基于mci凝胶树脂的姜黄素类新化合物提取分离方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及姜黄素类新化合物的提取技术领域，特别涉及一种基于MCI凝胶树脂 的姜黄素类新化合物提取分离方法。
【背景技术】
[0002] 姜黄是我国传统医学中常用药物之一，具有悠久的应用历史。具有破血行气，痛经 止痛之功。主治胸胁刺痛，闭经，症瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛。近年来，国内外对姜黄植物 的化学成分进行了一定程度的研究，从中分离得到了约十多个不同类型的姜黄素类化合物 [1-4]以及二十多个倍半萜类化合物[5，6]，并对其药理活性进行考察，该类化合物的抗炎 活性、抗氧化活性以及抗肿瘤活性已经引起了广泛的关注，美国FDA目前已将姜黄素列为新 一代的化学预防剂进行深入的临床研究。
[0003] 而在目前的姜黄素类化合物库中，已知的结构和类型仅仅只有10余种姜黄素类化 合物从姜黄植物中分离得到。该类化合物在姜黄植物当中应该存在更多新颖的结构和类 型，相比于姜黄素，新化合物可能具有更加多样和更加显著的药理活性。
【发明内容】
[0004] 本发明针对现有技术的不足，提供一种基于MCI凝胶树脂的姜黄素类新化合物提 取分离方法，以达到针对性分离新化合物目的。
[0005] 为解决以上问题，本发明采用的技术方案如下:一种基于MCI凝胶树脂的姜黄素类 新化合物提取分离方法，包括如下步骤：
[0006] ①以HPLC色谱图为标准，将姜黄药材提取物采用各种柱色谱分离方法初步进行分 段、富集处理，获得不同的馏分；
[0007] ②以植物姜黄中三个主要成份:姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素为基 础，分析其在LC/MS/MS-ESI下的质谱裂解规律，以便了解姜黄素类化合物典型的质谱特征 碎片和裂解行为；
[0008] ③采用LC/MS/MS对馏分逐一进行检测，以②中姜黄素类化合物的质谱裂解规律， 初步推导馏分中所含化合物的结构和类型，以期发现具有新颖结构的姜黄素类化合物；
[0009] ④对发现了新颖结构姜黄素类化合物的馏分段，采用上样的方式不断重复富集到 足够的样品量，最后通过一系列柱色谱方法和检测方法将其分离。
[0010] 作为优选，①的具体步骤如下:将姜黄药材的甲醇提取物分为三个部分进行下一 步分段、富集的研究:Part 1，Part 2,Part 3;采用三种不同的色谱填料，包括:小孔树脂 MCI-GEL为固定分离相，以甲醇、水系统为主要流动相对姜黄的甲醇提取浸膏进行分段、富 集的方法进行筛选;选择MCI-GEL为填料对姜黄药材的甲醇提取物进行不断地分段和富集， 使Part3中的微量化合物累积到足够量以供提取分离。
[0011]作为优选，②的具体步骤如下:在单个化合物质谱裂解规律的基础上，对姜黄素类 化合物的规律和特征裂解碎片进行总结，在(_)ESI_MS/MS模式下，姜黄素的特征性裂解行 为：cur cumin :m/z 367-217-173 [M-Η]-;脱甲氧基姜黄素的特征性裂解行为:DMC:m/z 337-217-173和m/z 337-187-143[Μ-Η]-;双脱甲氧基姜黄素的特征性裂解行为:BDMC: m/z 307-187-143[M-H]-[7,8]。
[0012] 作为优选，④的具体步骤如下：采用小孔树脂分段富集方法对Part3馏分进行富 集，富集得到馏分浸膏共6.5g;采用中压柱层析系统，将6.5g浸膏用0DS反相色谱柱经甲醇： 水系统分为5个洗脱部位:FIII-1为0.5g，FIII-2为1.5g，FIII-3为2g，FIII-4为1.5g和 FII1-5为lg;FII1-4和FII1-5进一步用以甲醇为洗脱液，在Sephadex LH-20凝胶柱色谱上 除杂，得到FII1-4-3为400mg，FII 1-5-3为200mg，FII 1-5-4为20mg;再将三个洗脱部位以 HPLC制备液相在乙腈:水系统中制备分离。
[0013] 本发明的有益效果:一种基于MCI凝胶树脂的姜黄素类化合物提取分离方法，本发 明基于MCI凝胶树脂的吸附能力以及LC/MS液质联用的微量检测能力进行开发，能够快速导 向发现姜黄中微量的新骨架化合物，并通过MCI凝胶树脂进行分离纯化得到单体化合物，具 有导向性强、检测速度快、分离速度快、产品纯度高、分离效率高和易于操作的特点，是一种 快速发现、获得高纯度姜黄素类新化合物的新方法。
