，分离待考察的肠段（全段小肠：上端自胃部幽门下行1cm，下端自盲肠上行1cm），两端处各剪一个v型小口，将硅胶管小心插入并结扎，应注意避免伤及血管，恰当摆向实验肠段使灌流液能流通顺畅为宜，用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖伤口保湿，同时红外灯保温。用37℃预热的生理盐水从肠上端开口轻缓冲洗肠道（方向勿反），直至将肠内容物冲洗干净，通空气排净生理盐水，接着用预热的ph6.8的krebs-ringer’s缓冲液作为肠灌流液（37℃）进行在体单向灌流，以建立灌流体系，灌流方向要与肠道冲洗方向一致。实验开始前以实验灌流液（37℃）灌充肠段，以0.2ml·min^-1的速度平衡lh后，从第一滴供试液滴下开始计时，进口处用己知重量的装有实验灌流液的小瓶灌流，保持恒流泵流速不变，同时出口处放另一已知重量的空小瓶收集流出液，每隔15min迅速更换下一对称定重量的盛有实验灌流液的小瓶和空的收集液小瓶，放冷至室温后，称量灌流液小瓶和收集液小瓶的重量，共收集8个时间段的样品，实验持续时间为120min。实验结束后，将该肠段剪下，沿肠管剪开，平铺于坐标纸上，测量小肠内径与长度。

6.3肠灌流液中千金子素的测定

按实施例4中方法测定4种千金子素的含量。

6.4数据处理

采用质量分析法对灌流液的流入与流出体积进行校正（采用重量法计算，假设进出口的灌流液密度一样，并用进入液和流出液的质量分别表示进入液和流出液的体积），按下列方程式计算吸收速率常数ka和小肠表观吸收系数peff。

；

。

式中：

cin和cout分别为该肠段进入液和流出液的浓度（µg·ml^-1）；

vin和vout分别为该肠段灌流液的流入与流出体积（ml，用进入液和流出液的质量分别表示）；

qin为灌流速度（ml·min^-1）；

v为该灌流肠段的体积（cm³），v=πr²l，1ml=1cm³；

a为该灌流肠段的表面积（cm²），a=2πrl；

r为该肠段半径（cm）；

l为该肠段的长度（cm）；

ka为吸收速率常数（min^-1）；

peff为该肠段表观吸收系数（cm·min^-1）。

以不同千金子脂肪油浓度（不同千金子脂肪油加入量）为横坐标，以4种千金子素在全肠段吸收的ka及peff值为纵坐标作图，见图6和图7。由图6、图7可见，脂肪油的加入，使千金子素的ka及peff值增大；并且，在一定范围内，随着脂肪油加入量的增加，千金子素的ka及peff值显著升高，吸收率显著提高。千金子脂肪油的适量加入可提高千金子素的肠吸收效果。

实施例6含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的制备。

（1）100mg脱氧胆酸钠溶于ph=7.4的0.01m磷酸缓冲液（pbs）中，得1mg/ml的脱氧胆酸钠溶液；

分别称取5mg千金子素l1、l2、l3、l8于乙酸乙酯中溶解，得1mg/ml的千金子素l1、l2、l3、l8的混合溶液；

称取实施例1中获得的千金子脂肪油1g于乙酸乙酯中溶解，得100mg/ml的脂肪油溶液。

（2）上述千金子素混合溶液和千金子脂肪油溶液各取1ml，置圆底烧瓶中，于40℃水浴旋转蒸发，挥尽乙酸乙酯，将圆底烧瓶置真空干燥箱，常温抽真空过夜以除去残存的乙酸乙酯，制成脂膜。

（3）取80ml脱氧胆酸钠溶液加入上述脂膜的圆底烧瓶中，将脂膜与胆盐溶液在45℃水浴中超声混合60min，转移至离心管中，常温12000r/min离心20min，吸取上清液，0.22µm滤膜过滤，得到澄清的溶液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液s2。

（4）将步骤（3）获得的溶液s2加入冻干保护剂甘露醇进行冷冻干燥，即得含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束固体制剂。

实施例7含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的制备。

（1）50mg脱氧胆酸钠溶于ph=7.4的0.01m磷酸缓冲液（pbs）中，得0.5mg/ml的脱氧胆酸钠溶液；

分别称取10mg千金子素l1、l2、l3、l8于乙酸乙酯中溶解，得2mg/ml的千金子素l1、l2、l3、l8的混合溶液；

称取实施例1中获得的千金子脂肪油0.5g于乙酸乙酯中溶解，得50mg/ml的脂肪油溶液。

（2）上述千金子素混合溶液和千金子脂肪油溶液各取1ml，置圆底烧瓶中，于40℃水浴旋转蒸发，挥尽乙酸乙酯，将圆底烧瓶置真空干燥箱，常温抽真空过夜以除去残存的乙酸乙酯，制成脂膜。

