从南方红豆杉植物中提取巴卡亭iii对照品的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种分离纯化技术，尤其是一种从南方红豆杉植物中提取巴卡亭III 对照品的方法。
【背景技术】
[0002] 紫杉醇自1992年美国FDA批准临床应用以来，便以它独特的作用机制，确切的疗 效和副作用较小的特点在国际抗肿瘤药物研究领域声名鹊起，成为治疗晚期卵巢癌、乳癌、 非小细胞肺癌和Kaposi'S肉瘤等恶性肿瘤的头号药物。
[0003] 然而，天然紫杉醇在红豆杉中的含量极低，仅为0. 001-0. 002%，提取1公斤的天然 紫杉醇要消耗红豆杉树皮30吨。而与紫杉醇母核结构极为相似的巴卡亭-III和10-去乙 酰基巴卡亭III(10-DABIII)在红豆杉枝叶中含量丰富，同时在紫杉类其他植物中也发 现其大量存在，这样就给紫杉醇的半合成提供了便利条件，其方法是人工合成紫杉醇的苯 基异丝氨酸侧链，将其与植物提取物巴卡亭-III或10-去乙酰基巴卡亭III(10-DABIII) 进行对接获得紫杉醇类化合物。
[0004] 从贵州红豆杉的分布面积可以看出，南方红豆杉较红豆杉的分布范围广。但目前 对贵州产南方红豆杉的化学成分研究未见文献报道。如何从贵州产南方红豆杉植物中获得 巴卡亭类化合物，是需要解决的。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种从南方红豆杉植物中提取巴卡亭III对 照品的方法，它能从贵州产南方红豆杉植物中分离获得纯度极高的巴卡亭III。
[0006] 本发明是这样实现的：从南方红豆杉植物中提取巴卡亭III对照品的方法，包括 如下步骤： 1) 取南方红豆杉枝叶，将枝叶晾干后，再将其粉碎，获得干燥的碎料；将干燥的碎料采 用石油醚进行预处理后，再用甲醇进行浸渍，在浸渍的同时进行搅拌、超声，将浸渍液过滤， 再将滤液减压浓缩，获得浓缩液，将浓缩液用正己烷反复萃取之后，再蒸干制成浸膏； 2) 将步骤1)中制得的浸膏用氯仿/水反复抽提6次，萃取分液，得到氯仿的抽提物， 将抽提物与硅胶按1:10的质量比，以体积比为15:1的石油醚-氯仿为洗脱剂进行梯度洗 脱，加压柱层析，收集含巴卡亭III极性相近的混合物，收集的Rf值的范围是在巴卡亭III 标准品Rf值±0. 2的范围，分离得到粗分离物； 3) 将粗分离物加硅胶，首次加入的原料与细分离的硅胶的质量比为1:10,以体积比为 12:1的石油醚-氯仿为洗脱剂进行梯度洗脱，加压柱层析，收集含巴卡亭III极性非常接近 的混合物，收集的Rf值的范围是在巴卡亭III标准品Rf值±0. 1的范围，分离得到细分离 物； 4) 将细分离物中加入丙酮，细分离物与丙酮的体积比为1:10,以甲醇和水为流动相洗 脱，甲醇与水的体积为80:20,流速为8mL/min，同时以紫外分光光度计检测，洗脱段流出液 在波长237nm出峰，对照巴卡亭III标准品图谱，确定巴卡亭III的吸收峰，收集得到纯度 为99. 1%的巴卡亭III对照品。
[0007] 巴卡亭III为白色粉末，熔点191.5-191.9 °C，紫外吸收峰为237nm，可溶于甲 醇、乙醇、丙酮，不溶于水，其分子式为，分子量为，结构式为：
由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明以南方红豆杉枝叶制成浸膏；然后 用氯仿/水反复抽提浸膏，萃取分液，得到氯仿的抽提物，抽提物用正相硅胶柱粗分离得到 粗分离物；粗分离物再用正相硅胶柱细分离得到细分离物；细分离物采用高效液相色谱分 离制备得到巴卡亭III对照品，纯度为99. 1%符合含量测定用中药化学对照品的要求。
【附图说明】
[0008] 附图1及附图2为本发明的实施例1的巴卡亭III核磁谱图； 附图3为本发明的实施例1的巴卡亭III高效液相图。
【具体实施方式】
[0009] 本发明的实施例：从南方红豆杉植物中提取巴卡亭III对照品的方法，包括如下 步骤： 1) 取l〇〇g南方红豆杉枝叶，将干燥(晾干）的枝叶进行粉碎，获得碎料；将干燥的碎料 采用1L石油醚进行浸泡脱脂（以除去大量存在的此类非极性杂质），再用4L甲醇进行冷浸， 在浸渍的同时进行搅拌、超声1小时，自然冷却半小时；反复3次（自然冷却的目的是避免因 搅拌和超声使溶液温度过高而产生高温萃取)，将浸渍液过滤，将滤液减压浓缩至150mL， 获得浓缩液，将浓缩液用100mL正己烷反复萃取3次之后，弃去正己烷层，萃取液旋干溶 剂，制成浸膏； 2) 将步骤1)中制得的浸膏用氯仿/水反复抽提6次，萃取分液，得到氯仿的抽提物， 将l〇g抽提物与300-400目的硅胶100g混合均匀，以体积比为15:1的石油醚-氯仿为洗 脱剂进行梯度洗脱，加压柱层析，收集含巴卡亭III极性相近的混合物，收集的Rf值的范围 是在巴卡亭III标准品Rf值±0. 