5°C，得松茸混合菌丝液；
[0033]S3、将所得的松茸混合菌丝液在洁净室接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，并置于14?15°C的培养室内暗培养25d，在2d时，进行超声波水浴培养，超声波的频率和功率分别设定为68kHz和600W，超声波处理时间为lOmin超声间歇比为20s/5s ；
[0034]S4、待菌丝长满栽培瓶后，感染处理松茸的优势伴生树种，浇水900ml，盖好覆盖物，人工驯化，即可得到稳定性强，可用于繁殖生产的松茸母种。
[0035]实施例2
[0036]S1、采集自然野外生长的松茸，取发育完全的子实体菌盖部分，切掉菌柄，用75%的酒精棉球擦净菌盖表面，菌褶朝下用灭过菌的铁钩勾住悬挂于灭菌的三角瓶中，用无菌棉塞封口过夜，收集孢子印，用无菌水制成孢子液；
[0037]S2、加入到液体培养基中进行摇菌，进行液体多孢自交，摇菌条件为:转速140r/min，培养温度为25°C，得松茸混合菌丝液；
[0038]S3、将所得的松茸混合菌丝液在洁净室接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，并置于15°C的培养室内暗培养30d，在6d时，进行超声波水浴培养，超声波的频率和功率分别设定为68kHz和600W，超声波处理时间为90min，超声间歇比为30s/5s ；
[0039]S4、待菌丝长满栽培瓶后，感染处理松茸的优势伴生树种，浇水1000ml，盖好覆盖物，人工驯化，即可得到稳定性强，可用于繁殖生产的松茸母种。
[0040]实施例3
[0041]S1、采集自然野外生长的松茸，取发育完全的子实体菌盖部分，切掉菌柄，用75%的酒精棉球擦净菌盖表面，菌褶朝下用灭过菌的铁钩勾住悬挂于灭菌的三角瓶中，用无菌棉塞封口过夜，收集孢子印，用无菌水制成孢子液；
[0042]S2、加入到液体培养基中进行摇菌，进行液体多孢自交，摇菌条件为:转速140r/min，培养温度为25°C，得松茸混合菌丝液；
[0043]S3、将所得的松茸混合菌丝液在洁净室接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，并置于14.5°C的培养室内暗培养27.5d，在4d时，进行超声波水浴培养，超声波的频率和功率分别设定为68kHz和600W，超声波处理时间为50min，超声间歇比为25s/5s ；
[0044]S4、待菌丝长满栽培瓶后，感染处理松茸的优势伴生树种，浇水950ml，盖好覆盖物，人工驯化，即可得到稳定性强，可用于繁殖生产的松茸母种。
[0045]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.野生松茸驯化母种制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、采集自然野外生长的松茸，取发育完全的子实体菌盖部分，切掉菌柄，用75%的酒精棉球擦净菌盖表面，菌褶朝下用灭过菌的铁钩勾住悬挂于灭菌的三角瓶中，用无菌棉塞封口过夜，收集孢子印，用无菌水制成孢子液； 52、加入到液体培养基中进行摇菌，进行液体多孢自交，摇菌条件为:转速140r/min，培养温度为25 °C，得松茸混合菌丝液； 53、将所得的松茸混合菌丝液在洁净室接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，并置于14?15°C的培养室内暗培养25?30d，在2?6d时，进行超声波水浴培养，超声波的频率和功率分别设定为68kHz和600W，超声波处理时间为1min?90min，超声间歇比为20s/5s ?30s/5s； 54、待菌丝长满栽培瓶后，感染处理松茸的优势伴生树种，浇水900ml?1000ml，盖好覆盖物，人工驯化，即可得到稳定性强，可用于繁殖生产的松茸母种。2.根据权利要求1所述的野生松茸驯化母种制备方法，其特征在于，所述步骤S2中的液体培养基每升含: 葡萄糖20?24g、酵母膏0.3?0.5g、蛋白胨0.5?0.7g、葛仙米冻干粉3?5g、氨基酸螯合镁0.05?0.07g、磷酸二氢钾0.1?0.2g、水溶性淀粉40?60g，其余为无菌水。3.根据权利要求1所述的野生松茸驯化母种制备方法，其特征在于，所述步骤S3中的培养料通过以下步骤制备: (1)称取松树木肩36?48份、魔芋粉8?10g、大蒜素0.5?0.6份、风化煤8?10份置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.7?1.3MPa，爆破处理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.3?1.7MPa，蒸汽爆破处理0.5?2.5min，得混合物； (2)将所得的混合物自然降温至常温后，加入氮化硅超微粉3?7份、甲壳素纤维4?6份、海藻酸纤维3?5份混合搅拌均匀，并通过加入水调整水分含量为总重量的64?68%，得培养基料备用。4.根据权利要求1所述的野生松茸驯化母种制备方法，其特征在于，所述葛仙米冻干粉通过以下步骤制备: 取50?55份葛仙米，清洗，用研磨机磨成粗粉，然后用90?95 °C热水浸泡50?85min，捞出沥干后，加入10?12份常温纯净水，和匀，然后按照接种量I?1.5%的比例接种微生物发酵剂，保持温度38°C，发酵52?58小时，发酵结束后低温烘干，研磨成细粉。5.根据权利要求4所述的野生松茸驯化母种制备方法，其特征在于，所述微生物发酵剂的成分为:按照菌株数量比乳酸杆菌:地衣芽孢杆菌:谷氨酸棒杆菌为:I: 1.2: 2的比例配制成1.5X 17菌株/ml的发酵剂。
【专利摘要】本发明公开了一种野生松茸驯化母种制备方法，包括如下步骤：采集自然野外生长的松茸制备孢子液；加入到液体培养基中进行摇菌，进行液体多孢自交后，将所得的松茸混合菌丝液在洁净室接种于栽培瓶的培养料上，用透气盖封口，置于培养室内暗培养25～30d，并在2～6d时，进行超声波水浴培养；待菌丝长满栽培瓶后，感染处理松茸的优势伴生树种，浇水900ml～1000ml，盖好覆盖物，人工驯化，即可得到稳定性强，可用于繁殖生产的松茸母种。本发明通过培养基和培养方法的合理改进，实现了松茸母种的人工驯化，改变了松茸生产完全依靠自然的现状，而且还实现了松茸产品的稳产、高产和优质。
【IPC分类】C12N1/14, C12N1/36
【公开号】CN105349436
【申请号】CN201510906039
【发明人】刘晓红, 王志伟
【申请人】刘晓红, 王志伟
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月5日