碱-酶解法提取硫酸软骨素钠的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生化制药领域，特别是直接从动物软骨中提取的对心脑血管病等有良 好的效果的硫酸软骨素钠的生产工艺。
【背景技术】
[0002] 硫酸软骨素钠，英文名Chondroitinsulfatesodium，是动物软骨中提取的酸性 粘多糖，多存在于动物的软骨、喉骨、鼻骨(41%)、牛、马中膈和气管中，其分子结构为β-D-葡 萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β1-3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。
[0003]硫酸软骨素钠主要用于治疗风湿和类风湿疾病的药物，还具有抗凝、抗癌、抗血 栓、降血脂等作用，可用于治疗头痛、偏头痛、冠心病、心绞痛等症状。在国外，对硫酸软骨素 钠药理的研究已经达到分子水平。
[0004] 目前国内提取硫酸软骨素钠的方法主要有三种:盐解法、碱解法和酶解法。主要采 用的分离纯化技术有：乙醇沉淀法、离子交换色谱法、纤维素分离法、季铵盐配合法、吸附 法、区带电泳分离法等。在以上的集中提取方法中，收率虽然可以达到很高的水平，但生产 方法都存在很大问题，如盐解法工艺中存在除酸性蛋白调节PH值1-2在产品量大时耗时很 长，硫酸软骨素钠中的氨基易被解离下来，从而影响了收率和质量。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是:提供一种硫酸软骨素钠的提取方法，采用该提取方法不仅能克 服上述现有技术的不足，而且可以降低成本，提高产品质量，缩短生产周期，提高生产效率。
[0006]本发明的技术解决方案是该制备方法包括下列步骤： 1、浸泡:将经预处理洁白干净的动物软骨块置于反应釜中，并加入适量的水，浸泡5-6 小时。
[0007] 2、碱解:将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1:1加水，并按软骨重量的4-6% 加入碱片，搅拌3-5小时。
[0008] 3、酶解:将上述碱解液调PH8.0-8.5，加热至45-50°C，按软骨重量的12-15%加入猪 胰脏，并加入氯化钠，于45-50°C保温3-4小时。
[0009] 4、还原:将上述酶解液，调PH6.5-7.0，加热至65°C，加入软骨重量的1%的连二亚硫 酸钠，搅拌15分钟，静置20分钟后过滤。
[0010] 5、沉淀:将上步所得的滤液降温30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度数达到60 度，沉淀6-8小时。
[0011] 6、复沉:将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置10-12小时。
[0012] 7、脱水干燥：合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成 品。
[0013]本方法的有点及效果:本方法通过对目前工艺的改进创新，采用碱解结合酶解的 方法生产硫酸软骨素钠，优化生产工艺条件:碱解时间为4小时，碱解温度为48°C，猪胰脏用 量为动物软骨重量的14%，酶解时间为4小时，酶解温度为48°C，五种因素中对碱解影响程度 主要为碱解温度，对酶解影响最主要的为猪胰脏用量。整个反应过程PH值在8.0-8.5之间。 此最佳水平组合可使硫酸软骨素钠收率达到35以上或更高。采用新工艺后，大大缩短生产 周期，提高了生产效率，节约生产成本，提高了生产质量。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1 (1) 浸泡:将经预处理洁白干净的动物软骨块l〇〇kg置于反应釜中，并加入适量的水，浸 泡5小时； (2) 碱解:将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1:1加水，并按软骨重量的4%加入碱 片，搅拌3小时； (3) 酶解:将上述碱解液调PH8.0，加热至45°C，按软骨重量的12%加入猪胰脏，并加入氯 化钠，于45°C保温3小时； (4) 还原:将上述酶解液，调PH6.5，加热至65°C，加入软骨重量的1%的连二亚硫酸钠，搅 拌15分钟，静置20分钟后过滤； (5) 沉淀:将上步所得的滤液降温30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度数达到60度， 沉淀6小时； (6) 复沉:将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置10小时； (7) 脱水干燥:合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
