盐酸伊托必利的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了盐酸伊托必利的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的盐酸伊托必利的药物组合物中含有盐酸伊托必利和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，盐酸伊托必利、化合物(Ⅰ)单独作用时，对胆囊炎胆石症具有治疗作用；盐酸伊托必利和化合物(Ⅰ)联合作用时，对胆囊炎胆石症的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗胆囊炎胆石症的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
盐酸伊托必利的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及盐酸伊托必利的新用途，具体涉及盐酸伊托必利 的药物组合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 盐酸伊托必利临床用于缓解功能性消化不良的各种症状，如上腹部不适、餐后饱 胀、食欲缺之、恶心、呕吐等。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种盐酸伊托必利的药物组合物，该药物组合物中含有盐 酸伊托必利和一种结构新颖的天然产物，盐酸伊托必利和该天然产物可以协同治疗胆囊炎 胆石症。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0007] -种盐酸伊托必利的药物组合物，包括盐酸伊托必利、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将香加皮粉碎，用65~75%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物用 大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱9个柱体积，再用65 %乙醇洗脱10个柱体积，收集65 %洗 脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到 化合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用70%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012]进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗胆囊炎胆石症的药物中的应用。
[0015] 上述盐酸伊托必利的药物组合物在制备治疗胆囊炎胆石症的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的盐酸伊托必利的药物组合物中含有盐酸伊托必利和一种结构新颖 的天然产物，盐酸伊托必利、化合物（I)单独作用时，对胆囊炎胆石症具有治疗作用;盐酸伊 托必利和化合物（I)联合作用时，对胆囊炎胆石症的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗 胆囊炎胆石症的药物。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020]分离方法：（a)将香加皮(2kg)粉碎，用70%乙醇热回流提取（15LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗脱 10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1 (9个柱体积）、35:1 (10个柱体积）、15:1 (8 个柱体积)和7:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4 用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(6个柱体积）、7:1(7个柱体积)和1:1(6个柱 体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?^]+为111/2 457.2206，结合核磁特征可得分子式为 C24H34〇7，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，CDC1 3，500MHz):H-la( 1 · 19，m)，H-lb (1.32，m)，H-2a(1.82，m)，H-2b(1.90，m)，H-3(5.86，s)，H-5(2.13，m)，H-6a(2.24，m)，H-6b (2.86，d，J=12.9Hz)，H-9(2.17，m，2H)，H-12(1.83，s)，H-13(2.01，s)，H-14(0.95，s)，H-15 (1.54，s)，H-4'（2.26，s)，H-5'（2.32，s)，4-Ac0(1.92，s)，3'-Ac0(1.95，s);核磁共振碳谱 数据 Sc(ppm，CDCl3，125MHz):32.4(CH2d-C)，22.6(CH2,2-C)，74.3(CH，3-C)，82.4(C，4-C)， 45.5(CH，5-C)，25.8(CH2,6-C)，130.2(C，7-C)，201.1(C，8-C)，59.8(CH2,9-C)，35.5(C，10-C)，145.3(C，11-C)，22.6(CH 3，12-C)，23.8(CH3，13-C)，18.4(CH3，14-C)，17.2(CH3，15-C)， 167.3(C，1'-C)，104.6(C，2'-C)，155.8(C，3'-C)，16.8(CH3,4'-C)，10.7(CH3,5'-C)，170.1 (C，4-Ac0)，22.3(CH 3,4-Ac0)，169.6(C，3'-Ac0)，21.3(CH3,3'-Ac0)。红外波谱中的 1715cm -1与1680cm-1吸收带表明结构中存在羰基与双键片段。13C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有24 个碳信号，包括八个甲基(两个乙酰甲基），四个亚甲基，两个次甲基（一个连氧碳），以及十 个季碳（四个羰基碳，四个烯烃碳和一个连氧烯烃碳）。以上功能结构再结合不饱和数表明 该化合物为双环结构。1H-NMR谱结合HSQC谱显示六个甲基质子信号δΗ 1.83(3H，s)、2.01 (3H，s)、0.95(3H，s)、1.54(3H，s)、2.26(3H，s)、2.32(3H，s)，两个乙酰基甲基质子信号 δΗ 1.92(3!1，8)与1.95(3!1，8)，一个连氧次甲基质子信号6115.86(1!1，8);以上匪1?数据可以确 认该化合物为阔苞菊酮衍生物，HMBC谱中Η 3-12与C-11、H3-13与C-11、H3-14与C-10以及Η3-15与C-4的相关信号可以归属为阔苞菊酮上的甲基片段，C-3位质子信号移向低场说明C-3 羟基被酯化，而通过HMBC谱中的Η-3与C-Γ相关信号得到进一步确认。