（3）取80ml脱氧胆酸钠溶液加入上述脂膜的圆底烧瓶中，将脂膜与胆盐溶液在50℃水浴中超声混合40min，转移至离心管中，常温15000r/min离心15min，吸取上清液，0.22µm滤膜过滤，得到澄清的溶液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液s3。

（4）将步骤（3）获得的溶液s3加入冻干保护剂甘露醇进行冷冻干燥，即得含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束固体制剂。

实施例8含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的制备。

（1）0.2g脱氧胆酸钠溶于ph=7.4的0.01m磷酸缓冲液（pbs）中，得2mg/ml的脱氧胆酸钠溶液；

分别称取15mg千金子素l1、l2、l3、l8于乙酸乙酯中溶解，得3mg/ml的千金子素l1、l2、l3、l8的混合溶液；

称取实施例1中获得的千金子脂肪油0.8g于乙酸乙酯中溶解，得80mg/ml的脂肪油溶液。

（2）上述千金子素混合溶液和千金子脂肪油溶液各取1ml，置圆底烧瓶中，于40℃水浴旋转蒸发，挥尽乙酸乙酯，将圆底烧瓶置真空干燥箱，常温抽真空过夜以除去残存的乙酸乙酯，制成脂膜。

（3）取80ml脱氧胆酸钠溶液加入上述脂膜的圆底烧瓶中，将脂膜与胆盐溶液在60℃水浴中超声混合20min，转移至离心管中，常温8000r/min离心30min，吸取上清液，0.22µm滤膜过滤，得到澄清的溶液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液s4。

（4）将步骤（3）获得的溶液s4加入冻干保护剂甘露醇进行冷冻干燥，即得千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束固体制剂。

实施例9含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的制备。

（1）40mg脱氧胆酸钠溶于ph=7.4的0.01m磷酸缓冲液（pbs）中，得0.4mg/ml的脱氧胆酸钠溶液；

分别称取5mg千金子素l1、l2、l3、l8于乙酸乙酯中溶解，得1mg/ml的千金子素l1、l2、l3、l8的混合溶液；

称取实施例1中获得的千金子脂肪油0.2g于乙酸乙酯中溶解，得20mg/ml的脂肪油溶液。

（2）上述千金子素混合溶液和千金子脂肪油溶液各取1ml，置圆底烧瓶中，于40℃水浴旋转蒸发，挥尽乙酸乙酯，将圆底烧瓶置真空干燥箱，常温抽真空过夜以除去残存的乙酸乙酯，制成脂膜。

（3）取80ml脱氧胆酸钠溶液加入上述脂膜的圆底烧瓶中，将脂膜与胆盐溶液在35℃水浴中超声混合40min，转移至离心管中，常温5000r/min离心30min，吸取上清液，0.22µm滤膜过滤，得到澄清的溶液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液s5。

（4）将步骤（3）获得的溶液s5加入冻干保护剂甘露醇进行冷冻干燥，即得千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束固体制剂。

实施例10含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束的制备。

（1）80mg脱氧胆酸钠溶于ph=7.4的0.01m磷酸缓冲液（pbs）中，得0.8mg/ml的脱氧胆酸钠溶液；

分别称取15mg千金子素l1、l2、l3、l8于乙酸乙酯中溶解，得1.5mg/ml的千金子素l1、l2、l3、l8的混合溶液；

称取实施例1中获得的千金子脂肪油0.5g于乙酸乙酯中溶解，得50mg/ml的脂肪油溶液。

（2）上述千金子素混合溶液和千金子脂肪油溶液各取1ml，置圆底烧瓶中，于40℃水浴旋转蒸发，挥尽乙酸乙酯，将圆底烧瓶置真空干燥箱，常温抽真空过夜以除去残存的乙酸乙酯，制成脂膜。

（3）取80ml脱氧胆酸钠溶液加入上述脂膜的圆底烧瓶中，将脂膜与胆盐溶液在37℃水浴中超声混合30min，转移至离心管中，常温15000r/min离心10min，吸取上清液，0.22µm滤膜过滤，得到澄清的溶液即为含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束溶液s6。

（4）将步骤（3）获得的溶液s6加入冻干保护剂甘露醇进行冷冻干燥，即得含千金子素的千金子脂肪油-胆盐混合胶束固体制剂。