[0015] 实施例2 (1) 浸泡:将经预处理洁白干净的动物软骨l〇〇kg块置于反应釜中，并加入适量的水，浸 泡6小时； (2) 碱解:将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1:1加水，并按软骨重量的5%加入碱 片，搅拌4小时； (3) 酶解:将上述碱解液调PH8.5，加热至50°C，按软骨重量的15%加入猪胰脏，并加入氯 化钠，于50°C保温4小时； (4) 还原:将上述酶解液，调PH7.0，加热至65°C，加入软骨重量的1%的连二亚硫酸钠，搅 拌15分钟，静置20分钟后过滤； (5) 沉淀:将上步所得的滤液降温30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度数达到60度， 沉淀7小时； (6 )复沉:将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置11小时； (7)脱水干燥:合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
[0016] 实施例3 (1) 浸泡:将经预处理洁白干净的动物软骨l〇〇kg块置于反应釜中，并加入适量的水，浸 泡6小时； (2) 碱解:将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1:1加水，并按软骨重量的6%加入碱 片，搅拌4小时； (3) 酶解:将上述碱解液调PH8.5，加热至48°C，按软骨重量的14%加入猪胰脏，并加入氯 化钠，于50°C保温4小时； (4) 还原:将上述酶解液，调PH7.0，加热至65°C，加入软骨重量的1%的连二亚硫酸钠，搅 拌15分钟，静置20分钟后过滤； (5) 沉淀:将上步所得的滤液降温30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度数达到60度， 沉淀8小时； (6 )复沉:将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置12小时 (7)脱水干燥:合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。
[0017]将上述3次实施实例生产的硫酸软骨素钠进行分析，结果如下：
【主权项】
1. 一种提取硫酸软骨素钠的方法，其特征在于:是从动物软骨中提取的能完全溶解，旋 光度为-25°至-35°，且其HPLC及CPC含量均大于95%的白色粉末。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于该方法依次包括： (1)将经预处理洁白干净的动物软骨块置于反应釜中，并加入适量的水，浸泡5-6小时； (2 )将浸泡完全的动物软骨，按软骨中重量的1:1加水，并加入软骨重量的4-6%的碱片， 搅拌3-5小时； (3) 将上述碱解液调？!18.0-8.5，加热至45-50°(3，加入软骨重量的12-15%的猪胰脏后， 加入氯化钠，于45-50°C保温3-4小时； (4) 将上述酶解液，调PH6.5-7.0，加热至65°C，加入软骨重量的1%的连二亚硫酸钠，搅 拌15分钟，静置20分钟后过滤； (5) 将上步所得的滤液降温30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度数达到60度，沉淀 6-8小时； (6) 将上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度数达80度，静置10-12小时； (7) 合并沉淀物，加入无水乙醇脱水，干燥后即得所述硫酸软骨素钠成品。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征是在(2)步中加入重量为4-6%的碱片，以增强 硫酸软骨素钠的碱解效果。4. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征是在(4)步中加入重量1%连二亚硫酸钠盐析， 已增强硫酸软骨素钠的沉淀效果。5. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于最佳的碱解温度为48°C。6. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于最佳猪胰脏用量为12-15%干软骨重。
【专利摘要】一种新的硫酸软骨素钠的提取方法，碱-酶解提取硫酸软骨素钠。主要解决目前同列产品生产工艺流程复杂、碱酸或盐用量较大、生产成本较高、提取周期较长、产品质量不稳定、收率较低等问题。该产品主要以动物软骨为原料，经碱解后一步酶解即可把硫酸软骨素钠从动物软骨中提取出，产品色泽洁白、粉末疏松，收率可高达30%以上，且纯度高，符合口服质量标准。具有生产工序简单，周期短、成本低、操作简便易行，同时有助于减轻对环境的污染，有利于环保等特点。
【IPC分类】C08B37/08
【公开号】CN105461827
【申请号】CN201511002245
【发明人】刘乃山, 陆玉梅, 迟培升, 夏衬来
【申请人】青岛九龙生物医药有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2013年11月23日
【公告号】CN103665188A, CN103665188B