子基因载体，记为TPE-PGEA3。
[0050] 实施例4
[0052]如化学方程式所示，取0.4g的单羟基的四苯基乙烯衍生物与0.86g的三溴丙胺溶 解在8mL的N，N-二甲基甲酰胺中，最后加入0.64g的碳酸钾，75°C反应12h，最后在50mL水中 沉淀得到产物四苯基乙烯氨基衍生物。
[0053] 取50mg的实施例1得到的TPE-PGMA1溶解于lmL的DMSO中，向其中加入12.3yL的三 乙胺(TEA)和15.5mg的四苯基乙烯氨基衍生物，40°C反应24h;再加入2mL乙醇胺(EA)，80°C 反应30min。后处理步骤与实例1的步骤(3)相同，冻干后得到的絮状聚合物即为具有聚集诱 导发光效应的阳离子基因载体，记为TPE-PGEA1-1。
[0054]实施例5
[0055]改变TEA的用量为31yL，四苯基乙烯氨基衍生物的用量为38.5mg，其余反应条件与 实施例4相同，得到的絮状聚合物即为具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体，记为TPE-PGEA1-2〇
[0056]实施例6
[0057] 取50mg的实施例2得到的TPE-PGMA2溶解于lmL的DMSO中，TEA的用量为16yL，四苯 基乙烯氨基衍生物的用量为13mg，其余反应条件与实施例4相同，得到的絮状聚合物即为具 有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体，记为TPE-PGEA2-1。
[0058]实施例7
[0059] 取50mg的实施例2得到的TPE-PGMA2溶解于lmL的DMSO中，改变TEA的用量为32yL， 四苯基乙烯氨基衍生物的用量为40mg，其余反应条件与实施例4相同，得到的絮状聚合物即 为具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体，记为TPE-PGEA2-2。
[0060]实施例8
[0061 ] 取50mg的实施例3得到的TPE-PGMA3溶解于lmL的DMSO中，改变TEA的用量为13yL， 四苯基乙烯氨基衍生物的用量为16.5mg，其余反应条件与实施例4相同，得到的絮状聚合物 即为具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体，记为TPE-PGEA3-1。
[0062]实施例9
[0063]取50mg的实施例3得到的TPE-PGMA3溶解于lmL的DMSO中，改变TEA的用量为33yL， 四苯基乙烯氨基衍生物的用量为41.5mg，其余反应条件与实施例4相同，得到的絮状聚合物 即为具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体，记为TPE-PGEA3-2。
【主权项】
1. 一种具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体的制备方法，其特征在于，其具体操 作步骤为： 1) 聚合反应:聚合反应体系在无氧环境下连续进行，聚合反应完成后加入水或者甲醇， 或者暴露在空气中，使引发体系失活并且终止聚合，加入的水或者甲醇是四苯基乙烯星形 引发剂的质量的200-400倍，然后用乙醚、乙醇或者甲醇沉淀直到形貌变为固体，将其放入 真空干燥箱中除去乙醚、乙醇或者甲醇得到粉末状或者絮状的固体;所述的聚合反应体系 包括四苯基乙烯星形引发剂、有机溶剂、单体、配体、CuBr;其中单体与四苯基乙烯星形引发 剂的质量比为〇. 001-50，优选0.01-40，更优选0.05-30;配体与四苯基乙烯星形引发剂的质 量比为0.01-1.4,优选0.01-1，更优选0.05-1 ;CuBr与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为 0.001-1.6,优选0.01-1，更优选0.05-0.08;有机溶剂与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为 50-500，优选50-450，更优选70-400; 2) 开环反应:在30-35°C无氧环境下向步骤1)得到的聚合产物中加入溶剂搅拌溶解，然 后加入乙醇胺或/和乙二胺在80-90°C温度下反应30-50min;其中溶剂与聚合产物的质量比 为200-500,优选150-450,更优选120-350;乙醇胺或/和乙二胺与聚合产物的质量比为300-600，优选450-600，更优选450-500; 3) 步骤2)开环反应后的产物加水透析，最后冷冻干燥即得到具有聚集诱导发光效应的 阳呙子基因载体，加水量与开环反应后的产物的比例为100 _350mL/g。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的聚合反应体系的各组 分加入顺序为:先将四苯基乙烯星形引发剂溶于有机溶剂中，然后加入单体，再加入配体， 最后加入CuBr引发活性可控自由基聚合。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的聚合反应体系的各组 分加入顺序为:将四苯基乙烯星形引发剂溶于有机溶剂中，然后加入单体，再加入CuBr，最 后加入配体引发活性可控自由基聚合。