2的范围，分离得到粗分离物约lg; 3) 将lg粗分离物与300-400目的硅胶10g混合均匀，以体积比为12:1的石油醚-氯 仿为洗脱剂进行梯度洗脱，加压柱层析，收集含巴卡亭III极性非常接近的混合物，收集的 Rf值的范围是在巴卡亭III标准品Rf值±0. 1的范围，分离得到细分离物〇. 2g; 4) 将0. 2细分离物中加入丙酮，细分离物与丙酮的体积比为1:10,以甲醇和水为流 动相洗脱，甲醇与水的体积为80:20,流速为8mL/min，同时以紫外分光光度计检测，柱子为 HederacC1S 200mm，洗脱段流出液在波长237nm显示1个强度很高的吸收峰，对照巴卡 亭III标准品图谱，确定巴卡亭IV的吸收峰，收集得到纯度为99. 1%的巴卡亭III对照品 25mg〇
[0010] 核磁共振和高分辨质谱测试等结果如下,Η NMR (⑶Cl3，400 MHz) 1.10 (s, 6H), 1.66 (s, 3H), 1.82-1.89 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.17 (s, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.28 (s, 6H), 2.51-2.59 (m, 1H), 3.87 (d, / = 8.0 Hz, 1H), 4.15 (d, / = 8. 0 Hz, 1H), 4. 30 (d, / = 8. 0 Hz, 1H), 4. 44-4. 48 (m, 1H), 4. 85-4. 89 (m, 1H), 4.98 (d, /= 8.0 Hz, 1H), 5.61 (d, / = 8.0 Hz, 1H), 6.32 (s, 1H), 7.46-7.50 (m, 2H)，7. 59-7.63 (m, 1H)，8.08-8. 10 (m, 2H) ; 13C NMR (CDC13, 100 MHz)δ： 9. 4,15. 6, 20. 9, 22. 5, 26. 9, 35. 5, 38. 6, 42. 6, 46. 1, 58. 6, 67. 8, 72. 2, 74. 8, 76.2, 79.0, 80.6, 84.4, 128.6, 129.2, 130.0, 131.6, 133.6, 146.5, 167.0, 170.6, 171.3, 204.2; HRMS (ESI) Calcd. for C33H40Na012 [M+Na] + : 651.2417; Found: 651.2419〇
【主权项】
1. 一种从南方红豆杉植物中提取巴卡亭III对照品的方法，其特征在于：包括如下步 骤： 1) 取南方红豆杉枝叶，将枝叶晾干后，再将其粉碎，获得干燥的碎料；将干燥的碎料采 用石油醚进行预处理后，再用甲醇进行浸渍，在浸渍的同时进行搅拌、超声，将浸渍液过滤， 再将滤液减压浓缩，获得浓缩液，将浓缩液用正己烷反复萃取之后，再蒸干制成浸膏； 2) 将步骤1)中制得的浸膏用氯仿/水反复抽提6次，萃取分液，得到氯仿的抽提物， 将抽提物与硅胶按1:10的质量比，以体积比为15:1的石油醚-氯仿为洗脱剂进行梯度洗 脱，加压柱层析，收集含巴卡亭III极性相近的混合物，收集的Rf值的范围是在巴卡亭III 标准品Rf值±0. 2的范围，分离得到粗分离物； 3) 将粗分离物加硅胶，首次加入的原料与细分离的硅胶的质量比为1:10,以体积比为 12:1的石油醚-氯仿为洗脱剂进行梯度洗脱，加压柱层析，收集含巴卡亭III极性非常接近 的混合物，收集的Rf值的范围是在巴卡亭III标准品Rf值±0. 1的范围，分离得到细分离 物； 4) 将细分离物中加入丙酮，细分离物与丙酮的体积比为1:10,以甲醇和水为流动相洗 脱，甲醇与水的体积为80:20,流速为8mL/min，同时以紫外分光光度计检测，洗脱段流出液 在波长237nm出峰，对照巴卡亭III标准品图谱，确定巴卡亭III的吸收峰，收集得到纯度 为99. 1%的巴卡亭III对照品。
【专利摘要】本发明公开了一种从南方红豆杉植物中提取巴卡亭III对照品的方法。以南方红豆杉枝叶制成浸膏；然后用氯仿/水反复抽提浸膏，萃取分液，得到氯仿的抽提物，抽提物用正相硅胶柱粗分离得到粗分离物；粗分离物再用正相硅胶柱细分离得到细分离物；细分离物采用高效液相色谱分离制备得到巴卡亭III对照品，纯度为99.1%符合含量测定用中药化学对照品的要求。
【IPC分类】C07D305/14
【公开号】CN105418543
【申请号】CN201510864915
【发明人】刘雄利, 余章彪, 张敏, 田民义, 刘雄伟
【申请人】贵州大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月1日