多糖亚硒酸酯的制法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于砸化多糖技术领域，具体涉及一种多糖亚砸酸酯的制法及其应用。
【背景技术】
[0002]多糖类是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物大分子，具有抗感染、免疫促进、肿瘤防治、病毒性肝炎、类风湿症、艾滋病等免疫损伤或免疫缺损症和抗氧化等多方面功能和生物活性。影响多糖生物学活性的结构因素包括多糖的主链性质、支链性质和多糖分子的高级结构，其中多糖主链的糖单元组成、糖苷键类型均直接决定多糖的活性，多糖支链的类型、聚合度、支链在多糖链上的分布及其取代度决定了多糖的活性大小，多糖分子的高级结构如链的柔韧性和空间构像与多糖的活性紧密相关。为提高多糖的生物活性，多糖的分子修饰和结构改造具有重要意义。近年来，有关多糖的分子修饰研究已大有进展。利用糖残基上的羟基、羧基、氨基等基团运用化学方法进行修饰，有可能提高多糖的活性。修饰的方法很多，有硫酸化、羧甲基化、砸化、甲基化、氧化、部分水解、磷酸酯化、双基团衍生化等。
[0003]砸元素是生命活动的必需元素，其存在形式有无机砸和有机砸两种，常见的无机砸有亚砸酸钠和砸酸钠，有机砸主要是砸蛋白和砸多糖。砸能构成若干氧化酶的活性中心，可增强机体的抗氧化能力和对相关疾病的抵抗能力，这说明了砸与人体健康的直接关系。多糖具有多种生理功能，与抗衰老、防治癌症等密切有关。无机砸具有蓄积性毒性和致突变作用，使用时剂量难以控制，而有机砸的毒性低，副作用小，不但能够更好地发挥砸的作用，而且在激发免疫反应上比无机砸显著，因此，将无机砸与多糖有机结合使之转化为有机砸化合物砸多糖，将会使砸和多糖的生理和药理功能得到优化。
[0004]随着生活水平地提高，各个保健食品公司、医药公司开发的富砸食品、富砸药品已成为了热潮。近年来关于富砸的产品和专利也出现了许多。如公开号:CN1038454A，砸化卡拉胶的制法。该方法是以砸粉为原料，用硝酸将其溶解制备成浓度为0.5-1.0mg/ml的砸液，在将其加入到浓度为0.5-5%的卡拉胶中，再加入Kappa-角叉菜胶或Lambda角叉菜胶溶胶溶液，进行砸化反应，在经过乙醇沉析后得到粗品砸化卡拉胶。该方法制备的砸化卡拉胶，砸含量较低，并且在制备方法上使用砸粉和浓硝酸可以生成如砸化氢等有毒的负产物。专利公开号CN1069495，专利名称为砸多糖其制造方法。该方法通过发酵制备富砸酵母，再经过分离提取，加碱匀浆、中和、浓缩、乙醇沉淀等制成。该方法制备繁琐，得到的砸含量也很低。而多糖亚砸酸酯的制备是通过亚砸酸根取代多糖硫酸酯的硫酸酯基团实现(CN1288899A)，导致多糖亚砸酸酯的砸含量除了受反应条件限制，还受多糖硫酸酯的硫酸酯基团含量控制，导致这一方法制备多糖亚砸酸酯的砸含量偏低，其最大砸含量为12.5%
【发明内容】
[0005]针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种多糖亚砸酸酯的制法，将砸化试剂与在糖单元的羟基直接发生反应，而不用通过取代硫酸酯基团，制备的多糖亚砸酸酯的最高砸含量可达45%。
[0006]本发明采用的具体技术方案如下:
[0007]—种多糖亚砸酸酯的制法，其特征是本质上由多糖或糖复合物和砸化试剂反应制得。
[0008]所述的砸化试剂为卤氧化砸，化学式为:SeOX2，X为氟、氯、溴中的一种；或者砸化试剂为含有卤氧砸结构的化合物，化学式为:_SeOX，X为氟、氯、溴中的一种；砸化试剂与多糖中羟基基团的投料摩尔比为1: 0.1-20。
[0009]所述的多糖亚砸酸酯的制法，其特征是，包括下列步骤:
[0010](I)砸化反应:将多糖、砸化试剂加入吡啶中，在-15-110°C下，反应0.1-100小时，
然后加入水，反应液自然升温/降温至室温；
[0011](2)沉淀:按反应液的1-10倍体积量将沉淀剂加入反应液，搅拌，过滤，然后用沉淀剂洗涤滤出物，将滤出物干燥；将滤出物溶解，用NaOH溶液调节溶液pH为7?8，再加入沉淀剂，过滤，然后用沉淀剂洗涤滤出物，将产物干燥；沉淀剂是乙醇、甲醇、丙酮中的一种或其中几种的任意比例混合物；
[0012](3)按需要精制成多糖亚砸酸酯精品，将(2)中的产物溶解，透析，按需要精制成各种的多糖亚砸酸酯精品。
[0013]反应可以加入催化剂，催化剂是亚砸酸酯，化学式为=R1OSeOOR2, R1, &为H，或C1-C1。烷基；催化剂与多糖中羟基基团的投料重量比为1: 0.0001-10。
[0014]所述的多糖亚砸酸酯，其特征是物化性质如下:
[0015](I)溶解性:能溶于水，而不溶于乙醇、丙酮有机溶剂；
[0016](2)平均含砸量:含砸量为0.1-45% ；
[0017](3)光谱:①紫外光谱:在波长255nm附近处有特征吸收峰；
[0018]②红外光谱:在波长900cm 1左右有中强度的伸缩振动特征吸收峰。
[0019]多糖亚砸酸酯在制备抗癌药物中的应用。
[0020]多糖亚砸酸酯在制备抗氧化药物中的应用。
[0021]本发明具有的有益效果在于:
[0022]I)本发明制备的多糖亚砸酸酯化合物的技术与其它的方法相比，不再通过亚砸酸根取代多糖硫酸酯的硫酸酯基团，本发明的砸化试剂与糖单元的羟基发生反应，生成多糖亚砸酸酯，产品得率和质量均比其它的方法高。
[0023]2)利用本发明的多糖亚砸酸酯的制法，制备的多糖亚砸酸酯多糖，其最高砸含量可达45 %。然而目前有文献报道:砸化多糖的最高砸含量为12.5%。
[0024]3)在分子结构中引入亚砸酸根，其中砸是正四价，砸是处于中间价态，既可以被氧化也可以被还原，因此本发明的多糖亚砸酸酯在人体内具有广泛的生理功能。
【具体实施方式】
[0025]实施例1 MTT法体外检测多糖亚砸酸酯抗癌药敏试验:
[0026]对数生长期细胞，用含10 %胎牛血清的RPM1-1640培养基稀释为2.0 X 106个.mL-1，接种于96孔板中，每孔100 μ L，之后依次加入待测药物、阴性对照组、阳性对照组，并保留仅加培养基的空白组。随后在37°C、5% C02的培养箱中连续培养24h，然后每孔加入5mg.mL-1的MTT溶液10 μ L，连续培养4h。吸去上清液，每孔加入DMSO 100 μ L，在570nm波长处用酶标仪测吸收度(A)值。用下面的公式计算细胞增殖抑制率，并利用公式T/