4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中聚合反应温度为0_60°C，优 选5-55°C，更优选10_50°C;聚合反应时间为12h-48h，优选12h-24h，更优选20h-24h; 所述的单体为甲基丙烯酸N，N-二甲氨基乙酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、N-异丙基丙烯 酰胺中的一种或者几种； 所述的配体为2,2'_联吡啶、1，1，4,7,10,10-六甲基三乙烯四胺、五甲基二乙烯三胺、 4，4 联吡啶中的一种或者几种； 步骤1)所述的有机溶剂选自呋喃类、砜类、亚砜类、酰胺类、醇类中的一种或者几种； 步骤2)所述的溶剂选自二甲基亚砜、二乙基亚砜、二丙基亚砜、二丁基亚砜、二戊基亚 砜、二己基亚砜中的一种或几种。5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，当使用CuBr聚合反应速率过快时，步 骤1)还加入CuBr2，CuBr与CuBr 2的质量比为3:1-5:1。6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的四苯基乙烯星形引发剂结构式 如下：7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的四苯基乙烯星形引发剂的制备 方法:将四苯基乙烯四羟基衍生物溶解在四氢呋喃中，然后加入三乙胺，最后加入二溴异丁 酰溴，反应12-18h，然后在二甲基亚砜中沉淀出四苯基乙烯星形引发剂;其中四苯基乙烯四 羟基衍生物与四氢呋喃的质量比为0.02-0.04，优选0.02-0.035，更优选0.03-0.035;四苯 基乙烯四羟基衍生物与二溴异丁酰溴的质量比为1-2,优选1-1.5,更优选1-1.2;四苯基乙 烯四羟基衍生物与三乙胺的质量比为1-2,优选1-1.8,更优选1-1.5;四苯基乙烯四羟基衍 生物与二甲基亚砜的质量比为〇. 8-1.2，优选0.8-1，更优选0.8-0.85。8. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中聚合产物中加入溶剂搅拌溶 解后，先加入三乙胺、三丙胺或三丁胺，和四苯基乙烯氨基衍生物在35-40°C温度下反应24-48小时后，再加入乙醇胺或/和乙二胺继续反应;所述的三乙胺、三丙胺或三丁胺与聚合产 物的质量比为20-50,优选15-45,更优选20-40;四苯基乙烯氨基衍生物与聚合产物的质量 比为0 · 3-0 · 9，优选 0 · 3-0 · 8，更优选 0 · 35-0 · 8。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的四苯基乙烯氨基衍生物的结构 式如下：10. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的四苯基乙烯氨基衍生物的制 备方法:将单羟基的四苯基乙烯衍生物与三溴丙胺溶解在N，N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸 钾反应12-14h，反应温度70-78°C，最后在水中沉淀得到产物;其中单羟基的四苯基乙烯衍 生物与三溴丙胺的质量比为〇. 5-0.8，优选0.5-0.75，更优选0.5-0.6;单羟基的四苯基乙烯 衍生物与碳酸钾的质量比为0.3-0.5，优选0.3-0.45，更优选0.3-0.4;单羟基的四苯基乙烯 衍生物与N，N-二甲基甲酰胺的质量比为0.03-0.08，优选0.04-0.08，更优选0.05-0.07，单 羟基的四苯基乙烯衍生物与水的质量比为0.001-0.003，优选0.001-0.002，更优选0.0015-0.002。
【专利摘要】本发明公开了一种具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体的制备方法及其应用。本发明采用可修饰的四苯基乙烯衍生物分子与二溴异丁酰溴进行反应生成带有四个引发位点的星形引发剂；最后通过原子转移自由基活性聚合引发各种单体进行聚合；得到聚合物后再用乙醇胺和带有氨基的四苯基乙烯分子进行开环反应，得到阳离子基因载体。本发明合成的基因载体在HepG2、Hela、C6、COS7、SL、H9C2细胞系中都有较好的转染效率，同时相对于PEI还具优良的细胞成像能力。本发明简单易行，其聚合方法保证了分子量的有效可控，而且相对于一般的阳离子基因载体，本发明制得的基因载体通过亲疏水作用形成胶束，从而增加细胞的转染效率。
【IPC分类】C07C217/18, C07C213/00, C08F120/32, C08F8/32, C08F120/34, C12N15/87, C08F120/54
【公开号】CN105461838
【申请号】CN201511004881
【发明人】徐福建, 祁宇, 俞丙然
【申请人】北京化工大学
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年12月29日