【附图说明】
[0014]图1紫外吸收波长下中药姜黄的HPLC分析图谱.Curcumin:姜黄素;DMC:脱甲氧基 姜黄素;BDMC:双脱甲氧基姜黄素；
[0015]图2对姜黄甲醇提取物分段、富集后的HPLC图谱；
[0016] 图3姜黄素的ESI-iK图谱；
[0017] 图4脱甲氧基姜黄素的ESI-M網谱；
[0018] 图5双脱甲氧基姜黄素的ESI-MS图谱；
[0019] 图6姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素的LC/MS质谱裂解规律解析；
[0020] 图7 The MS/MS spectra of Peak lin的（-)ESI-MS质谱裂解图；
[0021] 图8 The MS/MS spectra of Peak 2in的（-)ESI-MS质谱裂解图；
[0022] 图9 The MS/MS spectra of Peak 3in的（-)ESI-MS质谱裂解图；
[0023] 图10 C1-C3的分离纯化路线；
[0024] 图11 C1-C3的化学结构上；
[0025] 图12 C1-C2的Ν0Ε效应图谱。
【具体实施方式】
[0026] 为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下参照附图并举实施例，对 本发明做进一步详细说明。
[0027] 本发明的部分试验目标不在于对姜黄进行全面的系统分离，而是针对性的从中寻 找和发现新颖结构的天然产物，将其分离得到，并进行结构鉴定和抗肿瘤活性的初步筛选。 为了达到针对性分离新化合物目的，相比于传统植化的分离思路，制定新的研究策略。
[0028] ①以HPLC色谱图为标准，将姜黄药材提取物采用各种柱色谱分离技术初步进行分 段、富集处理，获得不同的馏分。
[0029] ②以植物姜黄中三个主要成份：姜黄素（curcumin)、脱甲氧基姜黄素 (demethoxycurcumin)、双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin)为基础，研究其在LC/ MS/MS-ESI下的质谱裂解规律，以便了解姜黄素类化合物典型的质谱特征碎片和裂解行为， 为该类新颖化合物的寻找和发现奠定基础。
[0030] ③采用LC/MS/MS对馏分逐一进行检测，以"②"中姜黄素类化合物的质谱裂解规 律，初步推导馏分中所含化合物的结构和类型，以期发现具有新颖结构的姜黄素类化合物。
[0031] ④对发现了新颖结构姜黄素类化合物的馏分段，采用大量上样的方式不断重复富 集到足够的样品量，最后通过一系列柱色谱方法和检测方法将其分离并进行结构鉴定。
[0032] 基于以上的全新研究策略，以三个原型化合物:姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲 氧基姜黄素的质谱裂解规律为指导，在LCMS/MS的帮助下从姜黄药材提取物中发现了一系 列全新结构姜黄素类化合物，这些化合物具有同姜黄素类一致的母核结构，但整体结构更 为复杂，且在植物中的含量极低，以普通的HPLC分析很难检测到该类化合物的存在。通过应 用各种现代色谱分离技术以及紫外，红外，核磁，质谱等波谱方法，分离并鉴定了 7个全新姜 黄素类化合物。
[0033]第一实验准备部分(现有技术）
[0034] 1.1仪器与药品
[0035] 1.1.1实验仪器
[0036] Agilent 1100高效液相色谱仪(Agilent Technologies，Germany)，配有四元栗溶 剂洗脱系统，自动进样器及紫外检测仪。
[0037] Finnigan LCQ Advantage离子餅质谱仪（Thermo Finnigan,San Jose,CA,USA)， ESI
[0038] 色谱柱：YMC-Pack-〇DS_A C18reversed column(250mmX4.6mmi .d.，5ym)及、
[0039] Agi lent Zorbax SB-C18保护柱（12· 5mmX4.6mm i ·d.，5μηι)
[0040] 核磁共振光谱仪：IN0VA-500(1H-匪R 500MHz，13C-匪R 125MHz)和JE0L J匪-AL300(1H-NMR 300MHz，13C-NMR 75MHz)核磁共振仪(TMS为内标）；
[0041 ]高分辨质谱仪:Bruker APEX IV FT-MS;
[0042]