HMBC谱中Η 3-4 '与C-3 '、Η3-5'与C-2'和C-Γ以及3 ' -AcO与C-3 '的相关性可以确认结构中存在3 ' -乙酰基-2' -甲 基-2'-丁烯酰氧基边链结构，而质子信号δΗ 2.26(3H，s)以及2.32(3H，s)可以归属为H-4' 的甲基信号与H-5 ' 的甲基信号。N0ESY谱中Hfs-1/H3-14，Hfs-l/H-3，H-3/H3-15以及H3-14/H3-15的相关信号表明H-3，H 3-14和H3-15在阔苞菊酮骨架的同侧，并且Ηα-1/Η-5的相关信号暗 示Η-5在Η-3和Η 3-14的异侧。该化合物的相对构型进一步通过X-单晶衍射确，C-3位的绝对 构型通过酸解反应与Mosher法可以确认为R构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及 文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验 确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0023] 实施例2:药理作用
[0024] 本实施例使用胆总管不全结扎及胆囊内注入大肠杆菌的方法制备胆囊炎胆石症 兔模型，观察药物降低局部组织TNF-a、i3_EP含量、降低胆汁粘滞度等方面的抗胆囊炎胆石 症作用。
[0025] 1、材料与方法
[0026] 1.1动物
[0027]选3月-4月龄的健康家兔，体重1.3kg_l. 9kg，由湖南医科大学动物学部提供并饲 养。
[0028] 1.2试剂与样品
[0029] 盐酸伊托必利购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 UTNF放免试剂盒由北京东亚生物技术研究所提供，EP放免试剂盒由北京海科锐生物技术 中心提供。大肠杆菌由湖南省卫生防疫站提供，由中南大学湘雅医院交叉感染科培养并提 供5 X 106/L的大肠杆菌菌液。
[0030] 1.3仪器
[0031]血液流变学LGR-80系列血液粘度测试仪(锥板式）由北京世帝科学仪器公司提供。 [0032] 1.4兔分组及模型制备
[0033] 兔随机分为6组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(龙胆泻 肝汤组，50mg · kg-0和盐酸伊托必利组(80mg · kg-4、化合物（I)组(80mg · kg-〇、盐酸伊托 必利与化合物（I)组合物组【40mg · kg<盐酸伊托必利+40mg · kg<化合物（I)】。正常对照 组:进行假手术，并每日灌胃蒸馏水;模型对照组:进行造模手术，并每日灌胃蒸馏水;龙胆 泻肝汤组:进行造模手术，并每日灌胃龙胆泻肝汤；其余组:进行造模手术，并每日灌胃上述 剂量的药物。给药时间是从手术后d2开始，每日上午09:30/10:30给药1次，共7d。
[0034]造模手术:在兔胆总管外沿胆总管方向放入12#针头，用1#丝线结扎后拔出针头，造 成胆总管局部狭窄。再暴露胆囊，在体部进针，注入O.lmL浓度5X106 · Γ1的大肠杆菌菌液。 结扎针口，缝合切口肌肉皮肤。
[0035] 1.5胆汁粘度测定实验
[0036] 各组家兔观察治疗7d后处死.抽取胆汁lmL测胆汁粘度。
[0037] 1.6肿瘤坏死因子(TNF-α)及β-内啡肽(β-ΕΡ)测定实验
[0038] 剥离胆囊，取胆囊组织干燥后称重200mg左右，加 lmL生理盐水均浆。均浆后 4000r · min-1离心20min，提取上清液拟测肿瘤坏死因子(TNF-a)及β-内啡肽(β-ΕΡ)。
[0039] 1.7统计学方法
[0040]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以Ρ<0.05为差异有统计学意义。
[0041 ] 2、实验结果
[0042] 2.1对胆囊炎胆石症模型兔胆汁粘滞度的影响
[0043]与正常对照组比，模型对照组兔胆汁粘滞度明显升高（Ρ<0.01);与模型对照组 比，盐酸伊托必利与化合物（I)组合物组和阳性对照组兔胆汁粘滞度明显降低(ρ<0.01); 与模型对照组比，盐酸伊托必利组、化合物（I)组兔胆汁粘滞度降低(Ρ<〇.05)。结果见表1。
[0044] 2.2对胆囊炎胆石症模型兔TNF-a、β-ΕΡ的影响
[0045] 与正常对照组比，模型对照组兔的TNF-a、β-ΕΡ明显升高(Ρ<0.01)。与模型对照组 比较，盐酸伊托必利与化合物（I)组合物组和阳性对照组TNF-a、β-ΕΡ显著降低(Ρ<0.01); 与模型对照组比较，盐酸伊托必利组、化合物（I)组TNF-aj-EP降低(Ρ<0.05)。
[0046] 试验结果见表1。
[0047] 表1对胆囊炎胆石症模型兔胆汁粘滞度和TNF-a、β-ΕΡ含量的影响
[0048]
[0049] 胆囊炎胆石症的发病原因主要为胆汁淤积和细菌感染。因此在胆囊炎胆石症的动 物模型中，这也是两个关键性因素。
[0050] 上述结果表明，盐酸伊托必利、化合物（I)单独作用时，对胆囊炎胆石症具有治疗 作用；盐酸伊托必利和化合物（I)联合作用时，对胆囊炎胆石症的治疗效果进一步提高，可 以开发成治疗胆囊炎胆石症的药物。
[0051] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)， -零.P2. -种盐酸伊托必利的药物组合物，其特征在于:包括盐酸伊托必利、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸伊托必利的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸伊托必利的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、□服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将香 加皮粉碎，用65~75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗脱 10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1和 1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用70%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗胆囊炎胆石症的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的盐酸伊托必利的药物组合物在制备治疗胆囊炎胆石症的 药物中的应用。
【文档编号】C07C67/48GK105884617SQ201610335397
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月15日
【发明人】刘雨
【申请人】刘雨